Анализ плоскостной хроматограммы
Рис. 24.3. Примерный вид плоскостной хроматограммы
|
Разделяемые компоненты образуют на хроматографической пластинке или полоске хроматографической бумаги отдельные зоны (пятна). Примерный вид плоскостной хроматограммы показан на рис. 24.3. Зоны окрашенных веществ можно обнаружить визуально. Для обнаружения неокрашенных соединений используют физические (например, облучение УФ-светом), химические (обработка хроматограммы различными реагентами-проявителями), а в некоторых случаях и биологические методы.
Некоторые из реагентов, используемых для проявления хроматограмм, показаны в табл. 24.2.
Табл. 24.2.
Некоторые реагенты-проявители, используемые в
плоскостной хроматографии
| Реагент | Обнаруживаемые вещества | Аналитический эффект |
| Нингидрин | Аминокислоты, пептиды, первичные амины | Синее (пурпурное, коричневое и др.) окрашивание |
| Реактив Драгендорфа K[BiI4] | Третичные амины и четвертичные аммониевые соединения | Тёмно-оранжевые пятна на жёлтом фоне |
| Раствор SbCl3 в хлороформе | Стероиды | Фиолетовое окрашивание |
| FeCl3 | Фенолы, легкоокисляющиеся вещества (анальгин, амидопирин и др.) | Сине-фиолетовое, красно-фиолетовое и др. окрашивание на жёлтом фоне |
| 2,4-Динитрофенилгидразин | Альдегиды, кетоны | Жёлтое окрашивание, переходящее в красно-коричневое при обработке 10%-ным NaOH |
Положение отдельных хроматографических зон на хроматограмме характеризуют с помощью величины Rf, равной отношению расстояния, пройденного зоной вещества от стартовой линии до центра зоны (x), к расстоянию от стартовой линии до границы фронта растворителя к концу опыта (L)
Величина Rf может принимать значения от 0 до 1. Если Rf = 0, то вещество остаётся на старте, если Rf = 1, то оно поднимается с фронтом растворителя. Величина Rf является качественной хроматографической характеристикой вещества. Она зависит от природы вещества, подвижной и неподвижной фазы, условий хроматографирования и, в определённых пределах, не зависит от концентрации вещества.
Подвижность разделяемых веществ можно также сравнить с подвижностью вещества, принятого за стандарт
Величина Rf связана с коэффициентом распределения вещества (D) и коэффициентом емкости неподвижной фазы по отношению к данному веществу ( 
) следующими уравнениями:
Рис. 24.4. Расчёт эффективности разделения в плоскостной хроматографии
|
Для того чтобы оценить эффективность разделения в плоскостной хроматографии, измеряют расстояние от стартовой линии до нижнего края пятна данного вещества 
и расстояние от нижней до верхней границы этого пятна (w) - рис. 24.4. Число теоретических тарелок (N) и высоту эквивалентную теоретической тарелке (H) рассчитывают по формулам:
Коэффициент разделения (a) и разрешение (RS) в плоскостной хроматографии рассчитывают следующим образом:
