Производства живой сухой вакцины против рожи свиней

Современная промышленная технологическая линия

ВАКЦИН И ДИАГНОСТИКУМОВ

Тема 7. ПРОИЗВОДСТВО ПРОТИВОБАКТЕРИАЛЬНЫХ

из штамма ВР-2(ОАО Омский биокомбинат, Ставропольская биофабрика).

Промышленная технология производства представлена на примере живой сухой вакцины из штамма ВР-2 против рожи свиней.

При культивировании штамма ВР-2 в биореакторе его биологические свойства не изменяются и соответствуют требованиям инструкции или регламента.

Термическая стерилизация питательной среды (125 °С) удлиняет время культивирования и уменьшает концентрацию микробных тел возбудителя рожи свиней.

В процессе хранения каждой серии жидких вакцин из штамма ВР-2 значительная часть микробных клеток отмирает. Лиофилизированные вакцины более стандартны, так как имеют в прививной дозе определенное количество микробных тел. Известно, что препараты с мелкими частицами сорбента более иммуногенны, чем препараты с крупными частицами (хлопьями).

Уплотнение частиц приводит к тому, что антиген, связанный с сорбентом, не усваивается организмом и не обеспечивает создание длительного и напряженного иммунитета.

Современная промышленная технология производства вакцины из штамма ВР-2 учитывает недостатки ранее существующей технологии по составу питательной среды и методу их стерилизации, среде высушивания режимов культивирования и концентрирования.

Штамм. Эталонный сухой стандартный заражающий Erysipelothrix rhusiopathiae вакцинный штамм ВР-2 возбудителя рожи свиней получают в высушенном виде в ампулах из ВГНКИ.

Питательная среда. Культивирование штамма Erysipelothrix rhusiopa-thiae ВР-2 при производстве вакцины против рожи свиней осуществляется на питательной среде на основе перевара Хоттингера и печеночного экстракта с содержанием следующих компонентов: пептон; сухой дрожжевой экстракт; NaCl; KH₂ PO₄; Твин-80; глюкоза; нормальная сыворотка крупного рогатого скота; L-аргинин.

Среда высушивания. При изготовлении живой сухой вакцины против рожи свиней из Erysipelothrix rhusiopathiae ВР-2 при сублимационной сушке используется среда высушивания на основе фосфатно-буферного раствора с содержанием следующих компонентов: желатин, пептон, сахароза.

Блок-схема технологической линии производства вакцины против рожи свиней приведена на рис. 5.

 

 

 

Рис. 5. Блок-схема техно-

логии производства вак-

цины против рожи свиней

(И.В. Тихонов, 2005)

 

Для промышленного культивирования используют вакцинный штамм

ВР-2 (1). Культивирование матровой расплодки осуществляется на мясо-пептонном бульоне (2) в 100 мл флаконах (по 2 флакона на 1 ампулу (3), затем пересевают в 100 мл флаконы с полужидким МПБ. Культуру посевной серии пересевают в 3-х л бутыли (4).

Посевную культуру (4) засевают в простерилизованный биореактор (6), в который предварительно подают питательную среду на основе перевара Хоттингера (11): перевар Хоттингера - 25 - 30%; печеночный экстракт - 5%; пептон - 5%; сухой дрожжевой экстракт 0,5%; NaCl - 0,2%; KH₂ PO₄ - 0,3%;

Na₂HPO₄ - 1,8%; Твин-80 -0,05%; глюкоза - 0,2%; нормальная сыворотка крупного рогатого скота - 2%; L-аргинин - 0,05%; дистиллированная вода до 100%.

Концентрация пептона в предлагаемой среде составляет 5%, что позволяет обеспечить бактерии рожи источником азота, который необходим для синтеза белковых соединений и формирования протоплазмы.

В состав среды в качестве источника углерода вводится глюкоза, которая при расщеплении в форме АТФ используется микроорганизмами как источник энергии.

Кроме того, для улучшения ростовых свойств питательной среды добавляется аминокислота L-аргинин и нормальная сыворотка крупного рогатого скота (КРС).

Для сохранения ростовых свойств питательной среды используется метод холодной стерилизующей фильтрации с применением патронного микрофильтра (5) типа КФО-1 («Карлсон Форд», Англия) с фильтрующим материалом, состоящим из композита целлюлозы с минеральными волокнами.

В биореактор (6) загружают питательную среду из расчета 2/3 рабочего объема биореактора, а засевная доза составляет 3 - 5% к объему питательной среды.

Глубинное культивирование проводят при температуре (36 ± 0,5) в течение 20 - 22 ч при постоянном перемешивании (100 - 150 об/мин), что обеспечивает поддержание парциального давления растворенного кислорода (рО₂) на уровне 40 - 50 % от насыщения. После окончания культивирования в отдельно взятой пробе из биореактора определяют оптическую концентрацию культуры, которая должна находиться в пределах (7 ± 2) млрд/мл.

Затем в биореактор с культуральной жидкостью добавляют среду высушивания из расчета 1:4 на основе фосфатно-буферного раствора (7).

Для повышения качества и сроков хранения сублимационно высушенной противорожистой вакцины концентрация пептона, как одного из наиболее термозащищающих веществ, доводится до 15%. Концентрация желатина, обладающая меньшими защитными свойствами, с целью снижения количества, балластных веществ уменьшена до 4 %. Для повышения стабильности вакцины при высушивании и хранении концентрация сахарозы увеличена до 20%.

Применение предложенной среды высушивания позволяет повысить выживаемость культуры бактерий рожи при сушке до 70 - 75% и увеличить сроки хранения с 6 месяцев до 1 года.

Среду высушивания перемешивают с культуральной жидкостью при 200 - 300 об/мин в течение 15 мин. После этого бактериальную суспензию перекачивают в емкость для расфасовки, выдерживают при температуре (6 ± 2) °С в течение 1-3 сут, до получения предварительных результатов исследований на чистоту культуры (8). После этого ее передают на фасовку в 20 мл флаконы (9), а затем - на лиофилизацию (10).

Аппаратурно-технологическая схема линии производства живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 приведена на рис. 10.2.

Контроль вакцины. Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 живая сухая должна соответствовать требованиям технических условий и изготовляться согласно «Инструкции по изготовлению и контролю вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 живой сухой».

По физико-химическим и биологическим свойствам вакцина должна соответствовать требованиям и нормам.

Упаковка и маркировка. Бактериальную культуру вакцинного штамма

ВР-2 после контроля типичности и чистоты роста, соединенную в соотношении 1:1 - 1:4 со средой высушивания, расфасовывают по 10 см³ ± 3% в чистые стерильные флаконы вместимостью 20 мл, установленные в кассеты, предварительно укупоривают пробками УJI-1, подвергают замораживанию и лиофилизации.

Показатели качества вакцины приведены в табл. 11 Таблица 11.

Показатели качества вакцины (И.В. Тихонов, 2005)

Наименование показателя	Характеристика и норма
Внешний вид	Сухая мелкопористая масса
Цвет	Беловато-желтый
Наличие посторонней примеси, плесени, следов оттаивания, трещин флаконов	Не допускается
Растворимость	Вакцина должна полностью растворяться в физиологическом растворе в течение 1-3 мин.
Массовая доля влаги, %	1,6 – 4,0
Контаминация посторонней микрофлорой и типичность роста	Вакцина не должна быть контаминирована посторонней микрофлорой. При посевах на МПА через 24 – 48 ч вакцинный штамм должен расти с образованием бесцветных, гладких, прозрачных колоний на МПБ через 24 ч – равномерное помутнение
Количество доз во флаконе	25, 50, 100, 150, 200 доз в одном флаконе из расчета 200 млн в 1 мл микробных клеток в одной иммунизирующей дозе
Погрешность фасования, %	±3
Безвредность	Вакцина должна быть безвредной
Иммуногенная активность	Вакцина должна быть иммуногенной
Массовая доля кислорода, % не более	1,0

 

Окончательное укупоривание флаконов осуществляется с помощью прижимной плиты в атмосфере азота. После этого флаконы с вакциной закатывают колпачками.

На флаконы с вакциной должны быть наклеены этикетки с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, номера серии и контроля, дозы препарата, даты изготовления, срока годности.

Статистические показатели промышленного производства сухой живой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 по 30 сериям приведены в табл.12.

Широкое распространение возбудителя в природе является одной из существенных сторон его биологии, что обусловливает возникновение заболевания почти повсеместно в виде спорадических случаев и эпизоотических вспышек, представляя в отдельных хозяйствах серьезную проблему.