Сальмонеллы
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выделение и идентификация ЭПКП.
Материал для исследования:
1. Испражнения
2. Рвотные массы
При необходимости исследуют отделяемое нома и зева, гной из уха. Кровь, мочу, кусочки органов трупа.
При возникновении очага заболеваний колиэнтеритом исследуют пищевые продукты, смывы с рук обслуживающего персонала, игрушек и др. предметов.
Способы сбора материала.
Испражнения – 3-5 г испражнений помещают в пробирку с изотоническим раствором натрия хлорида или 30% глицериновой смесью. Целесообразно брать последние порции кала, так как при колиэнтеритах поражается тонкий кишечник. У грудных детей материал для исследования берут с пеленок.
Рвотные массы 0 3-5 г собирают в стерильную посуду и эмульгируют в изотоническом растворе натрия хлорида
Примечание: чем раньше от начала заболевания исследуют испражнения, тем вероятнее возможность выделения возбудителя.
К этому роду семейства энтеробактерий относится более 2000 различных бактерий, вызывающих заболевания человека и животных. Эти заболевания называют сальмонеллезами. Сальмонеллы сходны по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам, но отличаются по антигенной структуре.
Сальмонеллы делят на монопатогенные и полипатогенные. К первым относятся возбудители брюшного тифа, паратифа А и В. этими заболеваниями болеет только человек. Ко второй группе относятся возбудители заболеваний, поражающие человека и животных.
S.turhi впервые были обнаружены Эбертом (1880) в органах человека, погибшего от брюшного тифа. Ашар и Бансод (1886) при заболеваниях, сходных с брюшным тифом, выделили из гноя и мочи больных бактерии, отличающиеся по биохимическим и серольгическим свойствам от возбудителей брюшного тифа. Их назвали S.Paratuphi A и S.Paratuphi В. Почти одновременно американский ученый Д. Сальмон (1885) впервые описал возбудителей холеры свиней. В дальнейшем было описано множество сходных бактерий, объединенных в род Сальмонелла, названного по имени ученого, их описавшего.
Морфология. Все сальмонеллы мелкие, 1,0-3,0х0,6-0,8 мкм палочки с закругленными концами. Грамотрицательны. Подвижны, перетрихи. Спор и капсул не образуют.
Культивирование. Сальмонеллы – факультативные анаэробы. Они не требовательны к питательным средам. хорошо растут на МПА и МПБ при 37оС и рН среды 7,2-7,4. На МПА образуют нежные, полупрозрачные, слегка выпуклые, блестящие колонии, в МПБ -–равномерное помутнение.
При первичном посеве материала от больных часто отмечают медленный рост сальмонелл. Для их накопления производят посев на среды обогащения: селенитовый бульон, среду Мюллера, Среду Кауфмана. Используют также элективные среды: Желчь (10-20%) и среду Раппопорт.
На дифференциально-диагностических средах Эндо, ЭМС, Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, так как не расщепляют лактозу, входящую в состав среды. На висмут-сульфитном агаре через 48 ч они образуют колонии черного цвета, оставляющие след после того, как их снимают петлей (кроме сальмонелл паратифа А).
У свежевыделенных культур S.Paratuphi В после инкубации в термостате в течение 18-20 ч и выдерживания при комнатной температуре 1-2 сут на периферии колонии образуется слизистый вал.
Ферментативные свойства. Сальмонеллы расщепляют глюкозу, маннит, мальтозу с образование кислоты и газа. Исключение являются возбудители брюшного тифа, которые расщепляют эти сахара только до кислоты. Сальмонеллы не ферментируют лактозу и сахарозу. Протеолитические свойства: большинство сальмонелл расщепляет белковые среды с образованием сероводорода. Индол не образуют. Желатин не разжижают.
Токсигенность. Сальмонеллы содержат эндотоксин – липополисахариднопротеиновый комплекс.
Антигенная структура и классификация. Еще вначале ХХ века ученые заметили различную природу антигенов сальмонелл. Кауфман на основании результатов реакции агглютинации разных сальмонелл с набором сывороток разделил все сальмонеллы на группы и типы и предложил диагностическую схему их антигенной структуры. В соответствии с этой схемой в настоящее время производят идентификацию сальмонелл.
Сальмонеллы содержат два антигенных комплекса: О и Н-антиген – липополисахариднопротеиновый комплекс; он термостабилен, инактивируется под действием формалина. Н-антиген связан Содержание темы жгутиками, имеет белковую природу: он термолабилен, инактивируется под действием спирта и фенола, но устойчив к воздействию формалина.
Все сальмонеллы разделены на О-группы, каждая из которых характеризуется наличием определенных О-антигенов: основного, обозначенного арабской цифрой (2,4,7 и т.д.), и дополнительных, общих для нескольких О-групп. В настояшее время известно более 60 О-групп, обозначаемых прописными буквами латинского алфавита (А, В, С, Е и т.д.).
S.tuphi содержит. Кроме того, Vi-антиген, который расположен в микробной клетке более поверхностно, чем О-антиген, и препятствует агглютинации культуры с О-сывороткой. Этот антиген термостабилен. Его присутствие связывали с вирулентностью возбудителя. Vi-антиген содержится также к клетках S.Paratuphi С.
Н-антигены сальмонелл имеют две фазы. Сальмонеллы различных серовариантов одной О-группы имеют различную первую фазу Н-антигена, которую обозначают строчными буквами латинского алфавита. Вторую фазу Н-антигена обычно обозначают арабскими цифрами и строчными латинскими буквами. Сочетание различных О- и Н-антигенов определяет антигенную структуру культур и их название.
В практической работе для определения антигенной структуры сальмонелл используют адсорбированные монорецепторные агглютинирующие сыворотки, которые содержат антитела к одному антигену. Ставят реакцию агглютинации на стекле и по наличию агглютинации с определенными сыворотками характеризуют антигенную структуру выделенной культуры.
Имеются наборы специфических сальмонеллезных фагов, которые лизируют только сальмонеллы соответствующего фаговара.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Сальмонеллы довольно устойчивы. При температуре 100оС погибают мгновенно, при 60-70оС – за 10-15 мин. Они хорошо переносят низкую темперутуру, могут сохраняться в чистой воде и льду в течение нескольких месяцев; в копченом и соленом мясе – до 2 мес. Устойчивы к высыханию, длительно хранятся в пыли.
Под действие дезинфицирующих веществ погибают в течение нескольких минут.
Восприимчивость животных. Большинство сальмонелл вызывает заболевания человека и многих животных и птиц.