Выделение и идентификация культур S. hyodysenteriae

Культивирование. Возбудитель является анаэробом, растет в атмосфере, обогащенной СО₂ или N₂ 10% СО₂ температурный оптимум 42°С, при 30°С не растет, опти­мум рН питательных сред 7,0-7,2. Лучше растет на жидких средах с ОКВП выше 125 мВ и рН 6,9. Требует для роста холестерол, поэтому в среды добавляют бычий сывороточный альбумин или сыворотку крови. Поскольку исследуемый материал со­держит другие анаэробные контаминанты, то для первичной изоляции обыч­но используют плотные элективные среды с добавлением крови, так как по гемолитической активности ориентировочно можно дифференцировать S.hyodysenteriae и S. innocens, например кровяной агар на триптиказо-соевой основе или на базе перевара Хоттиигера.

Для культивирования (субкультивировапия) можно использовать жид-кую или полужидкую среды, содержащие сердечно-мозговую вытяжку и 10% эмбриональной телячьей или кроличьей сыворотки.

Исследуемый материал суспензирут в стерильном забуференном физио­логическом растворе 1:10, крупные частицы осаждают слабым центрифу­гированием или отстаиванием взвеси (20-30 минут). Надосадочную жидкость засевают на питательные среды в настольном боксе, освобожден­ном от кислорода. Рекомендуется для осво­бождения от контаминантов жидкость перед посевом последовательно пропускать через фильтры с уменьшающимся диаметром пор: 0,8-0,65- 0,45 мкм.

Культивирование осуществляют в анаэростатах типа ЛП-115, Лабор МИМ (Венгрия), вакуумных термостатах, заполненных газовой смесью, состоящей из 80% Н₂ и 20% СО₂, при 42°С в течение 48-72 часов.

Возможен несколько иной вариант выделения серпулин. В агаровой среде в чашке Петри вырезают углубление диаметром 2-10 мм и глубиной до 8-10 мм, но не доходящее до дна чаш­ки. В углубление вносят 0,2 мл пробы (суспензия каловых масс, содер­жимое кишечника), или, если углубление небольшое, пробу вносят в толщу агара уколом пастеровской пипетки в стенку углубления. Посевы инкубируют в анаэростате от 4 до 7 дней при 37° С. Серпулины могут мигрировать в агаре, в отличие от других бактерий, и растут (помутне­ние) на некотором расстоянии от углубления. Из периферической зоны помутнения часть агара переносят в восстановленную полужидкую (0,15%) среду, инкубируют и далее (для получения чистой культуры, поскольку возможно присутствие других спирохет) рассевают субкуль­туру на восстановленную плотную среду с целью получения изолированных колоний.

На кровяных плотных средах S. hyodysenteriae через 48 часов инкуби­рования образует плоские, прозрачные, с ровными краями, слизистой кон­систенции колонии диаметром 0,1-0,2 мм, с зоной четкого бета-гемолиза. S. innocens дает слабо выраженный бета-гемолиз.

Морфология клеток в культуре. Морфологию клеток из колоний исследуют в неокрашенных препара­тах методом темнопольной микроскопии или готовят окрашенные препа­раты. В окрашенных препаратах из первичных культур серпулины имеют 3-8 завитков, несколько крупнее (14-26x0,3-0,4 мкм), чем в дальней­ших пассажах. В субкультурах их длина обычно составляет 7-14 мкм, количество завитков — 2-4.