Выделение и идентификация патогенных видов рода Nocardia

Микроскопическое исследование исходного материала

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является ткань из гранулом, в том числе заключен­ная в 10%-ный формалин для гистологического изучения, образцы молока при маститах, экссудат, гной.

Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают их по Граму, для выявления кислотоустойчивости по модифицированному методу Циля— Нильсена. Молоко предварительно центрифугируют, препарат делают из осадка. При микроскопии окрашенных по Граму препаратов в положитель­ных случаях обнаруживают грамположительные клетки нитевидной ветвя­щейся формы, палочки, кокки. В мазках, окрашенных по модифицирован­ному методу Циля—Нильсена, находят аналогичные структурные элемен­ты, но красного цвета. В гистологических препаратах из гранулом нахо­дят микроколонии возбудителя, состоящие из скопления ветвящихся грамположительных нитевидных форм.

Культивирование. Посев материала проводят на кровяной агар, сердечно-мозговой кро­вяной агар, декстрозный агар Сабуро. Культивирование проводят при 25- 27° С в течение 7 суток в аэробных условиях.

N. asteroides обычно формирует колонии на кровяном и сердечно-мозго­вом агарах на 4-5-е сутки культивирования, на агаре Сабуро — несколь­ко позднее. Колонии диаметром 1-2 мм прочно соединены с питательным субстратом. Цвет колоний от белого до желтовато-розового, розового или темно-оранжевого, с редким воздушным мицелием.На колонии N. asteroides весьма похожи колонии непатогенных видов рода Streptomyces. Образую­щиеся воздушные гифы можно обнаруживать микроскопией. Обычно на воздушных, реже на вегетативных конидиях могут наблюдаться короткие и длинные цепи конидий.

 

Морфология клеток нокардий в культуре.Из подозрительных колоний готовят мазки, которые окрашивают по Граму и модифицированному методу Циля-Нильсена. В положитель­ных случаях находят грамположительные нити, распадающиеся со вре­менем (2-7 суток) на палочковидные формы и коккобактерии. В мазках из молодых культур, окрашенных по Цилю-Нильсену, находят ветвя­щиеся клетки красного цвета.

Идентификация нокардий на уровне рода.Дифференциацию нокардий от сходных видов родов Actynomyces, Streptomyces, Dermatophilus проводят после определения признаков, пред­ставленных в таблице 59 (см. «Лабораторная диагностика актиномикоза»). К нокардиям относят культуры, типичные по морфологии колоний, клеток для рода Nocardia, являющиеся строгими аэробами, обладающие каталазной активностью, растущие на декстрозном агаре Сабуро, имею­щие на колониях воздушные гифы, образующие споры (конидии), прояв­ляющие склонность к фрагментации нитевидных структур на палочко­видные и кокковидные формы, расщепляющие в тесте Хью-Ляйфсона глюкозу путем оксидации (в аэробных условиях), а также при отсутствии острого специфического запаха у культур.

Идентификация нокардий на уровне вида.При наличии у животных характерных для нокардиоза патологоанатомических изменений и выделении культур, типичных по вышеперечислен­ным признакам для нокардий, диагноз, в принципе, может быть установлен. Определенные затруднения пред­ставляет дифференциация кроличьего нокардиоза от актиномикоза. Лабора­торные критерии дифференциации возбудителей представлены в таблице 67.

Питательные среды

Культивирование этой группы микроорганизмов не представляет трудно­стей. Для их выделения из патологического материала можно использовать теллуритовую среду, декстрозный агар Сабуро, сердечно-мозговой агар и среду Левенштейна-Иенсена. Для подав­ления посторонней микрофлоры рекомендуется при выделении N. asteroides добавлять в питательную среду диметилхлортетрациклин (5 мкг/мл) или метилтетрациклин (10 мкг/мл) и противогрибные антибиотики.