Выделение и идентификация коринебактерии

Микроскопическое исследование исходного материала

Бактериологическое исследование

Лабораторная диагностика коринебактериозов

В настоящее время род Corynebacterium включает порядка 25 видов бакте­рий. Естественной средой обитания коринебактерий являются слизистые и кишечный тракт, некоторые виды обнаруживаются на коже клинически здоровых животных. В патологии животных наибольшее значение имеют нижеследующие виды коринебактерий. C.pseudotuberculosis — вызывает казеозный лимфаденит у овец, коз, лимфангит у крупного рогатого скота, овец. Естественной средой обитания являются слизистые и кишечный тракт, а также кожа клинически здоровых овец. С. renale вызывает пиелонефриты у крупного рогатого скота, баланопоститы у баранов, поражения лимфа­тических узлов у свиней. C.cystitidis и С. pilosum обусловливают пиелонеф­риты крупного рогатого скота. Оба вида обитают в мочеполовом тракте коров. С. renale, С. pilosum, С. cystitidis относят к так называемой «ренальной» группе коринебактерий. С. equi (синоним Rhodococcus equi) вызывает бронхопневмонию у жеребят 2-4-месячного возраста, цервикальные лим­фадениты у свиней, крупного рогатого скота, обычно этот вид бактерий обнаруживают в фекалиях животных. С. bovis обитает в молочном канале крупного рогатого скота, его роль в патологии неясна. Хорошо известный ранее вид С. pyogenes перенесен в род Actynomyces. Лабораторная диагно­стика коринебактериозов основана на результатах бактериологического исследования.

Объектом исследования является гной, экссудат, при пневмониях
(С. equi - R.equi) — образцы трахеальной слизи, в случаях циститов, нефритов берут пробы мочи.

 

 

Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму, в слу­чае подозрения на наличие R.equi так же по модифицированному методу Циля—Нильсена. В препаратах, окрашенных по Граму, коринебактерии имеют форму грамположительных палочек с закругленными концами, раз­личной степенью полиморфизма, нередко располагающихся под углом друг к другу; клетки R.equi чаще кокковидные, легко обесцвечиваются и могут окрашиваться как кислотоустойчивые.

Культивирование.Коринебактерии — факультативные анаэробы, температурный оптимум 37-38° С, рН питательных сред 7,4-7,6. Для выделения патогенных ко­ринебактерии используют кровяной, сывороточный (5%) МПА, МПБ, бу­льон и агар Хоттингера, кровяную теллуритовую среду, среду Леффлера. Контаминированный материал для подавления роста грамотрицательных бактерий засевают на агар Мак-Конки. Посевы инкубируют в условиях обычной атмосферы 24-48 часов.

Особенности роста коринебактерии на питательных средах. С.pseudotuberculosis на кровяном агаре через сутки инкубирования фор­мирует желто-белые или белые с матовой поверхностью, непрозрачные ко­лонии диаметром около 1 мм. Через 48-72 часа культивирования проявля­ется узкая зона гемолиза (у большинства штаммов). При длительном инку­бировании размер колоний может достигать 3 мм, они приобретают корич­неватый цвет и крошковидный характер.

На среде Леффлера возбудитель растет в виде крошковатого с желтым оттенком налета, без разжижения сыворотки. На кровяной теллуритовой среде колонии мелкие, слабовыпуклые, с матовой поверхностью, черного цвета. В питательном бульоне возбудитель растет без или с равномерным помутнением среды, с появлением небольшой пленки и осадка.

C.renale через 24 часа инкубирования образует мелкие, негемолитичес­кие колонии, с возрастом превращающиеся в непрозрачные, белые. C.pilosum образует колонии, сходные с колониями C.renale, приобретаю­щие с возрастом цвет от желтого до коричневого. C.cystitidis формирует колонии как и C.renale, но обычно белого цвета. C.equi (R.equi) через 24 часа выращивания посевов образует мелкие, гладкие, блестящие колонии, негемолитические. В более старых культурах колонии желтовато-розово­го цвета.

Морфология клеток коринебактерии в культуре. Из подозрительных колоний готовят и микроскопируют мазки, окрашен­ные по Граму. Клетки коринебактерии в мазках из колоний по морфологии и тинкториальным свойствам в основном не отличаются от таковых в пре­паратах из исходного материала.

Идентификация коринебактерии на уровне рода. Культуры бактерий, сходные по морфологическим, тинкториальным, культуральным свойствам с коринебактериями, отвивают на питательные среды и исследуют с целью идентификации. Для идентификации на родо­вом уровне принимают во внимание происхождение материала, тинктори-альные особенности (быстрота обесцвечивания при окраске по Граму), мор­фологию клеток, отношение к кислороду, подвижность, каталазную ак­тивность.

Идентификация коринебактерии на уровне вида. Выделенные культуры на последующем этапе дифференцируют на виды путем изучения гемолитической активности на кровяном агаре, фермента­тивных свойств: гидролиз эскулина, редукция нитратов, разжижение жела­тины, образование уреазы, образование кислоты без газа из глюкозы, маль­тозы, сахарозы (табл. 61).

С целью дифференциации коринебактерии «ренальной» группы допол­нительно изучают скорость формирования колоний, цвет, рост при рН 5,4 (в бульоне), редукцию нитратов, разжижение желатина, гидролиз твина-80, образование кислоты из ксилозы, крахмала (табл. 62).

С целью уточнения видовой принадлежности выделенной культуры ко­ринебактерии число изучаемых признаков может быть в случае необходи­мости расширено (табл. 63).