Выделение и идентификация культур возбудителей

Бактериологическое исследование

Лабораторная диагностика злокачественного отека

Злокачественный отек (газовая гангрена) — остропротекающая неконта­гиозная раневая инфекционная болезнь всех видов животных, проявляю­щаяся воспалительным отеком, некрозом пораженных тканей и интоксикацией. Возбудители: С.septicum, C.novyi, C.sordellii, C.perfringens, C.histolyticum, иногда С. chauvoei.

Лабораторная диагностика основана на выделении и идентификации культур возбудителей.

Объектом исследования являются фрагменты пораженных мышц, ткане­вый экссудат и паренхиматозные органы.

Микроскопическое исследование исходного материала.Из поступившего материала готовят мазки, окрашивают по Граму, Му­ромцеву, микроскопируют. Морфология С.perfringens, C.novyi, C.chauvoei в тканевом материале описана выше.

Клетки C.histolyticum видны в препарате как тонкие грамположительные палочковидные бактерии размером 0,2-0,5x3-9 мкм с закругленны­ми концами, расположенные одиночно, парно, редко цепочками. В орга­низме возбудитель споры не образует.

Клетки C.sordellii полиморфные, палочковидные с закругленными кон­цами, размером 1,2-1,5 х 3,8 мкм, располагаются изолированно, по 2-3 клетки, редко — цепочками.

Культивирование. C.histolyticum — нестрогий анаэроб, C.sordellii — строгий анаэроб. Тем­пературный оптимум 37-38° С. Культивирование других возбудителей зло­качественного отека изложено выше.

Исследуемый материал засевают в среду Кита-Тароцци, глюкозо-кро-вяной агар, МПБ, МПА. Чашки Петри с посевами инкубируют в анаэро-стате. Время культивирования посевов 24-48 часов.

 

Характер роста возбудителей на питательных средах.Особенности роста на питательных средах С. perfringens, C.novyi, C.chauvoei описаны ранее.C.histolyticum на среде Кита-Тароцци растет с равномерным помут­нением, последующим просветлением среды и образованием осадка, газо­образования нет. На глюкозо-кровяном агаре формирует мелкие, росинча-тые, полусферические с ровным краем, блестящей поверхностью колонии диаметром 0,5-1 мм. С возрастом колонии становятся непрозрачными, се­рыми или белыми, с изрезанными краями. В толще сахарного агара неподвижные штаммы образуют чечевицеобразные колонии. Штаммы, имеющие жгутики, — колонии с уплотненном центром.

C.sordellii на среде Кита-Тароцци в течение 24 часов вызывает силь­ное помутнение и умеренное газообразование, культура имеет неприятный гнилостный запах. По мере старения в среде появляется слизис­тый осадок. На глюкозо-кровяном агаре через 24-48 часов формирует сла­бовыпуклые, серо-белые колонии неправильной формы, с шероховатой по­верхностью, изрезанными краями. Обычно колонии окружены узкой зоной β-гемолиза. В агаре столбиком формирует чечевицеобразные колонии.

Морфология клеток возбудителей в культуре.C.hislolyticum в старых культурах формирует овальные споры, располага­ющиеся центрально или субтерминально («игольное ушко»), перитрих.

C.sordellii в культуре образует овальные центральные или субтерми­нальные споры. В молодых культурах активно подвижен (перитрих).

Идентификация возбудителей по ферментативным свойствам.При обнаружении в первичных посевах на среде Кита-Тароцци бактери­альных клеток с типичными для возбудителей злокачественного отека морфоло­гическими и тинкториальными свойствами из культур делают дробный посев на глюкозо-кровяной агар Цейсслера. В случае выявления типичных клеток возбудителя в колониях на глюкозо-кровяном агаре, в первичных или последу­ющих посевах, из подозрительных колоний отвивают чистую культуру и у суб­культур проверяют ферментативные свойства. Биохимические свойства С. perfringens, C.novyi, C.chauvoei изложены ранее в соответствующих разде­лах. Для C.histolyticum и С.sordellii характерны ферментативные свойства, пред­ставленные в таблице 91. Вирулентные штаммы C.sordellii продуцируют ле­тальный токсин типа А-токсина
С. novyi. Многие штаммы выделяют кислородо-лабильный гемолизин, неидентифицированные протеазы. C.histolyticum на казе­иновых средах вырабатывает летальный и некротический токсин, высокоак­тивную коллагеназу и протеиназу, а также чувствительный к кислороду гемо­лизин. Для определения ферментативных свойств и типа токсина используют методы, указанные ранее (см. «Инфекционная энтеротоксемия»).