Выделение и идентификация возбудителей брадзота

Бактериологическое исследование

Лабораторная диагностика брадзота овец

Брадзот — остропротекающая неконтагиозная болезнь овец, характеризу­ющаяся геморрагическим воспалением слизистой оболочки сычуга, двенад­цатиперстной кишки, перерождением паренхиматозных органов, сильным образованием газов в желудке и кишечнике. Возбудителями являются С. septicum, С. novyi типа В, нередко выделяют С. sordellii и С. perfringens. В Западной Европе и США как самостоятельные нозологические единицы выделяют северный брадзот (Nordic Bradsot), вы­зываемый С. septicum, который характеризуется геморрагическим воспа­лением слизистой оболочки сычуга; инфекционный некротический гепатит овец, крупного рогатого скота, свиней (германский брадзот), вызываемый С. novyi типа В. Кроме того, С. novyi типа D рассматривают как причину бациллярной гемоглобинурии крупного рогатого скота в Америке и Авст­ралии, С. novyi типа С — как возбудитель остеомиелита буйволов, а С. novyi типа А возбудитель газовой гангреной.

Лабораторная диагностика брадзота овец основана на выделении и иден­тификации культур возбудителей (С.septicum, С. novyi).

Для исследования влабораторию направляют паренхиматозные органы, измененные участ­ки стенки сычуга, отечную ткань, трубчатую кость, экссудат грудной и брюшной полостей, инфильтрат подкожной клетчатки, участок двенадца­типерстной кишки, перевязанный лигатурами. Материал берут только от свежих трупов.

Микроскопическое исследование исходного материала. Из материала готовят мазки, окрашивают по Граму и Муромцеву. Клетки С. novyi видны в препарате как крупные грамположительные палочки (0,8-1,0x3-10 мкм) с закругленными концами, располагающиеся одиночно, па­рами, иногда в виде коротких цепочек. Клетки С. septicum имеют форму грам-положительных палочек размером 0,6-0,8x3-8 мкм, характерным при­знаком считается наличие нитевидных форм в мазках-отпечатках с сероз­ных покровов. Споры у перечисленных возбудителей овальные субтерми­нальные или центральные.

Культивирование. С. septicum и С. novyi — строгие анаэробы, очень чувствительны к кис­лороду, оптимум рН — 7,6-7,8, температуры — 37-38° С.

Посевы производят из отечной подкожной клетчатки, подслизистой сычуга, паренхиматозных органов, экссудата грудной и брюшной по­лостей в среду Кита-Тароцци, глюкозо-кровяной агар в чашках Петри.

Учитывая, что возбудители строгие анаэробы, целесообразно, по воз­можности, применять среды, содержащие цистеин, натрия тиогликолят для создания оптимального окислительно-восстановительного потенци­ала сред. Чашки с посевами инкубируют в анаэростате. Время инкубирования 24-48 часов.

Характер роста возбудителей на питательных средах.Рост С.septicum на среде Кита-Тароцци характеризуется интенсив­ным равномерным помутнением и образованием газа. На глюкозо-кровя­ном агаре возбудитель образует кружевные сплетения в виде «нитей-ара­бесок» с зоной гемолиза. В агаре столбиком (1%-ный) формирует колонии диаметром 1-2 мм с уплотненным центром и радиально отходящими ни­тевидными перепутанными отростками. В глубине более плотного агара (2%-ный) колонии чечевицеобразной формы, иногда с отростками, корич­невато-желтоватого цвета. При росте в мозговой среде образует газ.

С. novyi в жидкой питательной среде растет с ее помутнением, обра­зованием однородного или хлопьевидного осадка, газообразование слабое. С. novyi тип В (С. gigas) на глюкозо-кровяном агаре формирует плоские, шероховатые колонии с неправильными бахромчатыми края­ми и отростками, образующими на периферии параллельные петли. Внутренняя структура колоний обычно неоднородна (мозаичность, кри­сталлы). Колонии С. novyi типов А, В, С нередко проявляют тенденцию к образованию дочерних колоний. Колонии окружены зоной гемолиза. Колонии С. novyi типа D чаще мелкие, рассыпчатые. В агаре высоким столбиком с глюкозой колонии С. novyi напоминают кусочки ваты с уплотненным, более темным (коричневатым, желтоватым) центром или имеют форму линзы.

Морфология клеток возбудителей в культуре.В мазках из культуры клетки С. novyi крупные, грамположительные прямые или слегка изогнутые палочки (0,6-1,4x2-17 мкм) с закруг­ленными или обрубленными концами, перитрихи, клетки располагают­ся единично или парами. Споры овальные, центральные или субтерми­нальные, лучше образуются на средах, бедных утилизируемыми углево­дами и другими питательными веществами. В старых культурах клетки возбудителя окрашиваются грамотрицательно.

C. septicum — полиморфная, грамположительная палочковидная бак­терия размером 0,6-0,8x2-35 мкм, располагается единично или пара­
ми. В старых культурах окрашивается грамотрицательно, капсулу не
образует, перитрих, споры центральные или субтерминальные.

Идентификация С. novyi и С. septicum по ферментативным свойствам. При обнаружении в посевах бактерий с типичными для С. novyi и C.septicum культуральными, морфологическими и тинкториальными свой­ствами их отвивают для получения чистых культур и определяют наличие лецитиназы, липазы, желатиназы, казеиназы, индола, способность расщеп­лять глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу (табл. 58). Используют для иден­тификации тест-системы (см. выше).