Бактериологическое исследование

Для посмертной диагностики в лабораторию направляют свежий труп мел­ких животных, в том числе и птиц, целиком, от трупов крупных живот­ных — трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, почку, селезен­ку, брыжеечные лимфоузлы, пораженные участки легких, слепую кишку с содержимым; в случае аборта — свежий плод.

Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии, носовую слизь, истечения из родовых путей.

Для получения гемокультуры на 1-4-й день болезни (не позже, т.к. пе­риод бактериемии при сальмонеллезах короткий) от животных может быть взята кровь, а для серологического исследования по РА — сыворотка кро­ви. От птиц берут кровь для постановки кровекапельной реакции агглюти­нации или кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации для диаг­ностики пуллороза-тифа.

Микроскопическое исследование исходного материала. Изпоступившего материала готовят мазки, окрашивают по Граму. Саль­монеллы являются грамотрицательными, мелкими палочками с закруглен­ными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. Не образуют спор и капсул.

Для люминесцентной микроскопии готовят мазки-отпечатки из патологи­ческого материала и обрабатывают их в соответствии с «Наставлением по применению комплексной и групповых сальмонеллезных флуоресцирующих сывороток» (для прямого метода иммунофлюоресценции).

Выделение и идентификация культур сальмонелл. Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Хемоорганотрофы; обла­дают и дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная тем­пература культивирования 37° С, рН среды 7,2-7,4, хорошо растут на обычных питательных средах.

Исследуемый материал высевают на обычные МПА и МПБ, на плот­ные селективные среды, а в ряде случаев (главным образом при исследова­нии фекалий и при получении гемокультуры) в среды накопления. Из селективных наиболее часто используют среды Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфит агар, а из сред накопления — Мюллера, Кауфма­на, Киллиана.

Для получения гемокультуры кровь засевают в пробирку с 20%-ным жел­чным МПБ. Засеянные чашки Петри и пробирки инкубируют 18-
20 часов при 37° С. После этого просматривают посевы на плотных средах в чаш­ках Петри и отбирают подозрительные колонии, наряду с этим делают вы­севы с жидких сред накопления на плотные селективные среды, которые инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов.

Характер роста сальмонелл на питательных средах. В МПБсальмонеллы дают рост в виде равномерного помутнения сре­ды, на МПА образуют небольшие, диаметром 2-4 мм, гладкие выпуклые прозрачные или серо-голубоватые колонии с ровными краями. Некото­рые серовары
(S. abortus equi, S. abortus ovis, S. typhisuis) образуют более мелкие колонии диаметром около 1 мм. На среде Эндо колонии сальмо­нелл слегка розовые, прозрачные, на средах Плоскирева и Мак-Конки — бесцветные, но выглядят более плотными и мутноватыми, чем на МПА. На агаре Левина сальмонеллы растут в виде прозрачных колоний, иног­да с фиолетовым оттенком. На висмут-сульфит агаре почти все сальмо­неллы образуют черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание участка среды под колонией в чер­ный цвет. Отдельные немногочисленные серовары составляют исключе­ние, и на висмут-сульфит агаре образуют светлые или светло-зеленова­тые колонии.

Морфология клеток сальмонелл в культуре. В мазках, приготовленных с питательных сред, сальмонеллы обнару­живают в виде грамотрицательных, мелких палочек с закругленными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. В мазках распо­лагаются одиночно, беспорядочно, иногда попарно. Не образуют спор и капсул. Обладают, как правило, выраженной подвижностью за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Некоторые серовары (S. gallinarum-pullorum) всегда неподвижны, могут встречаться непод­вижные мутанты и среди других сероваров.

Идентификация сальмонелл по ферментативным признакам. Чистые культуры бактерий с характерными для сальмонелл культуральными свойствами с целью установления родовой принадлежности засева­ют в дифференциально-диагностические среды для определения фермента­тивных свойств.

К роду Salmonella относят бактерии: оксидазоотрицательные; катала-зоположительные; не образующие индол; дающие отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра (желтое окрашивание среды); положительную пробу с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет); способ­ные расти на среде Симмонса с цитратом; лизин- и орнитиндекарбоксилазо-положительные; образующие H₂S; не сбраживающие лактозу, сахарозу; не расщепляющие мочевину; не разжижающие желатину. По аргининдегидрогеназе, способности расти в присутствии KCN и использованию малона-та сальмонеллы различаются. Как правило, сбраживаемые ими углеводы включают L-арабинозу, D-ксилозу, мальтозу,
D-маннитол, D-маннозу, L-рамнозу, D-сорбитол, трегалозу и глюкозу.

Частота выявления позитивных реакций при изучении некоторых био­химических характеристик сальмонелл представлена в таблице 24.