Анализ кариотипа у больных с хромосомными болезнями (по фотографиям)

Практическая работа

Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя.

Экспресс-метод определения полового хроматина

FISH-метод окраски хромосом

Метод FISH-окраски (fluorescent in situ hybridization) разработан в Ливерморской национальной лаборатории (США) в 1986 г. Это принципиально новый метод изучения хромосом – метод флюоросцентного выявления ДНК путем гибридизации in situ со специфическими молекулярными зондами. Метод основан на способности хромосомной ДНК связываться при определенных условиях с фрагментами ДНК (ДНК-зондами), которые включают нуклеотидные последовательности комплементарные хромосомной ДНК. ДНК-зонды предварительно метят специальными веществами (например, биотином или дигоксигенином). Меченные ДНК-зонды наносят на цитогенетические препараты подготовленных для гибридизации метафазных хромосом. После того как произошла гибридизация, препараты обрабатывают специальными флюросцентными красителями, конъюгированными с веществами, способными избирательно присоединяться к биотину или дигоксигенину. Каждая хромосома имеет специфическую окраску. Гибридизация может проводиться также с зондами меченными радиоактивной меткой. Цитогенетический анализ проводится под люминесцентным микроскопом в ультрафиолетовом свете.

FISH-метод используется для выявление мелких делеций и транслокаций. Хромосомные обмены (транслокации и дицентрики) между разноокрашенными хромосомами легко определяются как разноцветные структуры.

 

 

Метод заключается в анализе X-полового хроматина в интерфазных ядрах клеток слизистой оболочки полости рта. Для выявления полового хроматина клетки окрашиваются с применением основных красителей (орсеин, краситель Романовского-Гимзы и др.).

 

 

1. Просмотр демонстрационного препарата «Кариотип человека» в цитогенетической лаборатории

 

При увеличении Х90 в поле зрения видны лейкоциты, которые имеют округлую форму, компактное округлой формы темноокрашенное ядро, окруженное широким ободком светлоголубой цитоплазмы. Среди них найдите хромосомы, лежащие вне клеток в виде скопления – метафазная пластинка. Найдите метацентрические, субметацентрические и акроцентрические хромосомы.

 

№ 1. трисомия по 13 хромосоме (синдром Патау). Кариотип 47, +13.

№ 2. трисомия по 18 хромосоме (синдром Эдвардса). Кариотип 47, +18.

№ 3. трисомия по 21 хромосоме (болезнь Дауна). Кариотип 47, +21.

№ 4. делеция короткого плеча одной из хромосом 5 пары (синдром «кошачьего крика»). Кариотип 46, 5р-

№ 5. полисомия Х-хромосомы у женщин. Кариотип: 47, ХХХ или 48, ХХХХ

№ 6. полисомия Х-хромосомы у мужчин (синдром Клайнфельтера). Кариотип: 47, ХХУ, 48, ХХХУ –

№ 7. моносомия по Х-хромосоме (синдром Шершевского –Тернера). Кариотип: 45, ХО.

 

Разобрать с преподавателем механизм возникновения транслокационной формы болезни Дауна (кариотип 46, 15⁺²¹).