В итоге белки распределяются по М.М. и могут быть собраны в виде отдельных хроматографических фракций.

 

Рисунок 17 – Распределение молекул среди гранул сефадекса

Рисунок 18 – Распределение веществ, различающихся по молекулярной массе

 

Хроматография по сродству (афинная хроматография) основана на принципе избирательного связывания белков со специфическими веществами (лигандами), прикрепленными к носителю. Лиганд (глюкоза) ковалентно присоединяют к носителю (иммобилизуют), после чего наносят на колонку исследуемую белковую смесь. Несвязавшиеся с глюкозой белки удаляют соответствующим буфером, а нужный белок элюируют раствором, содержащим лиганд в очень высокой концентра­ции. При этом присоединенные к колонке остатки глюкозы в молекуле белка замещаются на глюкозу, находящуюся в рас­творе

 

		Колонка
	Колонка
		Добавление глюкозы (Г)

 

Глюкоза Глюкоза

Глюкоза Глюкоза

 

Г Г