Вирусный гепатит В.

Гепатит В – это форма гепатита наиболее опасная по своим последствиям среди всех известных форм вирусных гепатитов. Его возбудителем является вирус гепатита В (HBV). Впервые антиген вируса гепатита В был обнаружен Б. Блюмбергом в 1964 г. в сыворотке крови австралийского аборигена, а сам возбудитель был обнаружен в 1970 г. Д. Дейном с соавторами и получил название частиц Дейна. Вирус гепатита В принадлежит к семейству Hepadnaviridae. Его вирион (частица Дейна)

имеет сферическую форму диаметром 40—45 нм, вирус сложный, суперкапсидный. В составе вириона есть три основных антигена. Для них в 1974 г. были введены следующие обозначения:

1. HBsAg - поверхностный (superficial) антиген.

2. HBcAg - сердцевинный антиген (соr-антиген).

3. HBeAg – антиген присутствует в составе вириона и циркулирует в крови в свободном виде или в виде комплекса с антителом анти-HBe. Он выделяется в кровь из гепатоцитов при активной репликации HBV.

Поверхностный антиген - HBsAg - существует в виде трех морфологически различных вариантов:

1) представляет суперкапсид цельного вириона;

2) в большом количестве встречается в виде частиц диаметром 20 нм, имеющих сферическую форму;

3) в виде нитей длиной 230 нм диаметром 10нм.

Химически они идентичны. В составе HBsAg имеется один общий антиген а и две пары типоспецифических детерминант, поэтому существует четыре основных субтипа HBsAg и, соответственно, четыре подтипа HBV. Антиген а обеспечивает формирование общего перекрестного иммунитета ко всем субтипам вируса. Суперкапсид вириона состоит из трех белков: главного (основного), большого и среднего. Геном заключен в капсид и представлен двунитевой кольцевидной ДНК, однако ее «плюс-нить на 20-50% короче «минус»-нити. В сердцевине вириона находится кроме геномной ДНК вирусная ДНК-зависимая ДНК-полимераза. «Минус»-нить ДНК HBV содержит всего четыре гена - S, С, Р и X. Ген S кодирует синтез главного белка оболочки и содержит всю информацию о поверхностном антигене HBsAg. Белок HBsAg обладает высокой иммуногенностью, поэтому

антитела против этого антигена играют важную роль в формировании иммунитета против гепатита В.

Ген С кодирует синтез капсидных белков (HBcAg и HBeAg); HBeAg - важный для репликации вируса и для диагностики антиген. Он не входит в состав вириона, а сразу после трансляции выводится из клетки, выделяется в кровь, где его содержание коррелирует с активностью вирусной репликации.

Ген Р - самый большой, кодирует ферменты, необходимые для репликации вируса. Ген Х кодирует белки, регулирующие экспрессию (выражение) всех вирусных генов, в

частности белок с м.м. 17 кД, который является трансактиватором транскрипции генов. С этим белком связывают трансформирующее действие вируса на гепатоциты. В составе вируса гепатита В нет онкогена, однако установлено, что, внедряясь в клеточную хромосому (в разные ее участки), вирусная ДНК может индуцировать в них различные генетические перестройки - деления, транслокации, амплификации, которые и могут стать причиной развития рака печени - одного из самых тяжких последствий вирусного гепатита В.

Резистентность. Вирус гепатита В обладает высокой устойчивостью. При комнатной температуре сохраняет жизнеспособность в течение 3 мес., в замороженном состоянии - несколько лет. Вирус полностью инактивируется при автоклавировании (120 °С), при кипячении в течение 30

мин., сухим жаром при 180 °С в течение 60 мин., при 60 °С - в течение 10 ч. Устойчив в кислой среде, но разрушается в щелочной. Вирус погибает при обработке Н2О2, хлорамином, формалином, фенолом.

Эпидемиология. Гепатит В – антропонозная инфекция. Вирус обнаруживается в различных секретах и экскретах: в слюне, носоглоточных выделениях, испражнениях, слезной жидкости, в сперме, менструальной крови и прочих. Заражение происходит не только парентеральным путем, но и половым и от матери плоду, т. е. практически заражение вирусом гепатита В возможно

разными способами. Распространению HBV способствует большое число вирусоносителей, которые, по данным ВОЗ, составляют от 0,1 до 20% населения страны или региона. Кроме того, этому способствуют следующие факторы;

• высокая устойчивость вируса во внешней среде;

• высокая чувствительность человека к вирусу, при которой для возникновения инфекции

достаточно попадания 0,0001мл позитивной плазмы;

• высокая концентрация инфекционного вируса в крови;

• присутствие вируса в значимых концентрациях практически во всех биологических жидкостях,

что и определяет множество естественных и искусственных путей передачи возбудителя.

Патогенез и клиника. Вирус гематогенным путем заносится непосредственно в печень. В

патогенезе гепатита важную роль играют аутоиммунные гуморальные и клеточные реакции.

Поражение гепатоцитов связано не столько с непосредственным действием самого вируса,

сколько с воздействием аутоантител к клеткам печени. Поэтому развивающийся хронический

гепатит и цирроз печени можно рассматривать как аутоиммунное заболевание.

Инкубационный период длится от 45 до 180 дней, в среднем составляет 60-90 дней.

Клинически гепатит В может протекать:

• в латентной форме, выявляемой лишь лабораторными методами,

• в типичной желтушной форме,

• в злокачественной форме, заканчивающейся летально.

Принято считать, что после инфицирования вирусом около 65% людей переносят транзиторную субклиническую инфекцию. Приблизительно 10-15% инфицированных дают острый гепатит, который у 90% заболевших заканчивается выздоровлением и элиминацией вируса, а у 5-10% больных переходит в HBV-персистенцию. Летальность при острых формах гепатита составляет 0,1-1%. HBV-перситенция у 70-90% людей протекает как бессимптомное носительство, в редких случаях завершающееся развитием гепатомы. У 10-30% инфицированных HBV-персистенция приводит к развитию хронического гепатита, который в свою очередь может иметь доброкачественное течение, или же заканчивается циррозом печени и гепатомой, которые развивается по истечении латентного периода продолжительностью до 30-50 лет. У детей гепатит В протекает в более легкой форме и часто без развития желтухи, у детей

младшего возраста - преимущественно бессимптомно.

Постинфекционный иммунитет длительный, пожизненный, обусловлен вируснейтрализующими антителами (анти-HBsAg) при отсутствии в крови поверхностного

антигена. Нередко наблюдается скрытая иммунизация вследствие повторного контакта с HBV, которая является причиной широкого распространения иммунитета к вирусу среди населения. Обычно больные с острой формой гепатита В выздоравливают полностью по мере накопления антител к вирусу.

Лабораторная диагностика. Материал для исследования: кровь, биоптаты печени.

1). Определение антигенов вируса ( ИФА, РИА)

1. HBsAg. Выявление HBsAg указывает на инфицированность ВГВ. HBsAg выявляется в крови в последние дни инкубационного периода, иногда за несколько недель до начала клинических симптомов болезни. HBsAg достигает максимальных концентраций в период острых клинических проявлений (желтуха, повышение уровней АлАТ, АсАТ,

билирубина и др.). Концентрация HBsAg обычно колеблется от 1 до 50 мкг/мл, редко -до 500 мкг/мл. Длительность HBsAg -антигенемии при ОГВ колеблется в широких пределах: от 5-80-170 дней. В большинстве случаев HBsAg исчезает в течении 3-5недель от начала заболевания. В 5-10% случаев HBsAg определяется в течение более 6 месяцев (хроническая инфекция, носительство). У носителей вируса колебания концентрации HBsAg могут быть ниже и выше порога чувствительности тест-систем ИФА. Этим объясняется "исчезновение" и "появление" вновь HBsAg в крови. Поэтому носители HBsAg снимаются с диспансерного учёта при 5-кратном получении отрицательных результатов через каждые 6 месяцев. Выявление HBsAg в течении 6 месяцев и более указывает на хронизацию инфекции.

2. HBeAg маркер. Наличие HBeAg указывает на репликацию ВГВ, образование дочерних вирионов, присутствие в крови зрелого инфекционного вируса (частиц Дэйна), на высокую инфекциозность крови и эпидопасность пациентов на этой стадии инфекции. Появляется позднее HBsAg и исчезает раньше HBsAg. HBeAg выявляют при ОГВ в течение 6-8 недель. Более

длительная его персистенция указывает на хронизацию инфекции.

3. HBcAg – теоретически возможный маркер HBV-репликации и вирусемии, определяется в гепатоцитах методом иммунофлюоресценции с антисывороткой к антигену и не выявляется в сыворотке крови. В практической работе не определяется.

2). Определение антител к антигенам вируса гепатита В: а-НВс, а-НВе, a-HBs. Иммунный ответ при ВГВ является диссоциированным: вначале появляются а-НВс, затем а-НВе и, наконец, a-HBs.

1. A-HBs антитела появляются через 3-4 месяца после начала заболевания. Период между исчезновением HBsAg и появлением а-HBs может составлять у части инфицированных до 110 дней и более. При острой инфекции a-HBs класса М определяются в течение 1-2 месяцев, затем они исчезают. Более длительное их обнаружение указывает на хронизацию инфекции. A-HBs класса G сохраняются в течение 10 лет и более. Появление a-HBs является благоприятным прогностическим признаком, указывает на развитие иммунитета, на вступление больного в стадию выздоровления. Отсутствие антител через 3-4 месяца после начала болезни является

неблагоприятным признаком - предиктором хронизации инфекционного процесса. На это же указывает персистенция a-HBs(M) в течение более 2 месяцев. Защитный уровень титра а-HBs после эффективной вакцинации должен составлять > 10 МЕ/л.

2. А-НВс. А-НВс класса М могут быть единственным маркером (кроме ДНК вируса), который определяется на стадии инфекции между исчезновением HBsAg и появлением а-HBs. Этот маркер регистрируется на 1-м месяце ОГВ в 100% случаев, в течение 6 месяцев - у 96% больных. Редко (~ 4%) выявляют а-НВс (М) при хронических формах инфекции, обычно в более низких концентрациях, чем при ОГВ. Поэтому для дифференциальной лабораторной диагностики имеет значение не только факт выявления анти-НВс (М), но и время его детекции. Детекция а-НВс (М) в период желтухи и других нарушений функции печени позволяет ставить лабораторный диагноз ОГВ.

A-HBc класса G обнаруживаются у больных ОГВ, при молниеносных формах инфекции, у хронических больных, у носителей HBsAg, у реконвалесцентов, у перенесших в прошлом инфекцию, которая завершилась элиминацией вируса. Этот маркер сохраняется пожизненно и используется для отбора доноров крови в некоторых странах с низким уровнем носительства HBsAg среди населения.

3. А-НВе. Антитела обнаруживаются после появления а-НВс и исчезают в течение года у 50% пациентов. Появление антител трактуется как благоприятный прогностический признак, указывает возможное снижение инфекционности крови, исчезновение HBeAg.

3). Определение ДНК вируса в ПЦР. ДНК вируса выявляется в последние недели инкубационного периода и в течение 3 недель - 3 месяцев острой стадии инфекции. Наличие вирусной ДНК в крови указывает на репликацию вируса. Высокие уровни ДНК ВГВ в сыворотке крови на ранних стадиях инфекции (первые 2 недели) указывают на возможную хронизацию инфекции. Геном вируса выявляется при ВГВ-инфекции также в мононуклеарах периферической крови, в пунктатах печени, может быть в сперме и других тканях, что указывает на системный характер инфекции.

4) Детекция вирионов (частиц Дэйна), трубчатых и сферических форм HBsAg в крови с помощью метода электронной микроскопии (негативного контрастирования) используется в научных исследованиях. Последовательность тестирования на маркеры В-инфекции:

1. HBsAg, 2. А-НВс (М), 3.НВе-Ag, 4. A-HBs, 5. А-НВс тотальные.

Специфическая профилактика. По рекомендации ВОЗ прививки против гепатита В являются обязательными и должны проводиться на первом году жизни. Для изготовления вакцины применяют методы генной инженерии, в частности, для получения антигенного материала используют рекомбинантный клон дрожжей, вырабатывающих поверхностный антиген вируса гепатита В.

Вакцины обладают высокой эффективностью (защищают 95% привитых). Продолжительность поствакцинального иммунитета не менее 5-6 лет Полный курс прививки состоит из 3 инъекций: 1 доза - сразу после рождения; II доза - через 1-2 мес.; III доза ~ до конца 1-го года жизни.

Гамма-глобулин, содержащий антитела против HBV, применяют для экстренной пассивной иммунопрофилактики лицам, имевшим контакт с больным гепатитом В.