Биологические свойства ВИЧ

40.

Класс.по Чумакову

Геморрагические лихорадки Марбург и Эбола

Ультраструктура. Филовирусы Марбург и Эбола име­ют округлую форму диаметром 80 им или вид цифры 6 (рис. 129), длина нити которой варьирует от 790 нм у Мар­бург до 970 нм у Эбола. Оба вириона имеют внешнюю обо­лочку с шиповидными выступами. Вирионная РНК у них одноцепочечная, и, по-видимому, минус-нитевая. Репли­цируются и формируются филовирусы в цитоплазме кле­ток, отпочковываясь на конечном этапе сборки от их мембран.

Клиника и эпидемиология. Геморрагические лихорад­ки Марбург и Эбола - особо опасные инфекции. Начинают­ся остро с резкого повышения температуры до 38-40 °С, го­ловной боли и конъюнктивита, а заканчиваются - множе­ственными кровоизлияниями в кожные покровы и внут­ренние органы. Летальность варьирует от 30 до 90 % .. Заболевания регистрируются в разных странах Африки - Заире и Юж­ном Судане, Кении, Кот Габоне (Эбола), ЮАР, Кении (Марбург), циркулируют также в Юго-Восточной Азии, в частности в Индонезии, где лихорадка Эбола воз­никала среди обезьян.

Лабораторная диагностика. Выделяют филовирусы из крови, геморрагических экссудатов и мочи, заражая ими культуры клеток обезьян с последующей идентификаци­ей в РН, РСК и ИФА. Антигены филовирусов в патологи­ческих материалах можно обнаружить с помощью непря­мой РИФ, а вирусспецифические антитела в сыворотке больных и реконвалесцентов - в РСК и РН.Спец.проф нет

1.Клещевая а)омскаяГА сем.Flaviviridae б)Кьясамурская ГА в)Крымско-кожно ГА сем.Bunyaviridae

2. Комарина а)желтая Flaviviridae- б)ГЛ Ден в)ГЛ Чухунунгунья Togaviridae

3контагиозные а)ГЛПС (ГЛ с почечн.синдр) Bunyaviridae б)АргентинскаяГЛ(Хунни)Arenoviridae

В)Боливийская ГЛ г)лих.Эбола Filoviridae д)Лих,Макбурская

Геморрагический синдром, или склонность к кожной геморрагии и кровоточивости слизистых оболочек, возникает как следствие изменений в одном или нескольких звеньях гемостаза. Это может быть поражение сосудистой стенки, нарушение структуры, функции и количества тромбоцитов, нарушение коагуляционного гемостаза. При определении причин кровоточивости необходимо учитывать, что одни виды патологии часты, другие — редки, а третьи — крайне редки. Из наследственных нарушений гемостаза наиболее часто в терапевтической практике встречаются тромбоцито-патии, гемофилия A, болезнь Виллебранда, гемофилия В, из сосудистых форм — телеангиэктазия. Причиной приобретен-ных форм геморрагического синдрома наиболее часто становятся вторичная тромбоцитопения и тромбоцитопатии, ДВС-синдром, дефицит факторов протромбинового комплек-са и геморрагический васкулит.

 

А (HAV) C: PicornaviridaeР.hepataviru, Безобол.вирион,кубич нуклеотид 27-30нм1+рнк Фекально-оральный(водный)ИП15-50(28-30)ЭД Ифа,риа,»диагн-а-геп» ВД-все СД+все Инактив. Вакц. Havrix

Е (НЕV) picornaviridaеP.hepeviridae, Безобол,кубич тип симм, свеер. Форма,простой, 32-34, 1+рнк нефр, Фекально-оральный(водный) ИП30(14-50), Тест ифа-анти-неv, пцр, проф нет

B (HBV) С. Hepadnaviridae, Свеер.ф,сложный,40-45, Кольцев. 2н неполная, Вертик, половой,парентеральный, 45-180(60-90), Пцр,аг hbsag,hbe-ag3 плановых вакцинации 12ч-1мес-5мес

D(HDV) Некласс только с В!! Сфеер.формы, Кольц 1рнк, Парент, вертикальный, 2-6мес, Опр. Анти-hdv, 3 плановых вакцинации 12ч-1мес-5мес

С (НСVflaviviridaеР.hepacavirus, Мелкий, есть суперкапсид 30-38, 1+рнк, Парент, вертикальный, 6-8нед, проф нет

G(HGV) flaviviridaeР.hepacavirus, 80нм1+рнк? Парент. Не вертик! пцр

 

41. Вирусные гепатиты.

Вирусные гепатиты - группа заболеваний с обязательным поражением гепатоцитов, определяющим всю или почти всю клиническую картину.

Энтеральные гепатиты.

Впервые инфекционный гепатит был выделен в самостоятельную нозологическую единицу в 1888 г. выдающимся русским врачом С. П. Боткиным, поэтому в нашей стране инфекционный гепатит в течение многих десятилетий называли болезнью Боткина. Сегодня это название связывают с вирусным гепатитом А.

Вирусный гепатит А

Вирусный гепатит А - инфекционная болезнь человека, характеризующаяся преимущественным поражением печени и проявляющаяся клинически интоксикацией и желтухой. Вирус гепатита А был обнаружен в 1973 г. С Фейнстоном и соавторами с помощью метода иммунной электронной микроскопии и путем заражения обезьян - шимпанзе и мармозет. Открытие С. Фейнстона было подтверждено в опытах на добровольцах.

По своим свойствам вирус гепатита А отнесен к роду Hepatavirus, семейству Picornaviridae Вирион представляет собой «голый» безоболочечный икосаэдральный нуклеокапсид, диаметр -

27-30нм.

Геном представлен однонитевой позитивной РНК с м. м. 2,6 М.Д.

Капсид имеет 32 капсомера, он образован тремя полипептидами (VP1-VP3). Капсидные белки объединяются в понятие «антиген вируса гепатита А» В состав вируса входит и четвертый структурный белок - VP4, который тесно связан с РНК. В антигенном отношении вирус гепатита A (HAV - hepatitis A virus) является однородным.

HAV хорошо размножается в организме шимпанзе, павианов, гамадрилов и игрунковых обезьян мармозет. Длительное время вирус не умели культивировать. В 80-х годах удалось получить культуры клеток, в которых HAV размножается. Это перевиваемая линия клеток почек зеленых мартышек (культура 4647). Однако HAV не вызывает деструкцию зараженных клеток, а имеет тенденцию к персистированию в культурах клеток, не дает выраженного ЦПД, что затрудняет его обнаружение. Поэтому культуры клеток используют для накопления вируса как диагностикума, а в лабораторной диагностике заболевания вирусологический метод не используют.

Резистентность. Вирус относительно устойчив к высокой температуре,выдерживает прогревание при 60°С в течение 12 часов, инактивируется при 100°С за 5 минут. Устойчив к кислотам, жирорастворителям (отсутствуют липиды), дезинфицирующим средствам, хорошо

переносит низкую температуру. Все это способствует длительному сохранению его во внешней среде. При комнатной температуре он выживает несколько недель. Высокорезистентен к хлору, благодаря чему способен проникать в водопроводную воду через барьеры водоочистных сооружений. Ультрафиолетовое облучение инактивирует вирус в течение 1 минуты.

Эпидемиология. Вирус гепатита А имеет глобальное распространение: с ним контактирует 70-90% населения планеты. Этим обьясняется, что гепатит A лидирует по заболеваемости среди всех вирусных гепатитов. Вирус гепатита A обладает высокой патогенностью для человека. Для гепатита A характерны эпидемиологические признаки любой кишечной инфекции. Заболеваемость может ограничиться спорадическими случаями, но всегда остается угроза вспышки или даже эпидемии. Характерен пик заболеваемости с августа по ноябрь. Источником инфекции является только инфицированный человек. Вирус выделяется в большом количестве с испражнениями за 12-14 дней до появления клинических симптомов и желтухи и продолжается в течение 3-х недель желтушного периода, но в значительно меньшем количестве.. Существенных различий в выделении возбудителя у больных желтушными, безжелтушными и бессимптомными формами гепатита А не выявлено. Механизм заражения - фекально-оральный, главными путями являются водный, а также бытовой и пищевой. Водный путь является основным (первичным) путем передачи вируса. Восприимчивость населения всеобщая. Гепатит A считается преимущественно «детской инфекцией». Болеют преимущественно дети в возрасте до 14 лет. В этом возрасте инфекция чаще всего протекает бессимптомно или в легкой клинической форме.

Патогенез, клиника. Инкубационный период варьирует от 15 до 50 дней, но в среднем составляет 28-30 дней. Длительность периода зависит от величины заражающей дозы вируса. Попав в организм, вирус гепатита А размножается в регионарных лимфатических узлах, проникает в кровь, а затем в клетки печени и вызывает острый диффузный гепатит, который сопровождается поражением гепатоцитов и ретикуло-эндотелиальных элементов печени. После репликации в печени вирус поступает вновь в кишечный тракт и выделяется с фекалиями. По мнению многих авторов, HAV не размножается в эпителиоцитах кишечника, но выделение вируса в значительных количествах еще до появления симптомов повреждения гепатоцитов отчасти противоречит этому утверждению.

Наиболее типичной картиной гепатита А является острая желтушная циклическая форма: инкубационный период, продромальный (преджелтушный), желтушный период и реконвалесценция. Однако в очагах инфекции выявляется большое количество больных с безжелтушными и бессимптомными формами инфекции, число которых значительно преобладает над желтушными («феномен айсберга»).

Постинфекционный иммунитет прочный и длительный, обусловлен вируснейтрализующими антителами и клетками иммунной памяти, причем развивается он независимо от того, в какой форме перенесена инфекция.

Методы вирусологической диагностики.

Преаналитический этап

Материал для исследования: кровь, фекалии.

Взятие крови проводят в остром периоде болезни однократно. Фекалии для определения антигена вируса получают как можно раньше от начала острого периода, так как фаза диагностически значимого выделения возбудителя с фекалиями совпадает с окончанием инкубационного периода и прекращается с нарастанием клинических симптомов.

Лабораторная диагностика

Для диагностики гепатита А надежным и специфическим является метод иммунной электронной микроскопии, однако он очень трудоемкий, требует наличия электронного микроскопа, поэтому доступен в основном для исследовательских лабораторий. Для обнаружения вируса гепатита А предложен метод ДНК-зонда: используют в качестве зонда ДНК, комплементарную вРНК.

Пока наиболее приемлемыми являются методы ИФА или РИА для определения антител, особенно в модификации «захвата иммуноглобулинов класса М. В России для этой цели предложена тест-система - «ДИАГН-А-ГЕП». Принцип работы этой тест-системы следующий. На стенках полистироловых луночек сорбируются вначале антитела к иммуноглобулинам класса М (антииммуноглобулины М), затем добавляется исследуемая сыворотка больного. Если в ней есть антитела класса IgM, они будут связываться анти-антителами М, затем добавляется специфический вирусный антиген (вирус гепатита А), который получают путем размножения вируса в культуре клеток. Система промывается, и к ней добавляются противовирусные антитела, меченные пероксидазой хрена. Если произошло взаимодействие всех четырех компонентов системы, возникает четырехслойный «сэндвич»:

1) антииммуноглобулины М,

2) иммуноглобулины М (против вируса гепатита А) исследуемой сыворотки больного),

3) вирусный антиген,

4) антивирусные антитела, меченые ферментом.

Преимущество метода «захвата» IgM состоит в том, что антитела этого класса иммуноглобулинов появляются уже в инкубационном периоде при первичном иммунном ответе и свидетельствуют об активной стадии инфекции, они исчезают после перенесенного заболевания. Антитела к ВГА класса М (а-ВГА(М)) методом ИФА выявляются у 100% больных. Сохраняются в течение 6-12 месяцев.

Антитела к ВГА класса G (а-ВГА(О)) сохраняются пожизненно, обеспечивая приобретенный иммунитет. Их выявление указывает на перенесённую в прошлом инфекцию.

Лечение. Специфическое лечение отсутствует. Применяют препараты, обладающие дезинтоксикационными свойствами и способствующие улучшению функции печени, а также диетотерапию.

 

42.Вирусный гепатит Е.

Возбудитель - вирус гепатита Е (HEV) - безоболочечный, с кубическим типом симметрии, имеет сферическую форму с шипами и вдавлениями на поверхности. Диаметр вириона 32-34 нм, геном представлен однонитевой нефрагментироваиной позитивной РНК. По ультраструктуре, физико-химическим свойствам вириона и организации генома HEV напоминает калицивирусы. Он, в частности, похож на Norwalk вирус, один из возбудителей вирусной диареи человека. Однако его исключили и из данного семейства, так он отличается от калицивирусов по ряду кадинальных признаков.

На сегодняшний день - это неклассифицированный вирус. Его относят к группе гепатит-Е-подобных вирусов.

Из экспериментальных животных к HEV восприимчивы приматы, удается воспроизвести гепатит Е у домашних свиней и у крыс.

Эпидемиология. Источником инфекции является только инфицированный человек. Возбудитель выделяется с испражнениями. Механизм заражения - фекально-оральный. Основной путь передачи - водный. Это обусловлено тем, что вирус способен, фильтруясь через верхние слои почвы, проникать в грунтовые воды и инфицировать их. Восприимчивость к вирусу гепатита Е всеобщая, однако чаще болеют взрослые от 15 до 40 лет, что связано с сельскохозяйственной работой в условиях жаркой погоды, когда у людей возрастает потребность в питьевой воде. Гепатит Е эндемичен для территорий с очень плохим водоснабжением населения, когда оно использует для пищевых и хозяйственно-бытовых целей воду из оросительных каналов и арыков или водопроводную и колодезную воду, загрязненную инфицированными вирусом грунтовыми водами (Юго-Восточная Азия, Центральная Америка, Северная Африка).

Известны случаи длительной (45-112 дней) виремии при инфекции вирусом гепатита Е. Это создает предпосылки для возможной парентеральной передачи этого вируса.

У 95% больных гепатит Е протекает в легкой или средней тяжести форме. Возможность хронического течения вирусного гепатита Е не показана. Инкубационный период составляет в среднем около 30 дней, хотя может варьировать от 14 до 50 дней. Клинические проявления заболевания, в первую очередь - желтуха, отмечаются у 80% инфицированных, но и безжелтушные формы не редкость. Болезнь начинается постепенно, преджелтушный период продолжается около 4-х дней, желтушность кожи держится в течение 1-3 нед. Обычно гепатит Е протекает доброкачественно и заканчивается самоизлечением. Персистенции вируса и хронизации процесса как и при гепатите А не бывает.

Тяжелая форма болезни наблюдается чаще всего у беременных, именно у них могут развиваться фульминантные формы. Частота летальных исходов гепатита Е на поздних сроках беременности может достигать 25%. Особенно опасен он в последние сроки беременности, вызывая тяжелые кровотечения в родах.

Преаналитический этап.

Материал для исследования: кровь. Первый забор крови для серологических исследований проводят с появлением у больного желтухи, повторный - не ранее, чем через 14 дней после первого. Длительное хранение сывороток возможно при температуре не выше -20°С с исключением повторного оттаивания - замораживания. Тестируемые образцы должны быть прозрачными без выраженных признаков гемолиза, гиперлипидемии, бактериального пророста.

Лабораторная диагностика.

Экспресс-диагностика.

В настоящее время предложена тест-система для обнаружения антител класса IgM к антигенам HEV. Однако эти методы не проводится в практических вирусологических лабораториях из-за отсутствия коммерческих тест-систем ИФА по определению специфических антител класса М или низкоавидных антител класса G.

Ретроспективная диагностика

Определение антител к вирусу гепатита Е в парных сыворотках крови методом ИФА. Постановка реакции осуществляется в соответствии с инструкцией к тест-системе "ИФА-анти-HEV" (НПО "Диагностические системы", г. Нижний Новгород, Россия). Выявляются специфические иммуноглобулины класса G.

Интерпретация результатов.

Антитела к вирусу гепатита Е обычно начинают определяться в первые дни желтушного периода. Появление антител отражает завершение патологического процесса в печени и начало выздоровления. Отсутствие сероконверсии служит плохим прогностическим признаком, говоря о возможности рецидива. Титр антител постепенно нарастает на протяжении нескольких месяцев. После перенесённого заболевания уровень антител постепенно снижается, однако они могут сохраняться в течение многих лет. В связи с этим обнаружение специфических иммуноглобулинов класса G в одном образце сыворотки может свидетельствовать как о текущей, так и перенесённой инфекции.

Перекрестный иммунитет между гепатитом Е и гепатитом А не образуется.

Как и при гепатите А, в раннюю фазу болезни в крови примерно 75% больных можно выявить РНК HEV при помощи ПЦР.

 

43.Вирусный гепатит В.

Гепатит В - это форма гепатита наиболее опасная по своим последствиям среди всех известных форм вирусных гепатитов. Его возбудителем является вирус гепатита В (HBV). Впервые антиген вируса гепатита В был обнаружен Б. Блюмбергом в 1964 г. в сыворотке крови австралийского аборигена, а сам возбудитель был обнаружен в 1970 г. Д. Дейном с соавторами и получил название частиц Дейна.

Вирус гепатита В принадлежит к семейству Hepadnaviridae. Его вирион (частица Дейна) имеет сферическую форму диаметром 40—45 нм, вирус сложный, суперкапсидный.

В составе вириона есть три основных антигена. Для них в 1974 г. были введены следующие обозначения:

1. HBsAg - поверхностный (superficial) антиген.

2. HBcAg - сердцевинный антиген (^^^0^^).

3. HBeAg - антиген присутствует в составе вириона и циркулирует в крови в свободном виде или в виде комплекса с антителом анти-HBe. Он выделяется в кровь из гепатоцитов при активной репликации HBV.

Поверхностный антиген - HBsAg - существует в виде трех морфологически различных вариантов:

1) представляет суперкапсид цельного вириона;

2) в большом количестве встречается в виде частиц диаметром 20 нм, имеющих сферическую форму;

3) в виде нитей длиной 230 нм диаметром 10нм.

Химически они идентичны. В составе HBsAg имеется один общий антиген а и две пары типоспецифических детерминант, поэтому существует четыре основных субтипа HBsAg и, соответственно, четыре подтипа HBV. Антиген а обеспечивает формирование общего перекрестного иммунитета ко всем субтипам вируса.

Суперкапсид вириона состоит из трех белков: главного (основного), большого и среднего. Геном заключен в капсид и представлен двунитевой кольцевидной ДНК, однако ее «плюс-нить на 20-50% короче «минус»-нити. В сердцевине вириона находится кроме геномной ДНК вирусная ДНК-зависимая ДНК-полимераза. «Минус»-нить ДНК HBV содержит всего четыре гена - S, С, Р и X.

Ген S кодирует синтез главного белка оболочки и содержит всю информацию о поверхностном антигене HBsAg. Белок HBsAg обладает высокой иммуногенностью, поэтому антитела против этого антигена играют важную роль в формировании иммунитета против гепатита В.

Ген С кодирует синтез капсидных белков (HBcAg и HBeAg); HBeAg - важный для репликации вируса и для диагностики антиген. Он не входит в состав вириона, а сразу после трансляции выводится из клетки, выделяется в кровь, где его содержание коррелирует с активностью вирусной репликации.

Ген Р - самый большой, кодирует ферменты, необходимые для репликации вируса.

Ген Х кодирует белки, регулирующие экспрессию (выражение) всех вирусных генов, в частности белок с м.м. 17 кД, который является трансактиватором транскрипции генов. С этим белком связывают трансформирующее действие вируса на гепатоциты.

В составе вируса гепатита В нет онкогена, однако установлено, что, внедряясь в клеточную хромосому (в разные ее участки), вирусная ДНК может индуцировать в них различные генетические перестройки - деления, транслокации, амплификации, которые и могут стать причиной развития рака печени - одного из самых тяжких последствий вирусного гепатита В.

Резистентность. Вирус гепатита В обладает высокой устойчивостью. При комнатной температуре сохраняет жизнеспособность в течение 3 мес., в замороженном состоянии - несколько лет. Вирус полностью инактивируется при автоклавировании (120 °С), при кипячении в течение 30 мин., сухим жаром при 180 °С в течение 60 мин., при 60 °С - в течение 10 ч. Устойчив в кислой среде, но разрушается в щелочной. Вирус погибает при обработке Н2О2, хлорамином, формалином, фенолом.

Эпидемиология. Гепатит В - антропонозная инфекция. Вирус обнаруживается в различных секретах и экскретах: в слюне, носоглоточных выделениях, испражнениях, слезной жидкости, в сперме, менструальной крови и прочих. Заражение происходит не только парентеральным путем, но и половым и от матери плоду, т. е. практически заражение вирусом гепатита В возможно разными способами.

Распространению HBV способствует большое число вирусоносителей, которые, по данным ВОЗ, составляют от 0,1 до 20% населения страны или региона. Кроме того, этому способствуют следующие факторы;

• высокая устойчивость вируса во внешней среде;

• высокая чувствительность человека к вирусу, при которой для возникновения инфекции достаточно попадания 0,0001 мл позитивной плазмы;

• высокая концентрация инфекционного вируса в крови;

• присутствие вируса в значимых концентрациях практически во всех биологических жидкостях, что и определяет множество естественных и искусственных путей передачи возбудителя.

 

44.Патогенез и клиника. Вирус гематогенным путем заносится непосредственно в печень. В

патогенезе гепатита важную роль играют аутоиммунные гуморальные и клеточные реакции.

Поражение гепатоцитов связано не столько с непосредственным действием самого вируса, сколько с воздействием аутоантител к клеткам печени. Поэтому развивающийся хронический гепатит и цирроз печени можно рассматривать как аутоиммунное заболевание.

Инкубационный период длится от 45 до 180 дней, в среднем составляет 60-90 дней. Клинически гепатит В может протекать:

• в латентной форме, выявляемой лишь лабораторными методами,

• в типичной желтушной форме,

• в злокачественной форме, заканчивающейся летально.

Принято считать, что после инфицирования вирусом около 65% людей переносят транзиторную субклиническую инфекцию.

Приблизительно 10-15% инфицированных дают острый гепатит, который у 90% заболевших заканчивается выздоровлением и элиминацией вируса, а у 5-10% больных переходит в HBV-персистенцию. Летальность при острых формах гепатита составляет 0,1-1%.

HBV-перситенция у 70-90% людей протекает как бессимптомное носительство, в редких случаях завершающееся развитием гепатомы. У 10-30% инфицированных HBV-персистенция приводит к развитию хронического гепатита, который в свою очередь может иметь доброкачественное течение, или же заканчивается циррозом печени и гепатомой, которые развивается по истечении латентного периода продолжительностью до 30-50 лет.

У детей гепатит В протекает в более легкой форме и часто без развития желтухи, у детей младшего возраста - преимущественно бессимптомно.

Постинфекционный иммунитет длительный, пожизненный, обусловлен вируснейтрализующими антителами (анти-HBsAg) при отсутствии в крови поверхностного антигена. Нередко наблюдается скрытая иммунизация вследствие повторного контакта с HBV, которая является причиной широкого распространения иммунитета к вирусу среди населения. Обычно больные с острой формой гепатита В выздоравливают полностью по мере накопления антител к вирусу.

Лабораторная диагностика. Материал для исследования: кровь, биоптаты печени.

1). Определение антигенов вируса (ИФА, РИА)

1. HBsAg. Выявление HBsAg указывает на инфицированность ВГВ.

HBsAg выявляется в крови в последние дни инкубационного периода, иногда за несколько недель до начала клинических симптомов болезни. HBsAg достигает максимальных концентраций в период острых клинических проявлений (желтуха, повышение уровней АлАТ, АсАТ, билирубина и др.). Концентрация HBsAg обычно колеблется от 1 до 50 мкг/мл, редко -до 500 мкг/мл. Длительность HBsAg -антигенемии при ОГВ колеблется в широких пределах: от 5-80-170 дней. В большинстве случаев HBsAg исчезает в течении 3-5недель от начала заболевания. В 5-10% случаев HBsAg определяется в течение более 6 месяцев (хроническая инфекция, носительство). У носителей вируса колебания концентрации HBsAg могут быть ниже и выше порога чувствительности тест-систем ИФА. Этим объясняется "исчезновение" и "появление" вновь HBsAg в крови. Поэтому носители HBsAg снимаются с диспансерного учёта при 5-кратном получении отрицательных результатов через каждые 6 месяцев.

Выявление HBsAg в течении 6 месяцев и более указывает на хронизацию инфекции.

2. HBeAg маркер. Наличие HBeAg указывает на репликацию ВГВ, образование дочерних вирионов, присутствие в крови зрелого инфекционного вируса (частиц Дэйна), на высокую инфекциозность крови и эпидопасность пациентов на этой стадии инфекции. Появляется позднее HBsAg и исчезает раньше HBsAg. HBeAg выявляют при ОГВ в течение 6-8 недель. Более длительная его персистенция указывает на хронизацию инфекции.

3. HBcAg - теоретически возможный маркер HBV-репликации и вирусемии, определяется в гепатоцитах методом иммунофлюоресценции с антисывороткой к антигену и не выявляется в сыворотке крови. В практической работе не определяется.

2). Определение антител к антигенам вируса гепатита В: а-НВс, а-НВе, a-HBs. Иммунный ответ при ВГВ является диссоциированным: вначале появляются а-НВс, затем а-НВе и, наконец, a-HBs.

1. A-HBs антитела появляются через 3-4 месяца после начала заболевания. Период между исчезновением HBsAg и появлением а-HBs может составлять у части инфицированных до 110 дней и более. При острой инфекции a-HBs класса М определяются в течение 1-2 месяцев, затем они исчезают. Более длительное их обнаружение указывает на хронизацию инфекции. A-HBs класса G сохраняются в течение 10 лет и более. Появление a-HBs является благоприятным прогностическим признаком, указывает на развитие иммунитета, на вступление больного в стадию выздоровления. Отсутствие антител через 3-4 месяца после начала болезни является неблагоприятным признаком - предиктором хронизации инфекционного процесса. На это же указывает персистенция a-HBs(M) в течение более 2 месяцев.

Защитный уровень титра а-HBs после эффективной вакцинации должен составлять > 10

МЕ/л.

2. А-НВс. А-НВс класса М могут быть единственным маркером (кроме ДНК вируса), который определяется на стадии инфекции между исчезновением HBsAg и появлением а-HBs. Этот маркер регистрируется на 1-м месяце ОГВ в 100% случаев, в течение 6 месяцев - у 96% больных. Редко (~ 4%) выявляют а-НВс (М) при хронических формах инфекции, обычно в более низких концентрациях, чем при ОГВ. Поэтому для дифференциальной лабораторной диагностики имеет значение не только факт выявления анти-НВс (М), но и время его детекции.

Детекция а-НВс (М) в период желтухи и других нарушений функции печени позволяет ставить лабораторный диагноз ОГВ.

A-HBc класса G обнаруживаются у больных ОГВ, при молниеносных формах инфекции, у хронических больных, у носителей HBsAg, у реконвалесцентов, у перенесших в прошлом инфекцию, которая завершилась элиминацией вируса.

Этот маркер сохраняется пожизненно и используется для отбора доноров крови в некоторых странах с низким уровнем носительства HBsAg среди населения.

3. А-НВе. Антитела обнаруживаются после появления а-НВс и исчезают в течение года у 50% пациентов. Появление антител трактуется как благоприятный прогностический признак, указывает возможное снижение инфекционности крови, исчезновение HBeAg.

3). Определение ДНК вируса в ПЦР.

ДНК вируса выявляется в последние недели инкубационного периода и в течение 3 недель -3 месяцев острой стадии инфекции.

Наличие вирусной ДНК в крови указывает на репликацию вируса. Высокие уровни ДНК ВГВ в сыворотке крови на ранних стадиях инфекции (первые 2 недели) указывают на возможную хронизацию инфекции. Геном вируса выявляется при ВГВ-инфекции также в мононуклеарах периферической крови, в пунктатах печени, может быть в сперме и других тканях, что указывает на системный характер инфекции.

4) Детекция вирионов (частиц Дэйна), трубчатых и сферических форм HBsAg в крови с помощью метода электронной микроскопии (негативного контрастирования) используется в научных исследованиях.

Последовательность тестирования на маркеры В-инфекции:

1. HBsAg, 2. А-НВс (М), 3.НВе^, 4. A-HBs, 5. А-НВс тотальные.

Сочетание лабораторных маркеров при различных стадиях/формах вирусного гепатита В:• острый гепатит В:ДНК+, HBsAg+, a-HBc(M)+, HBeAg+, a-HBs-, а-НВе-, a-HBc(G)-.

• ранняя фаза разрешения гепатита В:ДНК-, HBsAg-, а-НВс(М)-, HBeAg-, a-HBs-, а-НВе-, a-HBc(G)+.• стадия реконвалесценции после гепатита В:ДНК-, HBsAg-, а-НВс(М)-, HBeAg-, a-HBs+, a-HBe+, -, a-HBc(G)+.• здоровое носительство:HBsAg+, а-НВс(М)-, HBeAg-, a-HBs-,+, а-НВе-, a-HBc(G)+.• состояние после вакцинопрофилактики:HBsAg-, а-НВс(М)-, HBeAg-, a-HBs+, а-НВе-, a-HBc(G)-.

Специфическая профилактика. По рекомендации ВОЗ прививки против гепатита В являются обязательными и должны проводиться на первом году жизни. Для изготовления вакцины применяют методы генной инженерии, в частности, для получения антигенного материала используют рекомбинантный клон дрожжей, вырабатывающих поверхностный антиген вируса гепатита В.

Вакцины обладают высокой эффективностью (защищают 95% привитых). Продолжительность поствакцинального иммунитета не менее 5-6 лет

Полный курс прививки состоит из 3 инъекций: 1 доза - сразу после рождения; II доза -через 1-2 мес.; III доза ~ до конца 1-го года жизни.

Гамма-глобулин, содержащий антитела против HBV, применяют для экстренной пассивной иммунопрофилактики лицам, имевшим контакт с больным гепатитом В.

 

 

45.Дельта-гепатит (гепатит D)

В 1977 г. М- Ризетто с сотрудниками обнаружили еще один инфекционный агент, названный ими дельта-антигеном, способный вызывать развитие тяжелой формы гепатита. Дельта-вирус (HDV) имеет сферическую форму, его диаметр 35-37 нм. Суперкапсид дельта-вируса состоит из поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg). Его геном представлен кольцевой одноцепочечной РНК. Это единственный известный вирус, у которого геном представлен кольцевидной РНК. В составе HDV имеется два белка, обладающих антигенной специфичностью: поверхностный - HBsAg, кодируемый геномом HBV, и внутренний белок HDAg, который обладает способностью взаимодействовать с РНК; это обстоятельство определяет его роль в формировании нуклеокапсида. По структуре генома (кольцевидная молекула РНК) вирус дельта-гепатита напоминает вироиды. В настоящее время классификации не поддается.

Предполагается, что дельта-вирус является дефектным вирусом, сателлитом вируса гепатита В, и для его размножения требуется обязательно наличие вируса гепатита В. Его передача происходит парентерально (с кровью или ее препаратами) и от матери к плоду. Заболеваемость гепатитом D коррелирует с заболеваемостью гепатитом В.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь инфицированных вирусом гепатита В, носителей

HBsAg.

1. Определение антигена HDV. Антиген вируса определяется в сыворотке крови после обработки детергентами, разрушающими HBsAg на поверхности HDV. Анитиген HDV появляется в крови за 2-9 недель до начала заболевания, обнаруживается при ОГВ и персистирует при ХГД. Вирусный антиген не всегда обнаруживается в крови, поэтому отрицательный результат на этот маркер не позволяет исключить HDV.

2. Определение антител к HDV - а-HDV (М) и а-HDV (G)Основным методом диагностики дельта-гепатита является определение антител к нему с помощью ИФА в модификации «захват» антител - иммуноглобулинов класса М. А-HDV (М) выявляются в течение нескольких недель при ОГД, затем они исчезают. Персистенция а-HDV (М) характерна для ХГД.

А-HDV (G) сохраняются в течение длительного времени при HDV. Этот маркер определяют у носителей HBsAg при проведении сероэпидемиологических исследований с целью выявления уровня распространения HDV.

3. Определение РНК HDV в ПЦР: положительный результат исследования крови указывает на наличие инфекции.

Зависимость развития дельта-инфекции от репликации вирус гепатита В дает основание полагать, что вакцинация против гепатита В явится вместе с тем и средством профилактики дельта-гепатита.

 

 

46.Вирусный гепатит С

Возбудитель - вирус гепатита С (HCV) - отнесен к семейству Flaviviridae, род Hepacаvirus. Вирион мелкий (30—38 нм в диаметре), РНК-содержащий, имеет суперкапсид, чувствителен к хлороформу. Вирус гепатита С отличается высокой склонностью к мутациям.

«Зрелые» HCV-белки —три структурных (они включаются в состав вириона) и четыре неструктурных (не входят в состав вириона, участвуя на этапе внутриклеточной репликации вируса).

Геном представлен одноцепочечной плюс-РНК. На 5'-конце РНК расположен терминальный участок, который имеет почти одинаковую последовательность нуклеотидов у всех штаммов вируса (более 90% гомологии). Этот фрагмент высоко консервативен, что делает его универсальной мишенью для выявления HCV-PHK в полимеразной цепной реакции.

Относительным постоянством нуклеотидного состава отличаются С- и КБ3-участки генома. Это определяет использование кодируемых ими антигенов при изготовлении диагностических тест-систем для иммуноферментного анализа.

Эпидемиология и клиника. Источником инфекции является только человек. Распространение вируса происходит трансфузионно при переливании крови и ее препаратов или инструментальным путем в результате занесения зараженной вирусом крови в организм здоровых людей, а также от матери плоду. Восприимчивость населения к HCV очень высокая. Вирус выделяется от больных в течение одной или нескольких недель до появления признаков болезни и до 10 нед. после начала болезни. Инкубационный период по сравнению с гепатитом В короче примерно на один месяц и составляет в среднем 6-8 нед. Клиническая картина сходна с таковой при гепатите В, однако заболевание протекает легче и характеризуется относительно быстрым выздоровлением, нередко оно протекает без желтухи; последняя наблюдается примерно у 25% больных.

Несмотря на относительно благоприятное течение, около 50% всех форм инфекции приводят к формированию хронического гепатита, а около 20% хронических поражений печени заканчивается циррозом и раком. Наряду с вирусом гепатита В, вирус гепатита С является одной из главных причин рака печени.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь, биоптаты печени.

HCV-инфекция сопровождается длительной вирусемией но вирус гепатита С может быть обнаружен в крови только по РНК, так как уровень вирионных частиц и вирусных антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому главным диагностическим критерием являются антитела, содержание которых в крови достаточно хорошо коррелирует с персистенцией вируса в гепатоцитах и вирусемией. «Золотым стандартом» служит обнаружение вирусспецифических РНК - последовательностей, амплифицированных после обратной транскрипции при помощи ПЦР.

Антитела(АНТИ-HCV)

Диагностические тесты прошли трехэтапную эволюцию. В системах двух первых поколений антигенами служили рекомбинантные HCV-пептиды; в тестах 3-го поколения часть из них заменена на синтетические пептиды и их эпитопные фрагменты.

Скрининговые тесты. Системы ИФА-3, сконструированные на основе сердцевинного (С22) и неструктурных (NS3-NS5) пептидов, отличаются повышенной чувствительностью, специфичностью и выявляют антитела на более ранних этапах инфекции. Скринирование донорской крови при помощи ИФА-3 практически исключает передачу вируса гепатита С реципиентам.

Подтверждающие тесты. Для подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С в образцах сыворотки с первично положительным результатом ИФА проводится постановка иммуноблоттинга с использованием рекомбинантных антигенов или синтетических пептидов. Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам. Антитела к вирусу гепатита С впервые могут быть обнаружены через 10-14 дней после начала заболевания. В первую очередь определяются антитела класса М к структурному белку С . HCV-PHK

Поскольку геном ВГС представлен одноцепочечной РНК, то на начальном этапе анализа с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ) получают комплементарную ДНК (кДНК), которая в дальнейшем служит матрицей в ПЦР. Вирусная РНК определяется в сыворотке крови больных гепатитом С через 1-2 недели после заражения. Наличие в крови вирусной РНК служит маркером репликации вируса.

 

47.Вирус гепатита G.

Вирус гепатита G включен в состав семейства Flaviviridae, род Hepacаvirus. Геном вируса представлен позитивной одноцепочечной РНК.

Гепатит G относится к инфекциям с парентеральным путем передачи, и источником распространения вируса являются больные острым или хроническим гепатитом G и носители HGV. Вирус можно обнаружить в сыворотке, плазме, мононуклеарных клетках периферической крови. Возможен половой путь заражения. Доказано отсутствие пути передачи от матери плоду. Вирус гепатита G часто обнаруживают в сыворотке крови больных вирусными гепатитами В, С и Д. Клиническая значимость вируса гепатита G практически не изучена

HGV РНК в сыворотке крови выявляется чаще в сочетании с маркерами других вирусов. Случаи моноинфекции наблюдаются редко. Отмечена малая патогенностъ этого вируса, что привело к сомнению по поводу гепатотропности HGV. Показано отсутствие репликативной формы HGV РНК (HGV-отрицательная РНК) в биоптатах печени. Эти факты привели к заключению, что печень не является главным местом репликации HGV. Предполагают, что вследствие своей лимфотропности HGV может инфицировать гепатоциты при попадании лимфоцитов в печень, при участии других факторов поражения печени.

С использованием ПЦР и метода in situ гибридизации установлено, что HGV реплицируется в мононуклеарных клетках крови. Полагают, что если HGV не имеет прямой патогенетической роли при болезнях печени, то они могут быть вирусами или агентами с другими свойствами, которые также строго не ассоциируются с болезнями печени.

Лабораторная диагностика.

Из сыворотки крови проводится выделение РНК. Наличие в сыворотке крови РНК вируса гепатита G однозначно свидетельствует об инфицированости данного лица вирусом гепатита G.

ТТ-вирус был открыт в 1997 г. японскими исследователями с помощью варианта полимеразной цепной реакции. Этот вирус по инициалам больного был назван ТТ-вирусом (TTV).

Дальнейшее изучение структуры и свойств показало, что это мелкий диаметром 30-50 нм ДНК-содержащий простой вирус. Геном TTV представлен одноцепочечной негативной циркулярной ДНК. В настоящее время высказано предположение, что TTV является членом нового самостоятельного семейства, для которого предложено название "Circinoviridae" (от лат. circinatio -описывающий круг).

TTV передается как парентеральным, так и фекально-оральным путем [Okamoto H. et al., 1999]. ДНК обнаруживается также в слюне, слезной жидкости, семенной жидкости и вагинальном секрете, что обусловливает возможность инфицирования воздушно-капельным и половым путем. Доказана возможность внутриутробного инфицирования, а также инфицирования в родах и постнатально при грудном вскармливании и уходе за ребенком, чем объясняется довольно высокий уровень инфицированности TTV среди детей.

Основным методом диагностики TTV-инфекции до настоящего времени остается определение ДНК TTV в сыворотке крови.

Патогенность TTV до настоящего времени окончательно не определена. В подавляющем большинстве исследований показано, что TTV не вызывает острый и хронический гепатит, гепатоцеллюлярную карциному, какие-либо другие заболевания у человека и не оказывает влияние на течение инфекции других гепатотропных вирусов. Однако результаты некоторых работ по-прежнему не позволяют полностью исключить возможность патогенности в определенных условиях некоторых генотипов или вариантов TTV

.

39.Вирусные геморрагические лихорадки.

Благодаря широкому распространению в различных регионах мира, высокой контагиозности некоторых из них, возникновению значительных эпидемических вспышек, довольно тяжелому течению и серьезным последствиям вирусные геморрагические лихорадки (ГЛ) приобрели в

последнее время большое значение Несмотря на эндемичность, они могут выходить за пределы своего географического распространения.

В группу ГЛ входят 12 самостоятельных вирусных болезней.

Вирусы, вызывающие ГЛ, обладают тропизмом к клеткам эндотелия.

Существенная особенность патогенеза - развитие геморрагического синдрома в клинике ГЛ, который обусловлен повреждением эндотелия сосудов, непосредственным повреждением тромбоцитов, нарушениями системы свертываемости крови.

В клинике ГЛ наблюдается:

• развитие геморрагической сыпи,

• развитие кровоизлияний,

• обильные кровотечения из различных органов и тканей,

• нарушение функции большинства органов и систем,

• нарушения сосудистого тонуса вплоть до развития шока и коллапса

 

38.Из группы ГЛ флавивирусную этиологию имеют омская клещева ГЛ, желтая комариная ГЛ и комариная ГЛ денге.

Омская ГЛ распространена в Западной Сибири, зарегистрирована впервые в 43-45 годах и была вначале расценена как атипичная туляремия или лептоспироз.

Возбудитель омской геморрагической лихорадки входит в антигенную группу вирусов клещевого энцефалита. Омская геморрагическая лихорадка - эндемическое заболевание, передающееся через укусы клещей рода Dermacentor и иногда путем заражения при контакте с ондатрами или водяными крысами. Подъем заболеваемости отмечается в мае-июне, затем в сентябре-октябре. Инкубационный период от 2 до 5-7, иногда до 10 дней. Начало острое: озноб с температурой до 39-40 °С, головная боль, слабость. С 3-4-го дня развиваются геморрагические симптомы - мелкоточечная сыпь, кровотечения (носовые, желудочно-кишечные, маточные). Отмечаются также бронхит и пневмония. Лихорадка продолжается от 5 до 15 сут. и обычно заканчивается выздоровлением, на фоне которого иногда наблюдается вторая волна заболевания.

Комариные флавивирусные лихорадки. Комплекс вирусов желтой лихорадки включает: вирус желтой лихорадки, вирус Уганда С, вирус Зика, вирус Банзи ( Н-336 ).

Эти вирусы - возбудители геморрагических лихорадок в районах тропиков Африки и Южной Америки. Желтая лихорадка входит в группу особо опасных карантинных инфекций.

Желтая лихорадка

Желтая лихорадка - острое тяжелое инфекционное заболевание. Из-за высокой летальности (40-90%) и тяжелого течения отнесено в группу особо опасных конвенционных (включенных в международные соглашения) заболеваний.

Вирус желтой лихорадки открыт в 1901 г. В. Ридом с соавторами, относится к семейству Flaviviridae и обладает свойствами, типичными для флавивирусов. Вирус хорошо размножается в курином эмбрионе и в различных культурах клеток. Из лабораторных животных к нему восприимчивы белые мыши и обезьяны (Macacus rhesus). В антигенном отношении однороден. Эпидемиология.

Эпидемиологически различают два варианта желтой лихорадки:

1. Желтая лихорадка джунглей. Основным резервуаром вируса служат приматы, хотя к вирусу чувствительны некоторые виды других животных (опоссумы, муравьеды, броненосцы и др.). Заражение обезьян (и других хозяев) происходит через укусы комаров. Эпизоотии среди обезьян повторяются через 3-4 года, после них вся популяция приматов или погибает, или приобретает иммунитет.

2. Городская (классическая) форма желтой лихорадки. При этой форме болезни основным источником вируса становится инфицированный в природном очаге человек. Вирус размножается в организме человека, а во внешнюю среду не выделяется. Человек становится заразным с конца инкубационного периода (он продолжается 3-6 дней, в отдельных случаях до 10—12 дней) и в первые 3-4 дня болезни (стадия вирусемии). Заражение происходит преимущественно через укусы самки комара Aedes aegypti. Комар, напитавшись, становится заразным при 36-37 °С через 4-5 сут. Эпидемии желтой лихорадки возникают при высокой влажности и жаре, способствующих массовому размножению комаров.

В отличие от желтой лихорадки джунглей, являющейся зоонозной инфекцией, городская желтая лихорадка - антропонозное заболевание с единственным, трансмиссивным путем передачи. Патогенез и клиника. В развитии болезни выделяют следующие основные стадии:

1. заражение (вирус проникает в организм);

2. размножение вируса в регионарных лимфатических узлах;

3. вирусемия, которая соответствует началу болезни, начальный (общетоксический) период;

4. поражение различных органов и систем, в особенности эндотелий капилляров, вследствие чего развивается геморрагический диатез, при этом особенно страдают печень и почки, что приводит к печеночно-почечной недостаточности. В морфологических препаратах печени обнаруживают тельца Каунсильмана - очаги гиалинового некроза.

5. формирование иммунитета и постепенное выздоровление.

Болезнь может протекать как в легкой форме, так и молниеносно с летальным исходом. Летальность при тяжелой форме болезни достигает 85-90%.

Иммунитет. После перенесенного заболевания остается прочный длительный иммунитет, обусловленный антителами и клетками иммунной памяти.

Лабораторная диагностика включает использование вирусологического, биологического и серологического методов. Вирус из крови может быть выделен путем заражения куриных эмбрионов или культур клеток. Для идентификации вируса используют реакцию нейтрализации. Биологическая проба заключается в заражении кровью мышей-сосунков внутримозговым путем, у них вирус вызывает смертельный энцефалит. Для обнаружения вирусспецифических антител в парных сыворотках используют РСК, РТГА, РН и другие серологические реакции.

Лечение. Специфических методов лечения нет, проводится патогенетическая терапия.

Специфическая профилактика. Основным методом борьбы с желтой лихорадкой является активная иммунизация в эпидемических очагах с помощью живой вакцины, полученной М. Тэйлором в 1936 г. (штамм 17Д). Вакцинируют детей с первого года жизни и взрослых в дозе 0,5 мл подкожно. Поствакцинальный иммунитет развивается через 10 дней после прививки и сохраняется в течение 10 лет. Все лица, направляющиеся в эпидемические очаги и выезжающие из них, подлежат обязательной вакцинации.

 

48. РЕТРОВИРУСЫ

РОД ТИПОВОЙ ВИД И НЕКОТОРЫЕ ПРЕДСТАВИТЕЛИ

АLPHARETROVIRUS Вирусы лейкоза, саркомы птиц

BETARETROVIRUS Вирус рака МЖ мышей

GAMMARETROVIRUS Вирусы саркомы и лейкемии мышей, кошек, приматов

DELTARETROVIRUS Т-лимфотропные вирусы человека

EPSILONRETRAVIRUS Вирус саркомы кожи

LENTIVIRUS Вирус иммунодефицита человека, вирус Висна-Меди

SPUMAVIRUS Пенящие вирусы человека и обезьян

Ретровирусы -- семейство получило свое название от англ. Retro – обратно, назад, так как в составе вирионов имеется обратная транскриптаза, или ревертаза. Вирусы, входящие в это семейство, обладают целым рядом особенностей.

Геном представлен однонитевой линейной +РНК в виде 2-х идентичных молекул -- единственное семейство с диплоидным геномом.

Наличие обратной транскриптазы

Постоянная изменчивость вируса из-за высокой мутабельности

Кубический тип симметрии

ВИЧ-1 – основной возбудитель СПИДа. ВИЧ-2 – Эндемичен для Западной Африки (редко встречается в других регионах)

Собственные оболочечные белки вируса:

•трансмембранный гликопротеин gp41 (glykoprotein 41kD)

•внешний белок – gp120 (glykoprotein 120 kD).

Gp120 и gp 41 формируют отростки на поверхности вирионов, имеющих "шляпки" диаметром 15нм. "Шляпка" отростка состоит из трех молекул gp120. На вновь образованной вирусной частице имеется 72 отростка. От этих отростков зависит способность вируса проникать в клетки, обуславливая их гибель.

Нуклеоид вируса имеет продолговатую форму, вытягиваясь вдоль всего диаметра вириона. Оболочка нуклеоида построена из молекул белка р24 (protein 24kD) и p18 (protein 18kD).

Между наружной оболочкой вириона и нуклеоида существует какбы каркас толщиной 5-7нм. Этот каркас состоит из р17. Внутри нуклеоида содержится три компонента.

Первый – геном вируса, представляющий собой диплоидный набор одноцепочечных молекул РНК.

Второй – р7, связанный с РНК.

Третий – комплекс ферментов (обратная транскриптаза, протеаза, РНКаза, интеграза).

ГЕНОМ ВИЧ

Геном ВИЧ существует в виде геномной РНК и в виде ДНК, интегрированной в какую-либо хромосому клетки-хозяина.

Такая ДНК-копия вирусного генома называется «провирус». Геномная РНК присутствует в составе зрелых вирусных частиц - вирионов ВИЧ. Кроме зрелого вириона геномная РНК ВИЧ определяется в инфицированной клетке-хозяине в ранние сроки после инфицирования, а также в терминальной стадии инфекционного процесса.

Геном вируса включает 9 генов.

А. Структурные гены

gag (группоспецифические антигены) Þ кодирует трансляцию белка-предшественника p55, который в ходе процессинга расщепляется на р17, р24, р 7, р8

env (envelope=оболочка, gp шипов) Þ кодирует трансляцию белка-предшественника gp160, который в ходе процессинга расщепляется на два белка оболочки вириона – gp 120 и gp41. Его важной характеристикой является необыкновенно высокая изменчивость

pool (полимераза) кодирует белок-предшественник, в результате процессинга которого получаются четыре продукта:

1. обратная транскриптаза (ревертаза) с молекулярной массой 66kD и 51kD;

2. РНКаза 15kD – катализирует расщепление геномной РНК вируса

3. Протеаза 10kD и 11kD обеспечивает процессинг белков gag и pol;

4. Интеграза (эндонуклеаза) 31-34kD катализирует расщепление ДНК хромосомы клетки-хозяина и воссоединение с ДНК провируса.

Б. Регуляторные гены

tat (трансактиватор транскрипции) Þ активация синтеза РНК вируса на матрице ДНК-транскрипта

rev (регулятор экспрессии вирусных белков) Þ перенос РНК-транскрипта в цитоплазму и синтез белков вируса (переход от латентной инфекции к продуктивной). Контроль работы генов gag, pol, env.

nef (отрицательный фактор экспрессии) Þ переход к латентной инфекции, снижение экспрессии клеточных CD4

vpu (вирусный белок u - р16) Þ репликация провирусной ДНК

Структура генома ВИЧ классическая, свойственная всем ретровирусам. Он содержит три больших гена структурных белков, обозначаемых gag, pol, env, и дополнительные малые гены, кодирующие регуляторные белки, - tat, vif, nef, rev, vpr, vpu, vpx. С диагностической точки зрения важны все структурные гены и ген nef.

Что касается ВИЧ-2, то его геном несколько больше, чем у ВИЧ-1. Его антигенный состав несколько отличается от такового у ВИЧ-1. Поверхностный эпимембранный гликопротеид имеет меньшую молекулярную массу, чем gp120, и обозначается gp105. Однако, по своим свойствам и функции gp105 не отличается от gp120.

Из животных к ВИЧ-1 восприимчивы шимпанзе.

Штаммы ВИЧ

Рецепторы для связи с gp120:

CD4 – основной рецептор.

дополнительные ко-факторы – рецепторы к хемокинам.

Штаммы ВИЧ по тропизму к ко-факторам :

макрофаготропные ( М-тропные) – низкий уровень репликации, не образуют симпласты -- фенотип “slow/low”

Т-лимфотропные (Т-тропные) --высокий уровень репликации, образуют симпласты -- фенотип “rapid/high”

вирусы с двойной тропностью

Прогрессирование ВИЧ-инфекции -- это смена фенотипа от М- к Т-

Существует несколько путей попадания ВИЧ внутрь клеток. Их разделяют на специфические (опосредованные через специфический рецептор для ВИЧ – молекулу CD4) и неспецифические (независимые от рецептора CD4).

Клетками-мишенями для ВИЧ могут являться Т4-лимфоциты (хелперы/индукторы), макрофаги, дендритные лимфоциты и их незрелые предшественники (клетки Лангерганса в коже), моноциты, эозинофилы, мегакариоциты, тимоциты, В-лимфоциты, нейроны, олигодендроциты, астроциты, эпителиальные клетки (толстый кишечник), клетки хорионтрофобласта плаценты, спермии, клетки эпителия шейки матки. Практически все они обладают рецепторами CD4. Однако, вопросы восприимчивости клетками ВИЧ до конца не понятны (связывание вируса с молекулой CD4 недостаточно для внедрения внутрь клетки; ВИЧ способен инфицировать клетки, не имеющие CD4-рецепторов)

 

49. Вирусогенетическая теория новообразований. Теория интеграционных вирусов. вирус полиомиелита в культуре ткани мо­жет присоединяться к клеточной ДНК и вызывать нео­пластическую трансформацию. Дальнейшие исследова­ния показали, что, интегрируя с геномом клеток, опухо-леродные вирусы функционируют в них как трансдуциро-ванные в бактериях гены, изменяя их наследственные свойства после определенного срока латенции. Превратив клетку в злокачественную, онкогенный вирус в дальней­шем развитии опухоли не участвует, но сохраняется в ней как часть хромосомы. Ввиду утраты некоторых генов, ин­тегрированный вирус теряет способность к воспроизвод­ству целых вирусных частиц. По этой причине в опухоли обнаруживаются лишь структурные компоненты вируса (маскированная форма вируса, «дремлющий» вирус) и особые гетерогенные антигены. Маскированные вирусы активируются при пассажах через организм чувствитель­ных животных, в клетках которых происходит образова­ние полноценных вирионов.

Гипотезы онкогена и онкогенного протовируса. В нас­тоящее время вирусогенетическая теория новообразова­ний дополнена гипотезами онкогена и протовируса.

По гипотезе онкогена, предложенной Р. Хюбнером и Дж. Тодаро, в геноме каждой клетки организма новорожденных содержатся опероны онкогенных вирусов, способ­ных детерминировать образование трансформирующего белка, индуцирующего злокачественное перерождение клеток. Это в течение долгого времени не происходит по­тому, что после рождения они сразу же подавляются спе­циальными репрессорами. Активация онкогенов происхо­дит только после их дерепрессии. Провоцирующими ее агентами могут явиться многие экзогенные и эндогенные факторы. В частности, репрессоры онкогенов могут быть сняты в процессе старения, изменения гормональной дея­тельности и действия таких мощных мутагенов, как диок­сины, метилхолантрен и бензо(а)пирен, ионизирующая радиация, УФ-лучи, магнитные и электромагнитные по­ля. По гипотезе онкогена, таким образом, в основе опухо­левого роста клеток лежит нарушение нормального функ­ционирования генетического аппарата клеток .

Согласно гипотезе протовируса, никаких онкогенов нормальная клетка не имеет. Ее автор Г. Темин считает, что к злокачественному перерождению ведет случайное образование в хромосоме клетки структурных генов онко-генного вируса (онкогенного протовируса), которое проис­ходит в процессе дифференциации тканей, когда в генети­ческий аппарат клеток многократно включаются новые фрагменты ДНК (нормальные протовирусы).

Антигенно-биохимические сдвиги при злокачествен­ном перерождении клеток. Вирусная трансформация нормальных клеток в злокачественные сопровождается антигенным переструктурированием и нарушением энер­гообмена в них. Ранее всего в перерождающихся клетках появляется особый ядерный белок или Т-антиген (tumor -опухоль), отличающийся по структуре от вирусных и клеточных протеидов. Далее в опухолевых клетках про­исходит антигенная трансформация внешних мембран. Прежде всего, в них накапливается вирусспецифический антиген V, аналогичный виду онкогенного вируса, и ви-доспецифический для ткани Т-антиген, препятствующий пересадке опухоли, вследствие чего получил название трансплантационного. Параллельно с этим, в опухолевых клетках обнаруживаются несвойственные им изоантиге-ны других клеток, например почечные в печеночных или наоборот, что называют антигенной дивергенцией. Не­редко опухолевые клетки утрачивают собственные для них антигены, и это принято именовать антигенным уп­рощением. В некоторых опухолевых клетках появляются эмбриональные антигены, по структуре аналогичные тем, которые содержались у плода во время внутриутроб­ного развития. Так, например, при первичном раке пече­ни появляется а-фетопротеин (эмбриональный эквива­лент сывороточного альбумина), при раке толстой кишки ракоэмбриональный антиген, при хориокарциноме и семиноме хорионический гонадотропин (гормон, в норме продуцируемый плацентой), которые полностью исчеза­ют из тканей человека спустя несколько недель после рождения. Появление эмбриональных антигенов в опухо­левых клетках называют антигенной реверсией. Кроме того, в опухолях обнаруживаются и другие гетерогенные антигены, например белки вирусной оболочки, регуля-торные белки и ферменты. Опухолевые клетки легче и быстрее, чем нормальные, склеиваются растительными агглютининами. Полагают, что это связано с обнажением и скучиванием на отдельных участках оболочки рецепто­ров. В трансформированных клетках резко снижается уровень циклического аденозин-3,5-монофосфата, что стимулирует их деление. Более того, злокачественные клетки утрачивают свойства контактной задержки и, в отличие от нормальных, продолжают размножаться, на­ползая друг на друга. И, наконец, в них накапливается большое количество мукополисахаридов, скрывающих чужеродные антигены, а также изменяется транспорт уг­леводов и других веществ.

Антигенная дивергенция или антигенное упрощение не вызывают иммунного ответа. Организм недостаточно сильно реагирует на антигенную реверсию, так как ауто-агрессивные клоны лимфоцитов к ним элиминируются в процессе внутриутробного развития плода. Иммунная система организма выраженной реакцией элиминации от­вечает на антигены онкогенного вируса, вызвавшего опу­холь, и трансплантационный антиген.

ти­сыворотки к ней.

 

 

50.Онкогенные ДНК-вирусы. Вначале внимание сосредо­точилось на ДНК-содержащих вирусах полиомы, вызыва­ющих множественные опухоли у мышей, и на обезьяньем вирусе SV-40, выделенном из клеток почек обезьян-резус, которые вакуолизируют клетки зеленых мартышек и трансформируют клетки хомяков, крыс и других живот­ных. Эти вирусы, очень сходные с вирусом папилломы кролика, позже объединили в группу папова (от первых слогов — папиллома, полиома, вакуолизирующий). Далее в экспериментах была установлена опухолеродность адено­вирусов (особенно 12, 18 и 31-го типов). Настоящей сенса­цией явилось обнаружение опухолеродных свойств у виру­са герпеса 4-го типа, или ЭБВ, который выделили Майкл

Эпстайн и Ивонна Барр из лимфомы Беркитта, поражаю­щей детей 2-14 лет в Экваториальной Африке (Уганда). Эта саркома поражает челюсти, слюнные железы, глазни­цу, трубчатые кости и внутренние органы. Развивается бо­лезнь необыкновенно быстро. Средняя продолжительность жизни больного ребенка не превышает 3 мес. Затем вирус Эпстайна - Барр нашли в лимфосаркоме африканской жа­бы ксенопус, которую теперь считают природным источни­ком лимфомы Беркитта. Далее появились сообщения, что на юге Китая вирус ЭБВ вызывает назофарингиальную карциному, в Европе и Америке - инфекционный моно-нуклеоз и, с большим постоянством, рак шейки матки. Тщательное изучение ЭБВ завершилось обнаружением опухолеродных свойств у всех видов сем. Herpesviridae, исключая разве только вирус varicella-zoster.

Полиомавирусы	Опухоли только в эксперименте
Папилломавирусы	Доброкачественные новообразования кожи и слизистых, карциномы у человека.– ПВЧ16, ПВЧ18. Высокоонкогенный серотип – ПВЧ16
Аденовирусы (серотипы 12,18,31)	Онкогенная трансформация клеточных культур. Опухолей в естественных условиях не вызывают
Герпесвирусы 1. вирус Эпштейн-Барр   2. вирусы папио и пан 3 .вирус саимири, ателес 4 .вирус болезни Марека.	а) В-клеточная лимфома Беркитта б) назофарингеальная карцинома В-лимфомы обезьян Т-лимфомы обезьян В-лимфомы птиц
Поксвирусы	Фиброма Шоупа у кроликов в эксперименте
Гепаднавирусы - вирус гепатита В	Первичная гепатоцеллюлярная карцинома у человека
Флавивирусы вирус гепатита С	Рак печени у человека

 

51.иммунодефицита человека

Таксономия. Вирус иммунодефицита человека выде­лил в 1983 г. от больных лимфоаденопатией Л. Монтанье, назвав его в соответствии с этим LAV (lymphoadenopathy associated virus), т. е. вирусом, ассоциированным с лимфо­аденопатией. Год спустя независимо от него Р. Галло вы­делил этот же вирус от больных с синдромом клеточного лейкоза, обозначив его HTLV-III (human t-lymphotropic irus), т. е. вирусом человека третьего типа с тропизмом к -лимфоцитам. После установления их идентичности ви­рус стали называть HIV (human immunodeficiency virus) или ВИЧ и отнесли его в подсемейство Lentivirinae сем. Retroviridae. Основными антигенами ВИЧ являются груп-по- и видоспецифические сердцевинные белки р24 и ти-поспецифические оболочечные гликопротеиды gp41 и gpl20, по структуре которых различают два типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2, циркулирующего преимущественно в За­падной Африке и отличающегося сравнительно низкой вирулентностью.

Ультраструктура ВИЧ и его клетки-мишени. Зрелый вирион имеет округлую форму и диаметр 120-130 нм (рис. 115). В его сердцевине, которую формируют белки р18 и р24, находится сдавленный с боков латеральными тельцами вытянутый нуклеоид с наличием в нем связан­пых внутренними белками (р7, р9) двух молекул вирусной +РНК, обратной транскриптазы, интегразы и РНКазы, упакованных в оболочку из протеина р24. Суперкапсид пируса отделен от капсида матричным р17. Он представ­лен липопротеиновым слоем, в котором содержатся грибо-иидные выросты. Внутренняя их часть, прилежащая к мембране, и трансмембранная - образованы белком gp41, обеспечивающим слияние вируса с клеточной мембраной, а выступающая над оболочкой - белком gpl20 с локализо­ванными в нем сайтами распознавания клеточных мемб­ранных молекул CD4, являющихся основным проводни­ком ВИЧ внутрь клетки.

Главными мишенями для вируса являются CD4⁺-T -хел-перы, а также незрелые и периферические Т-клетки, экспрессирующие одновременно CD4- и СБв-рецепторы. Вирусом легко инфицируются также дендритные клетки и макрофаги, несущие на поверхности небольшое число мо­лекул CD4, но содержащие значительное их количество в цитоплазме. Мишенями для ВИЧ оказались также эозино-филы, мегакариоциты, ряд нервных, некоторые эпители­альные, эндотелиальные клетки и сперматозоиды, содер­жащие если не молекулу CD4, то ее варианты. Получены также данные, что проводниками вирусов в клетку могут являться не только CD4, но и другие мембранные структу­ры как дополнительные корецепторы. В частности, для штаммов ВИЧ-1, пассируемых на Т-клеточных линиях, проводником вируса оказался белок фузин - рецептор а-хемокинов CXCR4, а для штаммов, репродуцируемых на макрофагальных линиях, - CCR5, являющийся рецепто­ром р-хемокинов. Вспомогательную роль в проникновении ВИЧ в макрофаги играет также р2-интегрин LFA-1.

Цитопатогенные эффекты ВИЧ. Основным механиз­мом цитопатогенного действия ВИЧ является поврежде­ние им мембран клеток в результате бурного размноже­ния. За 1 с, в частности, через мембрану почкуется более 25 тыс. вирусных частиц, что заканчивается некрозом клеток. Гибель зараженных вирусом клеток во многих случаях является следствием слияния их оболочек и обра­зования синцития, что обусловливает прямой путь пере­дачи ВИЧ от одной клетки к другой. Значительная их часть, в том числе неинфицированных, гибнет по меха­низму апоптоза, т. е. программировано вследствие поступ­ления «команды» извне или ядра при взаимодействии gpl20 с молекулами CD4.