Лабораторная диагностика.

Материалом для исследования служит:

• отделяемое носоглотки, которое получают либо путем смыва, либо с помощью ватно-марлевых тампонов,

• мазки-отпечатки слизистой носовых ходов,

• кровь и секционный материал.

Мазки-отпечатки слизистой оболочки носовой полости и носоглоточное отделяемое берут в первые три дня болезни Методы диагностики: Экспресс-диагностика:

• иммунофлуоресцентный метод (прямой РИФ), по обнаружению вирусного антигена в мазках-отпечатках или в смывах из носоглотки больных,

• иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления вирусных антигенов в материале от больных,

• метод гибридизации НК с помощью РНК-зонда.

Вирусологический: заражение 10-11-дневных куриных эмбрионов (лучше в амниотическую полость).После 48ч инкубации эмбрионов при температуре 33-35°С вирус обнаруживают в содержимом амниотической полости с помощью РГА, используют эритроциты кур, морских свинок и 0-группы крови человека. Идентифицируют вирус с помощью РТГА, применяя типо- и подтипоспецифические сыворотки.

Серологический метод: специфические антитела и возрастание их титра (в парных сыворотках) выявляют с помощью РТГА, РСК, иммуноферментного метода, используя известные вирусы в качестве Аг. Наивысшие титры антител определяются на 9-12 день от начала заболевания.

Разработана иммуноферментная методика «бескровного» обнаружения специфических секреторных IgA в слюне.

Применяется реакция торможения нейраминидазы, основанная на уменьшении скорости ферментативной активности специфическими антителами.

Специфическая профилактика. Ежегодно в мире гриппом болеют сотни миллионов людей, что наносит колоссальный ущерб здоровью населения и экономике каждой страны. Надежным средством борьбы с гриппом является создание коллективного иммунитета.

Для этой цели предложены и используются следующие типы вакцин:

1)живая из аттенуированного вируса;

2)убитая цельновирионная;

3)субвирионная вакцина (из расщепленных вирионов);

4)субъединичная - вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу. Детей от 6 мес. до 12 лет, по рекомендации ВОЗ, следует прививать только субъединичной вакциной как наименее реактогенной и токсичной.

Лабораторная диагностика.В

Вирус гриппа типа B можно культивировать в первичных культурах почек обезьян, эмбриона человека и перевиваемых культурах почек собаки (МДСК). Идентификацию вируса в культуре проводят в реакции Гадс, а идентификацию - в РТГАдс. В культуральной жидкости вирус обнаруживают в РГА.

С- Диагностика основана на выделении вируса в куриных эмбрионах; применяются также иммунофлуоресцентный метод и другие серологические реакции.

Вирус гриппа В - основные свойства.

• Структура вириона сходна со структурой вируса А.

• Геном состоит из 8 фрагментов, кодирующих 3 неструктурных и 7 структурных белков.

• По антигенным свойствам гемагглютинина и нейраминидазы различают несколько серовариантов.

• Процесс антигенного дрейфа выражен слабее, чем у вируса А, шифта нет.

• Вирусы гриппа типа В являются виновниками локальных вспышек и эпидемий

• Клиника заболевания такая же, как и при гриппе типа А.

Специфическая профилактика осуществляется так же, как и против гриппа А.

Вирус гриппа С.

Вирион имеет такую же форму, как вирусы типов А и В. Он отличается от них антигенными свойствами и по ряду других признаков. Геном представлен однонитевой негативной РНК из 7 фрагментов, нуклеотидная последовательность которых отличается от таковых вирусов типов А и В. У вируса типа С отсутствует нейраминидаза. Вирус типа С является причиной спорадических заболеваний гриппом. Клиника заболевания такая же, как при относительно умеренных формах гриппа А.

12.Специфическая профилактика и лечение. В настоящее время создано много гриппозных вакцин: из живых и инак-тивированных вирусов; мутантов и рекомбинантов; целых и разрушенных вирионов, а также из очищенных антиге­нов (гемагглютининов и нейраминидаз), которые применя­ются интраназально, энтерально и парентерально.

Широко использовавшиеся ранее гриппозные вакцины из ослабленных штаммов вирусов А и В для интраназально-го и перорального применения, заменены в России очищен­ной и концентрированной цельновирионной вакциной, со­держащей по 20 мкг гемагглютининов вируса гриппа А двух антигенных разновидностей (H1N1 и H3N2) и 26 мкг вируса типа В. Она применяется однократно и вводится подкожно в объеме 0,5 мл или двукратно - интраназально в том же объ­еме (по 0,25 мл в каждый носовой ход) с интервалом 21-28 дней. Применяется также трехвалентная полимер-субъ-единичная вакцина Гриппол, содержащая поверхностные антигены вируса гриппа трех типов с иммуностимулятором полиоксидонием. Ее вводят детям с 3 лет и взрослым одно­кратно подкожно по 0,5 мл. Специфическую профилактику гриппа у лиц старше 65 лет, взрослых и детей с хронически­ми заболеваниями почек, легких, сердца следует проводить очищенной инактивированной формолвакциной француз­ской фирмы «Пастер-Мерье» Ваксигрип, содержащей вирус гриппа трех штаммов. Она выпускается в шприцах с одной дозой и во флаконах по 10, 20 и 50 доз. Взрослых и детей вакцинируют однократно, вводя им подкожно или внутри­мышечно 0,5 мл препарата, детям младше 10 лет - две инъ­екции по 0,25 мл с интервалом 1 мес.

После противогриппозной вакцинации показатели напряженности гуморального иммунитета соответствуют постинфекционному, но эффективность его в связи с уни­кальной способностью вируса гриппа А изменять антиген­ную структуру, к сожалению, может утрачиваться.

Ограниченно профилактика гриппа проводится реман­тадином, арбидолом, оксолином, интерфероном, имму­ноглобулином. Эти же препараты могут назначаться и для лечения, особенно в первые 2-3 дня заболевания. Для профилактики бактериальных осложнений гриппа при­меняют сульфаниламиды и антибиотики широкого спектра действия.

 

13. Парамиксовирусы - крупные вирусы сферической формы диаметром 150-300нм, сложные суперкапсидные. В состав семейства входит 4 рода:

• Род Paramyxovirus, в него входят вирусы парагриппа 1 и 3 серотипов;

• Род Rubulavirus, в него входят вирус эпидемического паротита, вирусы парагриппа 2 и 4 серотипов;

• Род Morbillivirus - вирус кори;

• Род Pneumovirus - вирус респираторно-синцитиальный. Общие свойства вирусов семейства:

• геном -- однонитевая нефрагментированная -РНК, состоит из 6 генов.

• с вирионной РНК связаны белок NP и полимеразные белки Р и L,

• нуклеокапсид со спиральным типом симметрии.

• нуклеокапсид окружен оболочкой из матриксного белка М

• суперкапсид состоит из липидного бислоя с вмонтированными гликозилированными белками HN и F (от англ. fusion - слияние),

• которые выступают в виде шипов.

Белок HN обладает гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью, ответствен за связывание вируса клеточными рецепторами. Белок F опосредует три вида активности:

• слияние вирусной мембраны с мембраной клетки и ее лизосом;

• слияние клеток, которое обеспечивает возможность вирусу распространяться от клетки к клетке, минуя околоклеточную среду;

• гемолиз эритроцитов.

Таким образом, парамиксовирусы обладают гемагглютинирующей, нейраминидазной, симпластообразующей и гемолитической активностью, однако у разных типов вирусов эти свойства проявляются в разной степени. Их жизненный цикл протекает в цитоплазме клетки.

 

14.Вирусы парагриппа человека по поверхностным антигенам разделены на четыре сероварианта, по внутренним белкам имеют общие детерминанты.

Род Paramyxovirus включает 1 и 3 серотипы, а 2 и 4 серотипы входят в род Rubulavirus.

Вирусы парагриппа вызывают в основном локальные вспышки, однако они наблюдаются повсеместно, особенно в странах с умеренным климатом.

Путь передачи - воздушно-капельный. Вирусы выделяются от больного в окружающую среду с 3 до 10 дня болезни. Срок инкубации - 3-6 дней. После перенесенного заболевания иммунитет типоспецифический.

Методы специфической профилактики не разработаны.

Вирус эпидемического паротита.

Эпидемический паротит (свинка) является острой инфекцией, характеризующейся поражением одной или обеих околоушных слюнных желез и возможным поражением ряда других органов.

Вирус эпидемического паротита имеет типичную для парамиксовирусов морфологию.

Он хорошо размножается в куриных эмбрионах при заражении их в амниотическую полость. Вирус культивируется в ряде клеточных культур с образованием симпластов, синцитиев и многоядерных гигантских клеток. Он вызывает агглютинацию морских свинок, человека группы 0, наименьшей чувствительностью обладают эритроциты кур.

Патогенез. Наиболее восприимчивы дети от 5 до 15 лет.

Заражение воздушно-капельным путем. Инкубационный период длится 18—21 день. Вирус перемещается из полости рта по стенонову протоку, где происходит его репродукция, сопровождающееся местным поражением тканей околоушных желез. Затем вирус поступает в кровь и разносится по всему организму, попадая в яичники, яички, поджелудочную и щитовидную железы, мозг. Примерно у 20% .мальчиков старше 13 лет развивается орхит, который может обусловить половую стерилизацию (стерильность).

Иммунитет. Перенесенная инфекция оставляет стойкий иммунитет. Существует только один антигенный тип вируса.

Корь {лат. morbilli) - острое вирусное заболевание преимущественно детского возраста, характеризующееся общей интоксикацией, повышением температуры, воспалением слизистых оболочек дыхательных путей и макуло-папулезной сыпью.

Вирус кори относится к роду Morbillivirus. Впервые вирус был выделен в 1954 г. Дж. Эндерсом с соавт. и Пибсом в культуре клеток почек обезьян.

Морфология вируса кори типична для парамиксовирусов. Диаметр вирионов 150—250 нм,

спирали нуклеокапсида— 17 нм.

Вирус имеет липопротеидную оболочку, в которую встроены гликопротеиды Н (гемагглютинин) и F (белок слияния, гемолизин), но у него отсутствует нейраминидаза. Вирус кори обладает гемагглютинирующей, гемолитической и симпластообразующей активностью. Геном вируса представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК.

В куриных эмбрионах вирус кори размножается плохо.

Для его выделения используют перевиваемые культуры клеток HeLa, KB, PL, Vero, MS, BSC1, или первично-трипсинизированные. В инфицированных культурах образуются гигантские многоядерные симпласты, включающие до 100 ядер, и синцитиев, формируются включения. В зараженных культурах проявляется гемадсорбция.

Вирус нестоек, быстро инактивируется в кислой среде, снижает свою активность при 37°С, при 56°С погибает через 30 мин., легко разрушается жирорастворителями, детергентами, очень чувствителен к солнечному свету. Устойчив к низкой температуре (-70 °С). Эти обстоятельства следует учитывать при транспортировке и хранении живой противокоревой вакцины.

Источник инфекции -- только больной человек. Инкубационный период составляет около 10 дней до момента повышения температуры и 14 дней до появления сыпи.

Патогенез. Вирус размножается в клетках эпителия носоглотки, трахеи и бронхов. Он попадает в кровь и вызывает поражения эндотелия сосудов. В результате -- сыпь. В полости рта обнаруживаются пятна Коплика — Филатова. В лимфатических узлах, миндалинах, аденоидах, селезенке обнаруживаются многоядерные гигантские клетки. Они обнаруживаются в кожных поражениях и пятнах Коплика — Филатова.

Клиника. Инфекция протекает с симптомами поражения верхних дыхательных путей (ринит, фарингит, конъюнктивит). Диагностическим признаком являются пятна Коплика — Филатова на слизистой оболочке щек. Сыпь папулезного характера сначала появляется на коже головы (в области лба и за ушами), а затем распространяется по всему туловищу и конечностям. Температура держится 7—8 дней.

Осложнения кори -- пневмония, в раннем периоде заболевания - отек гортани, круп. Редкое осложнение (примерно 1 на 2000 случаев) - энцефаломиелит у детей старше 8—10 лет.

Постинфекционный иммунитет прочный, пожизненный, обусловлен вируснейтрализующими антителами, Т-цитотоксическими лимфоцитами и клетками иммунной памяти.

Лабораторная диагностика.

Быстрая диагностика кори - РИФ специфического антигена в клетках эпидермиса кожи при взятии соскоба из участка сыпи, в многоядерных клетках из отделяемом носоглотки.

Обнаружение антител класса IgM в ИФА. У 97% больных менее чем через 1 нед после начала заболевания обнаруживают IgM, которые сохраняются в течение 60 дней.

Выделение вируса из смывов носоглотки и крови возможно в продромальном периоде и в течение первых суток после появления сыпи. Используют культуру клеток ПЭЧ, L-41, Vero FL.

Иммунопрофилактика кори и эпидемического паротита. Применение живой вакцины против паротита показано для детей 1 года, а также для подростков и взрослых, не болевших ранее эпидемическим паротитом. Вакцина вводится детям в 1 год подкожно однократно, обычно вместе с коревой вакциной и вакциной против краснухи.

RS-вирус - один из наиболее частых возбудителей ОРЗ у детей первых 2-3 лет жизни. Впервые выделен в 1956 г. от шимпанзе, а в 1957 г. Р. Ченок с соавторами выделили сходные штаммы от детей, больных ОРЗ. Hilleman назвал этот вирус «вирусом детства».

RS-вирус не обладает гемолитической активностью. Белок F вируса обеспечивает слияние двух типов:

- слияние мембраны вируса с мембраной клетки и ее лизосом;

- слияние инфицированной клетки с прилегающими неинфицированными клетками, вследствие чего и образуется синцитий - симпласт из клеток, связанных между собой цитоплазматическими отростками («сетчатая ткань»). Этот феномен и послужил основанием назвать вирус «респираторно-синцитиальным».

По антигенным свойствам различают три сероварианта вируса. Размножается в культурах многих штаммов перевиваемых клеток, не культивируется на куриных эмбрионах.

RS-вирус очень лабилен и легко разрушается, при нагревании до 55°С погибает за 5-10 мин.

Источник инфекции - больной человек. Заражение - воздушно-капельным путем. Инкубационный период 3-5 дней. Вирус размножается в эпителиальных клетках дыхательных путей, процесс распространяется и на их нижние отделы. У детей первых шести месяцев жизни -тяжелые бронхиты, бронхиолиты, пневмонии. Возможно развитие хронических РС-инфекций особенно в ассоциации с аденовирусами. У 75% детей трехлетнего возраста обнаруживаются антитела к вирусу. Постинфекционный иммунитет стойкий и длительный, он обусловлен появлением вируснейтрализующих антител, клеток иммунной памяти и секреторных антител класса IgA.

Лабораторная диагностика: быстрое обнаружение вирусных антигенов в отделяемом носоглотки (у погибших исследуют ткани легких, трахеи, бронхов) с помощью РИФ, возможно определение специфических антител.

 

15.Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных парамиксовирусами. При относительно легких формах бо­лезней парамиксовирусы с наибольшим постоянством вы­деляются из смывов носоглотки, а при вирусемиях - из мо­чи, крови и спинномозговой жидкости. Парамиксовирусы размножаются в культурах почек обезьян или плода чело­века, в частности на перевиваемых клетках HeLa, Нер-2, где образуются гигантские клетки и синцитий. Культуры вирусов выращивают 2-3 недели. Куриные эмбрионы ис­пользуют для культивирования вирусов паротита и пара­гриппа типа 1, при этом материал вводят в аллантоисную полость. Видовая принадлежность парамиксовирусов устанавливается с помощью РСК, РН, РТГА, РТГадс и ре­акции торможения гемолиза. Правда, следует отметить, что гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства у респираторно-синцитиального вируса отсутствуют.

Серодиагностика. Основана на определении динамики увеличения титра антител при исследовании парных сы­вороток, взятых с интервалом 3-4 недели, в реакциях РСК, РН, РТГА, РТГадс и торможения гемолиза.

В экспресс-диагностике парагриппа и кори может быть использована РИФ. При этом с целью обнаружения в эпите­лиальных клетках парагриппозных антигенов мазки делают из отделяемого зева и слизи нижней носовой раковины, а для выявления коревых включений - из осадка мочи в первые 5 дней после кожных высыпаний. Их обрабатывают мечены­ми антителами против вирусов парагриппа, гриппа и кори.

Иммунитет. Дети в первые 3 мес. жизни резистентны к парамиксовирусным инфекциям, но со второго полугодия иммунитет у них полностью утрачивается. После перене­сенной кори и эпидемического паротита развивается стой­кий пожизненный иммунитет. К другим парамиксовирус­ным инфекциям постинфекционный иммунитет - мало­напряженный и непродолжительный.

Профилактика. Специфическая профилактика разра­ботана только в отношении кори и эпидемического паро­тита. По календарю прививок она проводится в возрасте 1 года живыми ослабленными моновакцинами. Они вво­дятся одновременно или с интервалом в 1 мес. в разные участки тела. Непривитые или не болевшие дети старше 12 мес, подростки и взрослые по эпидемическим показа­ниям прививаются моновакцинами в первые 3 дня от мо­мента контакта с больными корью и эпидемическим паро­титом. В последние годы плановую профилактическую прививку против кори и эпидемического паротита у детей начали проводить комплексной тривакциной, в состав ко­торой включили ослабленный рубивирус краснухи (вак­цина Тримовакс). Ревакцинация ею проводится в 6 лет (в случаях перенесенной кори, паротита или краснухи -моновакцинами). Пассивная профилактика действенна в отношении кори. Она осуществляется человеческим имму­ноглобулином, который вводится в объеме от 1,5 до 3 мл, но не позднее 5-го дня с момента инфицирования детей.