III. Этап. Подтверждающие тесты.
II. Этап. Коррекционные тесты.
Время свертывания с разведенным ядом гюрзы (лебетоксовый тест) или гадюки Рассела.
Протромбиновое время свертывания с разведенным кадаверным тромбопластином.
АПТВ с ослабленными фосфалипидами.
Каолиновое время свертывания бедной тромбоцитами плазмы крови.
I. Этап. Скрининговые тесты.
Диагностика АФС
1. Иммунологическое тестирование.
Методами ИФА и РИА антитела М и G в диагностическом титре к отдельным отрицательно заряженным фосфолипидам, входящим в состав мембран: b2-гликопротеину-1 (b2-GP1), протромбину, аннексину-V, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилэтаноламину. ВА при их повторном исследовании и положительная реакция через 6 недель после первичного обследования. Наиболее прогностически значимы в плане развития тромбоза являются антитела к b2-GP1 (Ig G при венозных тромбозах, Ig M при патологии беременности и тромбоцитопении), протромбину, аннексину-V. Молекула b2-GP1 состоит из 5 доменов. В пятом домене два концевых участка другой структуры. Наиболее тромбогенны 4 и 5 домены.
2. Гематологические тесты:
Международные критерии диагностики АФС. Диагностика АФС с определением ВА это трехэтапный процесс с использованием фосфолипидчувствительных коагуляционных тестов.
Параллельно исследованию плазмы больного проводится исследование контрольной плазмы. Норма 65-75 сек. Но каждая лаборатория вырабатывает свои нормативы.
На контроле норма 28-35 сек.
На контроле норма 35-44 сек.
Все вышеперечисленные тесты являются скрининговыми фосфолипидчувствительными тестами. Входят в первый этап трехэтапной международной схемы обследования. Удлинение двух и более тестов на 20 % и более свидетельствует о гипокоагуляции. Диагностически важное удлинение каолинового времени более 12 сек, АПТВ более 6-7 сек. После этого проводят второй этап.
Проводят коррекцию измененных тестов плазмы больного бедной тромбоцитами плазмой здорового человека в соотношении 1:1, или 1:4. Смешивают в пробирках и проводят те тесты, которые были удлинены. Например:
Этапы | ПВ больного | ПВ здорового | Нарушения |
I | 38 сек | 49 сек | Удлинение времени у больного |
II | 51 сек | Нет коррекции плазмой здорового (наличие ингибитора) | |
II | 39 сек | Нормализация – коагулопатия (дефицит факторов – гемофилия) |
Как видно из полученных данных, нет коррекции ПВ у больного плазмой здорового человека. Это не коагулопатия, а наличие ингибитора к факторам свертывания.
На данном этапе обследования вместо плазмы больного для коррекции гипокоагуляции применяют нормальные фосфолипиды, например отмытые тромбоциты (Тромбоцитин “Технология-Стандарт”). Смешивают равные объемы тромбоцитина и плазмы больного. Если время укорачивается в 2 и более раза, приближаясь к контрольным величинам, то пишут о наличии ингибитора ВА. Иногда нет коррекции с тромбоцитами. Тогда в плазме присутствует ингибитор, но какой – не известно, известно, что не волчаночной природы.
Фирмой “Технология-Стандарт” выпускаются два набора для диагностики АФС “Эксперсс-люпус-тест” и “Люпус-тест”. Набор “Эксперсс-люпус-тест” не дает полной диагностики. Они работают вместе. Существуют методики с противовесными тестами, т.е. ВА-чувствительные и ВА-нечувствительные (ВА+ и ВА-).
В ядовых тестах: текстарин/экариновый индекс, карпан/экриновый индекс, лебетокс/эхитоксовый индекс. Разведенный яд эфы не чувствительный к ВА, а яд гюрзы ВА+.
В фосфолипидзависимых тестах: АПТВ ВА+ и ВА-, ПВ ВА+ и ВА-.
Имея такие противовесные тесты можно в схему обследования не включать корригирующий этап. Каолиновое время остается в диагностике, т.к. оно позволяет выявлять другие виды ингибиторов.
|
Скрининговые тесты
(I этап)
Каолиновый С разведеннным ядом С разведеннным С плателином
гюрзы или гадюки Рассела тромбопластином LS
Подтверждающие тесты
(II этап)
|
|
|