Обнаружение бактерий рода сальмонелла

Обнаружение бактерий рожи свиней, листериоза и пастереллеза

Эти микроорганизмы выявляют по специфическому росту на мясопептонном шаре и дифференцируют по морфологическим, культуральным и биологическим свойствам.

На мясопептонном агаре они растут в виде мелких прозрачных колоний. Из этих колоний готовят мазки с окраской по Граму, исследуют на подвижность и проводят посев на МПА и МПБ.

При необходимости проводят дополнительную дифференциацию листерий от возбудителя рожи свиней с применением желатина. Листерии на нем, не разжижая, дают медленный рост в виде узловатой нити с неровными краями и пушистыми отростками; они ферментируют салицин; вызывают гемолиз на агаре с кровью, на мясопептонном печеночной агаре с добавлением 0,5% глюкозы, 3% глицерина, 0,01°о теллурита калия растут в виде мелких черных колоний. При биопробе на морских свинках вызывают кератокон ью1 исгивит.

Для проведения пробы на каталазу к суточной культуре добавляют 1 мл 10%-ного раствора перекиси водорода. Л истерии, выделяя каталазу, расщепляет перекись водорода с образованием пузырьков газа.

Б результате бактериологического исследования мяса и мясопродуктов часто выявляются бактерии, вызывающие пищевые токсикоинфекции. К ним относятся бактерии семейства Enterabacteriaceae, родов: Escherichia, Salmonella, Proteus. Наиболее опасен из них род Salmonella. Бактерии различных видов этого рода по морфологическим и культуральным свойствам друг от друга не отличаются. Они имеют общие признаки с бактериями рода Escherichia а рода Proteus.

Выявление сальмонелл проводят в четыре последовательных этапа: микроскопия и первичный посев, обогащение, посев со среды обогащения и подтверждение.

На первом этапе проводят микроскопию мазков с окраской по Грану, делают посев на плотные элективные среды. Посевы 18-24 часа выдерживают в термостате (37°С) и определяют наличие типичных колоний. На среде Эндо - это Круглые, бесцветные или слегка розоватые, прозрачные (полупрозрачные) мелкие колонии, на среде Левина - прозрачные, бледные, нежно-розовые или розовато-фиолетовые колонии.

На втором этапе (обогащение) С целью накопления сальмонелл проводят посев на жидкие селективные среды (среды Мюллера, Киллиана, Кауфмана, селенитовый Ф-бульон, хлористомапшевая среда). Их выдерживают в термостате при температуре 37°С (на селенитовом Ф-бульоне при+43'С).

На третьем этапе, после обогащения, проводят пересев с жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после тер­мостатной выдержки (37°С) исследуют на присутствие типичных колоний.

На четвертом этапе проводят подтверждение наличия бактерий из рода сальмонелл путем определения морфологических, биохимических и серологических свойств.

При наличии роста микроорганизмов на питательных средах исследуют 3-5 подозрительных колоний с каждой чашки в следующем порядке: .из части колоний готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Одновременно исследуют на подвижность в «висячей капле». Оставшуюся часть колонии растирают в конденсационной воде скошенного агара или в 1-2 каплях добавленного к агару стерильного бульона для биохимической и серологической типизации.

По серологической типизации систематизированы около 2000 серотипов сальмонелл. Они встречаются (обитают) в кишечнике животных и человека и во внешней среде. Морфологически эта палочка с закругленными концами, иногда овальной формы, длина их 2-4 и ширина - 0,5 ммк. Все они (кроме S. pullorum u S. gallinarum) хорошо подвижны, по Граму - отрицательны, спор и капсул не образуют, являются аэробами или факультативными анаэробами. Оптимальная среда для роста слабощелочная (рН- 7,2-7,5), оптимальная температура роста-37"С (не исключается их рост при низких плюсовых температурах 5-8°С). По росту на простом агаре и обычных жидких питательных средах сальмонеллы почти неразличимы на мясопептонном агаре гладкие формы, S-формы этих бактерии образуют круглые, полупрозрачные, выпуклые, иногда со слегка вдавленным центром влажные колонии с легким металлическим блеском. Шероховатые (R-формы) растут в виде неровно округленных, шероховатых, тусклых и сухих колоний. На скошенном агаре растут пышно, образуя в конденсационной воде сильную муть, на М11Б они вызывают равномерное помутнение среды, желатину не разжижают, индол не образуют, молоко не ферментируют.

На плотных селективных средах сальмонеллы растут в виде характерных колоний: на бактоагаре Плоскирева - бесцветные мелкие колонии; на висмут-сульфитном агаре - черные или коричневые колонии с характерным металлическим блеском с прокрашиванием в черный цвет участка среды под колонией. Лишь некоторые серологические типы сальмонелл из группы С растут на висмут-сульфитном агаре в виде нежных светло-зеленых и крупных колоний.

Несмотря на общность морфологических и культуральных характеристик, а также токсинообразоания, бактерии рода сальмонелла отличаются друг от друга по биохимическим и антигенным (серологическим) свойствам. Эти различия положены и основу научно разработанных методов типизации.

Существуют два основных метода типизации (т. е. установления видов) бактерий рода сальмонелла: серологический и биохимический. Для серологической типизации используют реакцию агглютинации с салъмонеллезными сыворотками.

За немногими исключениями сальмонеллы имеют два ряда антигенов: термостабпльный О-антиген (соматический, связанный с телом бактерий) и термолабильный Н-антиген (жгутиковый, связанный с двигательным аппаратом бактерий). Каждый из этих антигенов состоит из двух и более компонентов или фракций (рецепторов).

По различию в строении О- и Н-антигенов у отдельных видов сальмонелл Кауфман и Уайт систематизировали бактерии этого рода на несколько серологических групп - А, В, С, Д, Е и т. д. Основой для подобной систематики группы является общность их соматического антигена. Каждый вид бактерий, входящих в определенную серологическую группу, будет агглютинироваться с сывороткой, приготовленной путем иммунизации животного культурой любой бактерии, входящей в данную группу. Такие сыворотки называют групповыми, а реакцию агглютинашш с ними - групповой.

Кроме групповых наши биофабрики готовят специфические мопорецепторные сыворотки. Они агглютинируют только определенный вид сальмонелл.

Однако для практики ветсанэкспертизы, при определении ветеринарно-санитарной оценки мяса и мясопродуктов, видовая диагностика сальмонелл значения не имеет. Она необходима для эпидемиологов, эпизоотологов, гигиенистов для лечения людей или животных, больных сальмонеллезом.

Для ветсанэкспертизы необходимо определить род сальмонелл, так как санитарная оценка при сальмонеллезе одинаковая и не зависит от видовой принадлежности возбудителя. Поэтому r практике ветсанэкспертизы пользуются в основном групповыми агглютинирующими сыворотками.

Для биохимической типизации сальмонелл применяют различные элективные среды: Эндо, Смирнова, Падлевского, Левина, Плоскирева и др. Более употребляемая из них среда Эндо. Ингредиентом ее является сахар-лактоза, а индикатором - фуксин, обесцвеченный сернистокислым натрием. Бактерии кишечной группы разлагают лактозу, а сальмонеллезные бактерии - не разлагают. При росте бактерий рода Е. coli на среде Эндо вследствие разложения лактозы и образования молочной кислоты восстанавливается красный цвет фуксина, чего не происходит при росте сальмонелл. В связи с этим колонии бактерий кишечной группы на среде Эндо будут красно-фиолетовыми с металлическим блеском, и среда вокруг колоний окрасится в красный цвет; сальмонеллы растут на этой среде в виде полупрозрачных колонии светло-розового цвета с голубоватым оттенком.

Для дальнейшей биохимической типизации сальмонелл применяют малый или большой пестрый ряд сред. В состав большого пестрого ряда входят: среды Гисса с различными сахарами и многоатомными спиртами, а также бульон с глицерином (по Штерну), среда с рамнозой (лакмусовое молоко и МПБ).

Бактериологическая диагностика сальмонеллеза основывается на обнаружении подвижных (кроме S. pullorum, S. gallinarum), грамотрицателъных палочек, не ферментирующих лактозу и сахарозу, по ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S. typhinmurium маннит не ферментирует), а также характерном росте па элективных средах, дающих положительную реакцию агглютинации с О- и Н-сальмонеллезпыми сыворотками).