А.Разрыв дисульфидных мостиков в молекулах белков.
Избирательное расщепление химических связей.
Необходим для обеспечения последующего этапа фрагментирования полипептидной цепи и для превращения всех остатков цистеина в остатки цистеиновой кислоты, не разрушающейся при дальнейшем анализе.
1) окисление надмуравьиной кислотой:
R1-CH2-S-S-CH2-R2 + H-CO-O-OH → R1-CH2-SO3Н + R2-CH2-SO3Н
Недостаток метода в том, что окисляются также остатки триптофана.
2) расщепление в присутствии сульфита:
R1-CH2-S-S-CH2-R2 + H2SO3 → R1-CH2-S-SO3H + R2-CH2-SH
3) восстановление дитиотреитолом или дитиоэритритолом:
После того как дисульфидные мостики разорваны, необходимо предотвратить их воссоединение, для чего надо перевести образующиеся тиоловые группы в устойчивые производные. Обычно для этой цели используют иодацетат или иодацетамид, образуются R-CH2-S-CH2-COOH или R-CH2-S-CH2-CONH2. Еще лучшим реагентом является акрилонитрил:
R-CH2-SH + CH2=CH-CN → R-CH2-S-CH2-CH2-CN