Р-ция лизиса (иммунный цитолиз) - РЛ.

Реакция нейтрализации - РН.

АГ иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизма или их токсинов на чувствительные клетки ткани, это связано с блокадой АГ антителами. Используют для определения типа ботулинического токсина, возбудителя газовой гангрены и т.д. Смесь токсинов и антитоксической сыворотки вводят белым мышам, если они соответствуют друг другу (нейтрализуются), то мыши не погибают.

Способы проведения РН.

1. Разводят, т.е. титруют взвесь или исследуемый материал и соединяют их с определенной дозой иммунной сыворотки. Избыток АГ на нейтрализацию АТ не влияет.

2. Постоянную определенную дозу АГ соединяют с разными дозами иммунной сыворотки, нейтрализующая сила сыворотки определяется в АЕ – антитоксич-х единицах.

Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности АТ связывать различные возбудители или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (иными словами, АТ нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов.

Растворение комплекса клеточного АГ и АТ под действием комплемента.

1) Реакция бактериолиза при диагностике холеры. Рез-тат наблюдают в пробирке или орг-ме жив-ного – феномен Исаева.

2) Реакция гемолиза при воздействии на эритроциты специальной, иммунной по отношению к ним сыворотки, в присутствии комплемента наблюдается их растворение – гемолиз («лаковая» кровь).

РСК - реакция связывания комплемента.

В её состав входят две системы:

1) Бактериальная, состоящая из АГ+АТ, в которую вносится комплемент.

2) Индикаторная гемолитическая система, включающая эритроциты барана или свежей сыворотки крови морской свинки, содержащую АТ к ним.

Если в первой системе АГ+АТ соответствуют друг другу, то они образуют комплекс в присутствии комплемента, а в индикаторной системе изменений не происходит и негемолизированные эритроциты осядут на дно пробирки.

Результат положительный (у больного) при отсутствии гемолиза.

Если АГ и АТ не соответствуют друг другу, то их комплекс не образуется и комплемент остается свободным, он связывается комплексом АГ+АТ второй индикаторной системы и обусловливает гемолиз эритроцитов.

Результат «– », т.е. человек здоров.

Применяют для диагноза сифилиса RW - реакция Вассермана; гонореи – реакция Борде-Жангу, риккетсиозов, спирохетозов и титрования вирусов.

Реакции с использованием меченных АГ или АТ:

РИА – радиоиммунный анализ - основан на исследовании меченных радиоактивным йодом АТ. Образуется комплекс АГ+АТ, который содержит радиоактивную метку и обнаруживается с помощью радиометра. Его «-»: представляет собой определенную экологически радиационную опасность.

РИФ – реакция иммунофлюоресценции - АТ иммунной сыворотки метят флюорохромами. Образующийся комплекс АГ+АТ обнаруживают по наличию этой светящейся метки при люминисцентной микроскопии – прямой метод Кунса. «+» в том, что быстро и достаточно точно выявляет микробы или их АГ в исследуемом материале от больного - метод экспресс диагностики: прямой и непрямой метод.

При прямомметоде к исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом. Образующийся комплекс антиген-антитело при освещении ультрафиолетовыми (сине-фиолетовыми) лучами дает ярко-зеленое свечение.
Принепрямом РИФ используют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса антиген-антитело. Этот комплекс выявляется с помощью универсальной флюоресцирующей сыворотки, содержащей антитела к гаммаглобулиновой фракции крови того вида животного, от которого была получена диагностическая сыворотка. Светящийся комплекс выявляют при люминесцентной микроскопии. Часто используют краситель изотиоционат флюоресциина – ФИТЦ.

ИФА – иммуно-ферментный анализ - компонент метят ферментом (пероксидаза), который при положительном результате реакции включается в комплекс АГ+АТ.

При добавлении к нему соответствующего субстрата происходит реакция с окрашиванием раствора в жёлто-коричневый цвет. Наиболее распространён твердофазный ИФА.

Иммуноблоттинг - определение АГ (АТ) с помощью известных сывороток (АГ), при котором искомый компонент выделяется с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и переносится из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (блот-пятно), а затем выявляют на подложке искомый АГ с помощью ИФА. Иммуноблоттинг используется как диагностич-й метод при ВИЧ-инфекции.