Отбор и транспортировка проб

Принципиальная схема анализа проб

 

 

Единая схема специфической индикации БА предполага­ет выявление и идентификацию в полном объеме различных видов бактерий, риккетсий, вирусов, хламидий, грибов и бак­териальных токсинов. Практически возможность выявления тех или иных видов микроорганизмов определяется наличи­ем в лаборатории соответствующих диагностических препа­ратов (люминесцирующих иммуноглобулинов, эритроцитар­ных иммуноглобулиновых диагностикумов и др.) и условий для проведения анализа как нативных проб, так и материа­лов после биологического обогащения на питательных сре­дах, в культуре клеток и других биологических системах.

При отсутствии условий для специфической индикации БА в полном объеме проводится исследование материалов в сокращенном объеме, предусматривающем экспресс-анализ доставленной пробы без ее биологического обогащения, т. е. исследования образца только на первом этапе схемы инди­кации.

Принято считать, что результаты специфической индика­ции, проводимой в полном объеме, выдаются в соответствии с этапами исследования в два срока: первый ответ - пред­варительный (или предупредительный) выдается при поло­жительном результате анализа после первого этапа исследо­вания через 2-3, максимум спустя 3-5 ч после начала ин­дикации. Предварительный отрицательный ответ - не вы­дается. Второй ответ окончательный. Он выдается через 48-72 ч после окончания второго этапа анализа. При поло­жительном окончательном ответе сообщается о наличии и видах в пробах БА. В отрицательном - указывается, на ка­ком сроке он выдан.

Результаты индикации, проводимой в сокращенном объ­еме, ограничивается, как правило, только предварительным положительным ответом. Окончательный ответ обычно не выдается. Сообщается лишь о продолжении исследований в лаборатории вышестоящего звена медицинской (ветеринар­ной) службы, где будет проведен полный объем индикации пробы. Организуют специфическую индикацию в Вооружен­ных Силах начальники медицинской (ветеринарной) служ­бы, а осуществляют ее микробиологические лаборатории са­нитарно-эпидемиологических учреждений военных округов и различных звеньев медицинской службы действующей ар­мии. К проведению специфической индикации БА могут прив­лекаться также отдельные лаборатории инфекционных и не­которых других госпиталей фронта и военных округов.

Микробиологические лаборатории санитарно-эпидемиоло­гических отрядов армии, фронта, военных округов и флотов, как правило, проводят индикацию БС в полном объеме, т. е. в два этапа.

СЭЛ дивизии, подвижные лаборатории, ОСЭР, а также гарнизонные лаборатории округов и им равные лаборатор­ные подразделения, имеющие ограниченные штатно-органи­зационные возможности, участвуют в сборе и сортировке проб и обеспечивают их пересылку соответственно в СЭО военных округов или армии и фронта для проведения инди­кации в полном объеме. Одновременно с этим они обязаны осуществлять индикацию проб в сокращенном объеме, т.е. проводить экспресс-анализ на первом этапе исследования пробы без ее биологического обогащения.

Объем индикационных исследований, равно как и их це­левая направленность, устанавливаются начальником меди­цинской службы объединения. Одновременно с этим опреде­ляется и порядок пересылки пробы в соответствующие сани­тарно-эпидемиологические учреждения, где анализ этих проб может быть продолжен по единой схеме в полном объеме.

Изменения объема исследований в зависимости от кон­кретной обстановки могут касаться как перечня подлежа­щих выявлению видов БА, так и этапов анализа проб. На­пример, в армейских и фронтовых лабораториях исследова­ния могут при необходимости ограничиться выявлением в пробах только контагиозных инфекций или возбудителей с коротким инкубационным периодом и т. п. В то же время при усилении силами и средствами войсковые и им равные лабораторные подразделения армии, фронта или военных округов могут расширить объем индикации и, кроме иссле­дования нативных материалов проб воздуха и содержимого ББП, обязательных для анализа по схеме в сокращенном объеме, они могут:

- проводить индикацию возбудителей контагиозных и природно-очаговых бактериальных инфекций в различных ма­териалах проб до и после их биологического обогащения;

- исследовать в полном объеме пробы на наличие в них ботулинического или других токсинов.

Анализ материалов, доставленных от больных людей и животных с отметкой о предполагаемом диагнозе, проводят целенаправленно экспрессными и (или) классическими мик­робиологическими методами исследования; во всех осталь­ных случаях материалы от больных подлежат исследованию по единой схеме специфической индикации БА.

При необходимости окончательного подтверждения отри­цательных результатов индикации БА, а также во всех слу­чаях, вызывающих сомнение или требующих контрольной проверки и выделения возбудителя в чистой культуре, проба подлежит дальнейшему исследованию с помощью общепри­нятых методов полного (классического) микробиологическо­го анализа в специализированных (бактериологических, ви­русологических или других) отделениях СЭО фронта и воен­ных округов или в соответствующих НИИ гражданского здравоохранения,

Организация специфической индикации в мирное, и осо­бенно в военное, время предусматривает строгое соблюдение принципа преемственности в работе лабораторий, который предполагает:

- единые способы отбора проб, а также единую схему и методы анализа;

- общую унифицированную (сквозную) нумерацию и обозначение материалов проб в зависимости от стадии их обработки и исследования;

- обязательную для лабораторий, проводящих специфи­ческую индикацию БА в сокращенном объеме, пересылку в кратчайшие сроки около 2/3 каждой пробы в вышестоящие учреждения, обеспечивающие исследование проб в полном объеме в соответствии с единой схемой;

- усиление лабораторий войскового звена и им равных, вынужденных проводить индикацию в полном объеме за счет дополнительных сил и средств;

- замену лабораторий, подлежащих передислокации вслед за войсками, новыми подразделениями с передачей им проб для продолжения индикации;

- организацию обязательной, четкой взаимной информа­ции между лабораториями различных звеньев медицинской и ветеринарной служб о ходе и результатах индикации.

При соблюдении принципа преемственности в работе ла­бораторий исчезает вынужденная необходимость в повторе­нии исследований, выполненных на более ранних этапах ана­лиза.

Специфическая индикация любых биологических агентов, проводимая в соответствии с единой схемой экспресс-анализа в два вышеперечисленных этапа, всегда предусматривает следующий порядок исследования:

- прием, сортировку и регистрацию проб;

- подготовку проб к исследованию и их первичную об­работку;

- концентрирование (при необходимости) возбудителей в пробе с помощью физических или иммуносорбционных спо­собов;

- исследование нативных материалов, пробы с помощью экспресс-методов анализа;

- биологическое обогащение пробы на питательных сре­дах в организме белых мышей и в культуре клеток;

- постановку биопробы на ботулинический и другие ток­сины;

- исследование с помощью экспресс-методов биологи­чески обогащенных материалов пробы.

Квалифицированные отбор и транспортировка проб во многом определяют успешность проведения специфической индикации в объектах внешней среды и в материалах от лю­дей и животных.

Пробы отбирают при положительном результате неспе­цифической индикации или при внезапном появлении у лю­дей и животных острых инфекционных заболеваний.

Отбору подлежат:

- пробы воздуха в приземном слое атмосферы и в поме­щениях негерметичных объектов;

- осколки, оболочки и содержимое биологических бое­припасов;

- налеты порошкообразных веществ, капли жидкости и другие подозрительные объекты на боевой технике и местно­сти в непосредственной близости от предполагаемого места разрыва боеприпасов;

- смывы с открытых поверхностей вооружения и боевой техники или любых других предметов, находившихся при движении аэрозольного облака в непосредственной близости от источника его генерации;

- пробы воды из открытых водоемов, колодцев, подозри­тельной на заражение;

- насекомые и клещи, а также трупы животных (грызу­нов), внезапно появившиеся в расположении войск вблизи обнаруженных контейнеров;

- смывы со слизистых оболочек носа и носоглотки, а так­же кожных покровов людей, находившихся без защиты в зо­не распространения биологического аэрозоля;

- кровь, выделения и испражнения и другие материалы от внезапно заболевших лиц, а также кусочки внутренних органов и тканей трутов людей, погибших от инфекционных заболеваний;

- материалы от заболевших животных и их трупов. В первую очередь, как наиболее представительные, отби­рают пробы воздуха приземных слоев атмосферы, осколки боеприпасов и смывы со слизистых оболочек и кожи людей в зоне биологического аэрозоля без средств защиты.

Пробы пищевых продуктов и фуража берут только при прямом подозрении на заражение.

Отбор проб для специфической индикации проводится с помощью табельных средств химической и бактериологиче­ской (биологической) разведки. Для отбора проб воздуха ис­пользуют автоматический сигнализатор примесей (АСП), пробы из объектов внешней среды отбирают, используя ком­плект отбора проб (КПО-1), войсковой прибор химической разведки (ВПХР) и медицинский прибор химической развед­ки (МПХР). Медицинская служба оснащена медицинским комплектом отбора и пересылки проб (МКОП), состоящим из четырех секций-наборов для взятия материалов от за­раженных и больных людей; из объектов внешней среды; пи­щевых продуктов и воды, а также для сбора кровососущих членистоногих-переносчиков.

Пробы воздуха отбирают с помощью сепараторов-пробо­отборников аэрозолей. Сепаратор-пробоотборник вводится в действие автоматически после срабатывания прибора неспе­цифической индикации, ведущего анализ воздуха в следящем режиме. По завершении цикла отбора пробы сепаратор из­влекают из прибора, закрывают заглушкой, помещают в пла­стиковый мешок и доставляют в термоконтейнере в санитар­но-эпидемиологическую лабораторию.

Мелкие осколки и оболочки боеприпасов с порошкообраз­ным налетом или каплями жидкости собирают пинцетом и укладывают в пластиковые мешочки или баночки, имеющие­ся в КПО-1 и МПХР или в мягкие емкости с широкой горло­виной из состава МКОП.

Порошкообразный налет и капли жидкости, содержащие­ся на крупных осколках и почве вокруг осколков, осторожно собирают влажным, тщательно отжатым тампоном и поме­щают его в пробирку с небольшим объемом изотонического раствора хлорида натрия.

Отбор проб с открытых поверхностей вооружения и тех­ники, палуб и надстроек кораблей, со стен зданий и других сооружений, расположенных перпендикулярно движению аэрозольного облака, проводят путем смывов. Для этого влажным тампоном на стержне, вмонтированном в пробирку из МПХР и МКОП, протирают поверхности, на которых об­наружены капли жидкости или порошкообразный налет. Затем тампон помещают обратно в пробирку.

При отсутствии капель или порошкообразных налетов смывы производят с поверхности площадью не менее 100см².

Образцы растительности срезают скальпелем или ножни­цами, имеющимися во всех наборах для отбора проб. Сре­занные листья, траву переносят пинцетом в пластиковый ме­шочек, который затем герметизируют.

Отбор проб воды проводят:

- из шахтных колодцев после тщательного перемешива­ния в них воды;

- из открытых водоемов (пруд, озеро, река) - с поверх­ности и придонного слоя у берега.

Образцы воды (0,5-1 л) либо сразу помещают в пласти­ковые мешки с завинчивающейся горловиной из МКОП или в любую стерильную подручную тару (бутылки, флаконы), либо фильтруют непосредственно на месте взятия пробы че­рез фильтры с помощью входящих в МКОП устройств. В этом случае фильтры помещают в пластиковый мешок и герметизируют.

Сбор переносчиков в местах падения контейнеров произ­водят с помощью марлевого сачка, флажка-полотенца и пин­цета.

Летающих насекомых вылавливают марлевым сачком или с помощью липкой бумаги. Комаров собирают с помощью эксгаустера, имеющегося в МКОП. Для этого воронкой экс­гаустера накрывают сидящего комара и затем с помощью баллона всасывают его в емкость. При отсутствии эксгаусте­ра комаров собирают непосредственно в пробирку, прикры­вая ею севшего на человека комара, или отлавливают мар­левым сачком,

Слепней вылавливают в местах падения контейнеров мар­левым сачком. Пойманных слепней пересаживают в пробир­ки с небольшим комочком ваты, смоченной водой.

Блох вылавливают на открытой местности энтомологиче­ским сачком; в жилых помещениях собирают на липкую бу­магу или в кюветы с водой; из нор добывают с помощью ре­зинового шланга, обшитого фланелью; с трупов грызунов вычесывают, предварительно выдерживая их в парах хлоро­форма для наркотизации насекомых.

С кожных покровов человека и животных клещей снима­ют пинцетом с резиновыми кольцами на концах. С расти­тельности их собирают, протаскивая фланелевый флажок. Собранных переносчиков помещают в полиэтиленовые про­бирки с увлажненными полосками фильтровальной бумаги.

Для отлова грызунов используют табельные и подручные средства (ловушки, капканы и т. д.). Собранные трупы гры­зунов упаковывают в полиэтиленовые мешочки.

Продукты питания (фураж) подлежат исследованию только при прямом подозрении на их бактериальную зара­женность. При отборе проб обращают внимание на наличие порошкообразных веществ, капель жидкости, а также це­лость упаковки.

Взятие проб из незакрытых герметично емкостей (бочек, ящиков) следует производить небольшими порциями (по 50-100г) из поверхностных слоев продуктов независимо от их консистенции, т.е. как жидких и полужидких, так и сы­пучих (зерно, мука, сахар) и твердых (хлеб, жиры, овощи).

От больных (инфицированных) людей для исследования берут смывы со слизистых оболочек и кожных покровов, кровь, содержимое лимфатических узлов (бубонов), отделяе­мое язв, мокроту, испражнения, рвотные массы, промывные воды и т. д. Все материалы отбирают в стерильную посуду.

Мазки из носа, носоглотки, с кожных покровов берут влажным тампоном. Одновременно изотоническим раствором хлорида натрия тщательно ополаскивают носоглотку.

Кровь берут шприцем из локтевой вены (10 мл) в сте­рильную пробирку. Для предупреждения свертывания крови добавляют гепарин из расчета 0,01 мг на 1 мл крови. Непо­средственно у постели больного готовят 3-4 мазка крови на предметных стеклах.

Содержимое бубона берут шприцем. Содержимое папул и пустул берут после прокалывания их иглой. Одновременно готовят мазки.

Испражнения собирают в свежевымытые подкладные суд­на. Затем материал ложечкой переносят в пробирку.

В качестве трупного материала выбирают для исследова­ния участки органов с признаками поражения (кусочки моз­га, легких, печени, селезенки), а также кровь.

Аналогичные материалы берут от пораженных животных и их трупов.

Упакованные в полиэтиленовые пробирки, пакеты и ме­шочки материалы размещают в пластиковом мешке, плотно завязывают и пересылают в лабораторию. Поскольку резуль­таты специфической индикаций во многом зависят от своев­ременного начала анализа, сроки поставки проб в лабораторию должны быть минимальными: не превышать 1,5-2,5 ч от момента взятия материала. Для сохранения в пробе воз­будителей заболеваний в жизнеспособном состоянии все соб­ранные материалы следует транспортировать в термоконтей­нерах, обеспечивающих поддержание температуры не выше 0-4° С.

Пробы направляют в лабораторию вместе с направлени­ем, в котором указывают: куда и кому направляются пробы (проба), что они (она) собой представляют; время взятия проб и их количество в общей таре; желательный объем ис­следований (в сокращенном или полном объеме индикации); адрес, по которому следует сообщить результаты специфиче­ской индикации. Представляют также данные о месте взятия проб (район расположения войск, населенный пункт); время и способ применения биологических средств; основание для отбора проб; результаты обследования района на отравляю­щие вещества.

Во избежание инфицирования отбор и доставку проб в лаборатории личный состав должен проводить в противога­зах и защитной одежде в строгом соответствии с правилами, предписанными для работы с материалом, зараженным воз­будителями особо опасных инфекций.

 

Подготовка проб к исследованию (первичная обработка проб)

Прием и сортировку проб проводят в специально отве­денном для этого помещении или настольном боксе лабора­тории.

Сортировка проб состоит из:

- определения очередности исследования проб;

- определения возможности объединения (усреднения) проб;

- увлажнения (при необходимости) сухих материалов пробы небольшим количеством стерильного изотонического раствора хлорида натрия;

- отделения от пробы части материала, подлежащего (в случае необходимости) пересылке в лаборатории, прово­дящие индикацию в полном объеме.

В первую очередь исследованию подлежат:

- пробы воздуха;

- осколки и содержимое биологических боеприпасов;

- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне прохождения аэрозольного облака;

- материалы от внезапно заболевших людей.

Объединение этих проб не допускается. Остальные про­бы, если их раздельное исследование лаборатория обеспе­чить не может, могут быть объединены (но не более 3—5 об­разцов в одну пробу). В этих случаях объединению подле­жат только односменные пробы, взятые в одном очаге.

Каждую поступившую пробу регистрируют в специаль­ном журнале, куда вносят основные данные сопроводитель­ной записки и время доставки ее в лабораторию.

Первичная обработка пробы состоит из:

- приготовления мазков для МФА из нативных материа­лов пробы;

- перевода сухих и плотных материалов пробы в жид­кую фазу;

- концентрирования содержащихся в пробе возбудите­лей физическими (иммуносорбционными) методами.

В целях четкой организации и преемственности исследо­ваний все подлежащие анализу материалы (мазки, взвеси и т. п.) целесообразно маркировать, помимо номера пробы, римскими цифрами, обозначающими ту или иную стадию анализа:

- цифрой «I» обозначают мазки-отпечатки, приготовлен­ные из нативных материалов пробы для ее первичной обра­ботки;

- цифрой «II» обозначают мазки-отпечатки, приготов­ленные из нативной жидкой пробы или из взвеси, получен­ной после перевода пробы в жидкую фазу, а также сами на­тивные взвеси пробы;

- цифрой «III» обозначают мазки и взвеси, приготовлен­ные из материалов, пробы после ее концентрирования физи­ческими (или иммуносорбционными) способами;

- цифрой «IV» обозначают мазки и взвеси, приготовлен­ные из посевов на питательные среды, пластин с монослоем зараженной клеточной культуры и поддерживающую куль­туральную жидкость из пробирок с культурой клеток;

- цифрой «V» обозначают мазки-отпечатки и взвеси, приготовленные из органов лабораторных животных, исполь­зованных для биологического обогащения пробы,

Из нативных материалов пробы мазки готовят на трех предметных стеклах (по 8-10 мазков на каждое стекле). После фиксации в течение 15-20 мин в охлажденном аце­тоне два стекла с мазками используют для исследования, одно (резервное) хранят на холоде до конца анализа данной пробы.

Из жидких материалов пробы мазки готовят в виде ма­леньких капель, наносимых на стекло в центре каждого ква­драта бактериологической петлей, диаметром 2-3 мм.

Из плотных материалов пробы мазки готовят в виде пре­паратов-отпечатков на предметном стекле.

Из секционного материала и органов животных мазки го­товят в виде отпечатков на предметном стекле. Для этого от исследуемого органа отрезают кусочек и поверхностью среза слегка прикасаются к предметному стеклу. Если ткань орга­на чрезмерно пропитана кровью, избыток ее целесообразно удалить, вначале прикоснувшись срезом к листу фильтро­вальной бумаги.

Перевод пробы в жидкую фазу предусматривает суспен­зирование плотных (сухих) материалов в стерильном изото­ническом растворе хлорида натрия. Вначале готовят взвесь исследуемого материала в небольшом объеме изотонического раствора хлорида натрия - до 5 мл (получение так называе­мого первичного объема жидкой фазы). После того как из этой суспензии будут приготовлены мазки на предметных стеклах, ее объем доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 22 мл (получение так называемого конечного объема жидкой фазы пробы).

При поступлении пробы в виде секционного материала или органов животных жидкую фазу получают путем гомо­генизации кусочков исследуемого материала в стерильной фарфоровой ступке. Стерильный изотонический раствор хло­рида натрия добавляют к гомогенату из расчета получения 20% взвеси.

Приготовленную тем или иным способом суспензию (ко­нечный объем жидкой фазы пробы) распределяют на порции, предназначенные:

- флакон «а» - для постановки РНГА-2 мл;

- флакон «б» - для посева на питательные среды и по­становки биопробы на токсины (заражение двух опытных мышей) - 2 мл;

- флакон «в» - для заражения четырех мышей с ослаб­ленной резистентностью к инфекции (биологическое обога­щение пробы) - 2,5 мл;

- флакон «г» - для заражения культуры клеток для на­копления риккетсий и хламидий-4 мл;

- флакон «д» - для заражения культуры клеток в целях накопления вирусов-8 мл;

- флакон «е» - остаток пробы (резерв на случай повто­рения или продолжения анализа).

Флакон «а» со взвесью, предназначенной для постановки РНГА, передают в группу индикации ВС без дополнительной обработки.

Флакон «б» со взвесью, предназначенной для обогащения пробы на питательных средах и постановки биопробы на токсин, передают в первую подгруппу идентификации ВС также без дополнительной обработки.

Во флакон «в» со взвесью, предназначенной для биоло­гического обогащения пробы на белых мышах с ослабленной к инфекции резистентностью, добавляют 2,5 мл поливалент­ной противоботулинической сыворотки, содержащей 100 - 200 ед/мл антитоксинов к ботулиническим токсинам типов А, В, Е. Смесь пробы с противоботулиническими сыворотка­ми выдерживают 10-15 мин при комнатной температуре, а затем используют для заражения четырех белых мышей.

Во флакон «г» со взвесью, предназначенной для накоп­ления на культуре клеток, содержащихся в пробе риккетсий и хламидий, добавляют 0,1 мл стерильной сыворотки круп­ного рогатого скота и 0,1 мл смеси растворов антибиотиков, содержащей 4000 ЕД/мл пенициллина и 2000 ЕД/мл стрепто­мицина. После этого флакон «г» передают во вторую под­группу идентификации БС.

Во флакон «д» со взвесью, предназначенной для накоп­ления содержащихся в пробе вирусов, добавляют 0,1 мл сме­си растворов антибиотиков, содержащей 80000 ЕД/мл пени­циллина и 40000 ЕД/мл стрептомицина. После этого флакон «д» передают во вторую подгруппу идентификации БС, про­водящую биологическое обогащение материалов проб на кле­точных культурах.

Флакон «е» с остатками жидкой фазы пробы хранят в группе первичной обработки проб при температуре 2-4⁰ С до окончания анализа данной пробы и используют при необ­ходимости для повторения или продолжения исследования.