Метод биопсии влагалища.

Наиболее практичным и точным методом супоросности свиней в настоящее время считают метод биопсии влагалища. Необходимый инструмент для взятия небольшого кусочка эпителия размером 1,25*0,25 см из переднеспинной части влагалища стоит дешевле, а процедура выполнения без особых приготовлений. Взятие проб у свиноматки происходит быстро и не причиняет вреда плоду. Однако на специальную лабораторную обработку (фиксация в 10%-ном растворе формалина в течение суток) и микроскопирование затрачивается 36–40 ч. Этот метод впервые появился в Европе и основан на микроскопических изменениях, которые происходят в эпителии влагалища в течение периода охоты и беременности.

В нормальных условиях клетки эпителия влагалища в период охоты располагаются в 20–30 слоев. Между периодами охоты число слоев сокращается до 2–3. При беремменности толщина эпителия сокращается до 2–3 слоев клеток, они становятся плоскими, а их ядра темно-окрашенными. Эти изменения начинаются после 17-го дня супоросности, хорошо развиваются к 30-му дню и сохраняются далее. За 3 недели до опороса число слоев постепенно возрастает возможно вследствие секреции эстрогенов плодов.

Супоросность можно определить в 95% случаев, если биопсию делают на 30-й день после покрытия. Однако можно применять метод биопсии и на 21-й день, чтобы дать более четкое и раннее определение беременности. 100%-ная точность этого метода недостижима, так как некоторая ошибка может возникнуть вследствие ранней смертности плода, раннего аборта. Большую часть ошибок можно выявить повторным определением в более поздние сроки, но некоторая часть ложных определений сохраняется.

Л а б о р а т о р н ы е м е т о д ы. Начиная с 21-го дня после осеменения можно определять супопрсность гистологическим методом. С помощью биопсии берут небольшой кусочек эпителия (размером 1,25*0,25 см) из краниального участка верхней стенки влагалища. Взятые образцы фиксируют в 10%-ом растворе формалина в течение суток, затем обрабатывают, используя стандартную гистологическую технику, заливают парафином, готовят срезы, которые окрашивают гематоксилинэозином.

Результаты оценивают при микроскопии: у супоросных свиней число клеток эпителия влагалища не более трех; кроме того, четко выражена ровная граница эпителиального слоя с более глубоко распложенной тканью, которая обычно рыхлая и слабо окрашивается. У несупопросных животных число слоев эпителиальных клеток варьирует от 4 до 20–30; выявляется также извилистость со стромой с образованием выступов и крипт.

Точность метода по супоросным животным равна 95–98%, по несупоросным – 87–93%. Причинами ошибок определений могут быть недиагностированные во влагалище, гибель зародышей на ранней стадии развития, атрофия яичника, наличие в нем кист, а также предшествовавшая обработка свиней прогестероном.

Супоросность можно определять по концентрации прогестерона в плазме крови на 20–24-й день после осеменения. При концентрации прогестерона не менее 9 нг/мл животных считают супоросными. Точность метода – 96%. Некоторые авторы с такой же точностью диагностировали беременность у свиней с 16-го дня после осеменения, считая беременными тех животных, у которых в плазме крови содержалось не менее 7,5 нг/мл прогестерона.

Флоридзиновая проба на супоросность свиней. Эта проба основана на том, что во время супоросности животных почечный эпителий становится более проходимым для сахара. После введения в мышцу (за ухо) флоридзина (глюкозида, добываемого из коры яблони и груши) у супоросных свиней получается гликозурия уже при ттаких минимальных дозах этого препарата, при которых несупоросные свиньи еще не реагируют выделением сахара в моче. При помощи реакции с флоридзином можно диагностировать раннюю супоросность – в пределах 2–6 недель; после 6 недель флоридзиновая проба далеко не всегда дает правильные результаты.

Метод гормональной провокации. Для ранней диагностики супоросности и выявления животных, оставшихся неоплодотворенными, применяют метод искусственного вызывания половой охоты у неополодотворившихся свиноматок путем введения смеси андрогенного и эстрогенного препаратов. Для этих целей в ГДР, например, выпускается специальный препарат – гравингост, содержащий в 1 мл 2,5 мг тестостерона энантата и 1 мг эстрадиола валерианата. Препарат в дозе 2 мл вводят внутримышечно, позади уха, на 15–23-й день после осеменения. Через несколько дней после инъекции у неоплодотворившихся свиней появляется половая охота, а у супоросных проба на половую охоту хряком-пробником оказывается отрицательной. Точность метода – 94–98%.

Вместо импортных препаратов можно применять в качестве андрогенного вещества тестостерона пропионат в виде 1%-ного масляного раствора в дозе 0,5 мл на одну инъекцию, а в качестве эстрогенного – один из следующих препаратов: 0,5%-ный раствор диэтилстильбэстрола пропионата в дозе 0,2 мл; 1%-ный раствор синэстрола в дозе 0,2 мл (или 2%-ный в дозе 0,1 мл); 0,1%-ный раствор эстрадиола бензоата в дозе 2 мл. Растворы тестостерона и эстрогенов набирают из ампулы в один шприц и вводят свиноматкам внутримышечно, однократно (О. Н. Преображенский).

Для диагностики беременности у свиней можно использовать гистовагинальный метод, в основе которого лежит также возрастающая концентрация в организме беременных животных прогестерона, который оказывает специфическое влияние на морфологию эпителиальных клеток влагалища. У неоплодотворившихся животных эпителий слизистой оболочки влагалища представлен 5–20 слоями с хорошо выраженной структурой клеток, а у беременных – 2–3 слоями.

Совпадение результатов гистологических исследований с фактическими опоросами отмечается в 92–100% случаях. Материал для гистологического исследования берут посредством биопсиии или соскоба из передней части влагалища.