Автоматизированные системы бульонного культивирования

Интенсивность роста микобактерий

Культуральный метод

Метод посева, или культуральный метод, отличается большей чувствительностью, чем микроскопия мазков, и имеет перед последним ряд преимуществ. Он позволяет обнаруживать несколько десятков жизнеспособных микобактерий в исследуемом материале и имеет большую диагностическую ценность. Это особенно важно при исследовании материала от впервые выявленных или леченных больных, выделяющих небольшое количество микобактерий. По сравнению с микроскопией, культуральное исследование позволяет увеличить число выявленных больных туберкулёзом более чем на 15-25%, а также верифицировать туберкулёз в более ранних стадиях, когда заболевание ещё хорошо поддаётся лечению. Очень важным преимуществом культурального исследования считают возможность получения культуры возбудителя, которая может быть идентифицирована и изучена в отношении лекарственной чувствительности, вирулентности и других биологических свойств. К недостаткам методов культивирования следует отнести их длительность (срок ожидания материалов достигает 10 недель), более высокую стоимость, сложность обработки диагностического материала. Для достоверной клинической интерпретации результатов микробиологического исследования необходимо соблюдать следующее правило: микроскопическое и культуральное исследования нужно производить параллельно из одной и той же пробы диагностического материала.

Питательные среды, используемые для получения культур микобактерий можно разделить на 3 группы:

· яичные (Левенштейна-Йенсена, Финна, Петраньяни);

· агаровые (Миддлбрука 7Н10, 7Н11);

· бульонные или жидкие (Миддлбрука 7Н9, 7Н12, Дюбо);

Повсеместно самым популярным методом выявления

возбудителя туберкулёза до настоящего времени считается

получение культуры М. tuberculosis (МБТ) на плотных

средах. В практических лабораториях нашей страны чаще

всего используют среды Левенштейна-Йенсена (ЛЙ) и Финн-2.

При этом культуральное исследование диагностического

материала занимает не менее 3-8 недель – именно в эти

сроки появляется рост МБТ на плотной среде, а отрицатель-

ным результатом считается отсутствие роста в течение 12

недель после поступления образца в лабораторию.

· (+) – 1-20 КОЕ в пробирке (скудное бактериовыделение);

· (++) – 20-100 КОЕ в пробирке (умеренное бактериовыделение);

· (+++) -> 100 КОЕ в пробирке (обильное бактериовыделение)

Агаровые среды Middlebrook 7Н10 и 7Н11 являются прозрачными и позволяют увидеть колонии на 10-12 день после посева. В то время как на непрозрачных средах, таких как ЛЙ, визуализированный рост появляется значительно позже. Прозрачность среды даёт возможность изучать микроколонии в чашках на ранних сроках при помощи диссекционного микроскопа.

Наиболее распространёнными и коммерчески доступными системами бульонного культивирования являются

ВАСТЕС 460, ВВL MGIT, ВАСТЕС MGIT 960 и МВ/ВасТ

ВАСТЕС 460: Принципиально иной уровень бактериологической диагностики туберкулёза был достигнут с появлением в начале 80-х годов полуавтоматической системы ВАСТЕС 460 для выращивания и идентификации микобактерий с использованием жидкой среды Middlebrook 7Н12. В данной системе рост микобактерии определяется путём регистрации уровня меченного СО₂, который образуется размножающимися микроорганизмами. Применение ВАСТЕС 460 позволило сократить сроки получения результатов выявления микобактерий до 14 дней, система оказалась пригодной для быстрой идентификации М. tuberculosis complex и определения лекарственной чувствительности возбудителя туберкулёза.

BBL MGIT – для преодоления сложностей, связанных с применением радиоизотопного метода, была разработана более совершенная технология регистрации роста микроорганизмов, BBL MGIT. В процессе потребления растворённого в среде О₂ растущими клетками индикатор начинает светиться при ультрафиолетовом облучении, а увеличение микробной популяции сопровождается усилением свечения индикатора, интенсивность которого оценивается при помощи трансиллюминатора.

ВАСТЕС MGIT – следующим шагом была система ВАСТЕС МGIT 960 – полностью автоматизированный комплекс для инкубации и мониторинга 960 индикаторных пробирок MGIT. В приборе ВАСТЕС инкубируются индикаторные пробирки после внесения диагностического материала, подвергаясь периодическому УФ-тестированию. Контроль роста микроорганизмов осуществляет встроенный в прибор компьютер. Жидкокристаллический дисплей даёт информацию о наличии положительных и отрицательных посевов.

МВ ВасТ – вторая коммерческая диагностическая система голландской фирмы Оrganon Teknika – МВ/ВасТ. Она использует технологию детекции СО₂ – во флаконах, содержащих сенсор, изменение цвета которого регистрируется компьютером, осуществляющим анализ и интерпретацию данных. Существенным достоинством МВ/ВасТ является относительная безопасность работы персонала лаборатории, поскольку процессорные флаконы не вскрываются, а инокуляция материала осуществляется иглой со шприцем через закреплённую резиновую пробку.