Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимзе
Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином Циля Ход окраски
Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимзе
Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином Циля Ход окраски
1. Наливают на мазок карбол-фуксин Циля (окрашивают через фильтровальную бумагу) и подогревают над пламенем спиртовки до
появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 мин, не доводя до кипения.
2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.
3. Дифференцируют 1% солянокислым спиртом (на 70° спирте) до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон, примерно 30-60 с.
4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.
5. Докрашивают метиленовым синим Лефлера 15-30 с.
6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.
Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.
Фиксация и методика окраски те же, что и для мазков крови.
Для исследования на присутствие плазмодиев, кроме мазков, берут обязательно и так называемую толстую каплю - каплю крови, размазанную в виде небольшого круга по предметному стеклу углом другого стекла. «Толстую каплю» перед окраской не фиксируют.
Методика окраски «толстой капли»
8. Промывают водопроводной водой и высушивают фильтровальной бумагой.
В результате грамположительные бактерии окрашиваются в темно-синий цвет, прочие - в красный.
Следует заметить, что в классической прописи при окраске по Граму обычно не промывают мазки в воде ни после окраски генциа-новым фиолетовым (кристаллическим фиолетовым), ни после обработки раствором Люголя, ограничиваются только сливанием растворов. Цель предлагаемого промывания в воде - только чистота в работе, оно ни в какой мере не влияет на результаты окрашивания.
1. Наливают на мазок карбол-фуксин Циля (окрашивают через фильтровальную бумагу) и подогревают над пламенем спиртовки до
появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 мин, не доводя до кипения.
2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.
3. Дифференцируют 1% солянокислым спиртом (на 70° спирте) до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон, примерно 30-60 с.
4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.
5. Докрашивают метиленовым синим Лефлера 15-30 с.
6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.
Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.
Фиксация и методика окраски те же, что и для мазков крови.
Для исследования на присутствие плазмодиев, кроме мазков, берут обязательно и так называемую толстую каплю - каплю крови, размазанную в виде небольшого круга по предметному стеклу углом другого стекла. «Толстую каплю» перед окраской не фиксируют.
Методика окраски «толстой капли»
1. На высохшую каплю наливают краску Романовского-Гимзы, обычного разведения. Продолжительность окрашивания - 30-50 мин.
2. Осторожно споласкивают в воде и затем просушивают в вертикальном положении (фильтровальную бумагу применять нельзя).
Ввиду того что гемоглобин в водных растворах краски выщелачивается, эритроциты в окрашенной капле не видны.
Морфология паразита в «толстой капле» менее ясная, чем в мазке.
В мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, отчетливо видна голубая протоплазма паразита с ядром, окрашенным в розовый или красный цвет. Форма плазмодиев различна в зависимости от стадии развития. В зрелых плазмодиях определяют темно-коричневые пигментные включения. Паразиты находятся в эритроцитах, но могут располагаться и свободно.
Иммуноцитохимические, морфометрические и радиоавтографические методы исследования в цитологии подробно освещены в специальных руководствах и методических рекомендациях.