Приготовление реактивов

Ход окраски

Пользуются готовыми наборами красителей и других реагентов, к которым прилагаются методики окрашивания, поэтому в учебнике мы приводим лишь некоторые их этих реакций.

В настоящее время при проведении цитохимических реакций часто

Специальные (цитохимические) методы окрашивания цитологических препаратов

Ход окрашивания

Схема ускоренного окрашивания гематоксилин-эозином, разработанная в МНИОИ им. П.А. Герцена Приготовление краски гематоксилин

Для окрашивания лучше всего пользоваться фирменными красителями, к которым обычно прилагается методика окрашивания

Методика окрашивания по Папаниколау

Для окрашивания препаратов по методу Папаниколау обязательна влажная фиксация мазка. Мазок сразу же после получения, пока он еще влажный, фиксируют одним из перечисленных методов:

• специальными аэрозолями;

• каплевым фиксатором;

• в 96° спирте (10-20 мин);

• в смеси Никифорова (30 мин).

После этого высушивают на воздухе.

После окрашивания препарата его необходимо заключить в бальзам, для чего:

• погружают препарат в смесь ксилола и спирта (1:1);

• погружают препарат в ксилол;

• наносят каплю бальзама и покрывают покровным стеклом, избегая образования пузырей.

1. Растворяют 50 г алюмокалиевых квасцов [КАl(SО₄)₂ • 12Н₂О] в 500 мл дистиллированной воды, доводят до кипения и всыпают в горячий раствор 1 г гематоксилина.

2. Добавляют 500 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, но не кипятят!

3. Раствор остужают до комнатной температуры, прибавляют йодат калия (КIО₃).

4. Марлей завязывают сосуд с краской и оставляют созревать на свету на 5 нед.

5. По истечении 5 нед сосуд закупоривают и убирают в темное место (например, шкаф). Перед употреблением краску профильтровывают.

1. Препарат фиксируют в смеси равных частей эфира и 96° этилового спирта (смесь Никифорова) или в одном 96° этиловом спирте в течение 7-10 мин.

2. Окрашивают гематоксилином в течение 5 мин.

3. Промывают в проточной водопроводной воде - 1-2 мин.

4. Окрашивают 0,3% спиртовым раствором воднорастворимого (желтоватого) эозина в течение 1 мин.

5. Промывают проточной водой - 1-2 мин.

6. Высушивают.

Окрашивание на гемосидерин Реакция на берлинскую лазурь Реактивы:

2% раствор железосинеродистого калия (желтая кровяная соль): 1N раствор соляной кислоты; метиловый или солянокислый спирт.

Приготовление реактивов:

2% раствор железосинеродистого калия (желтая кровяная соль) Смешивают 2 г желтой кровяной соли и 100 мл дистиллированной воды.

Полученный раствор должен быть бесцветным.

1N соляная кислота - см. окрашивание на ДНК по Фельгену.

1. Обесцвечивают препарат метиловым или солянокислым спиртом.

2. Промывают дистиллированной водой.

3. Заливают 1N раствором соляной кислоты на 30 с.

4. Добавляют в кислоту равное количество раствора желтой кровяной соли. Перемешивают и красят препарат 10 мин.

5. Промывают дистиллированной водой.

6. Высушивают.

Значение реакции. Реакцию применяют для определения характера темных гранул в цитоплазме. Особенно важное значение реакция может иметь при необходимости отличить меланин от гемосидерина при подозрении на меланому. При наличии в клетках гемосидерина продукт реакции выявляют в виде сине-зеленых гранул (положительная реакция на берлинскую лазурь).

Окрашивание на ДНК по Фельгену Реактивы:

метиловый спирт; 1N соляная кислота; реактив Шиффа.

1. 1N соляная кислота (82,5 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 доливают дистиллированной водой до 1 л). Готовят в мерной колбе. Хранят в холодильнике.

2. Реактив Шиффа (см. «окрашивание на гликоген»).

3. Сернистая вода:

Смешивают 1,5 г сернокислого натрия (Na₂S₂O₅), 15 мл 1N соляной кислоты и 300 мл дистиллированной воды.