Работа 62. Количественное определение креатинина в моче и сыворотке крови
Креатинин является одним из конечных продуктов азотистого обмена и нормальной составной частью мочи. За сутки с мочой выделяется креатинина у мужчин 8,8-17,7 ммоль (1-2 г/сут), а у женщин – 1,7-15,9 ммоль (0,8-1,8 г/сут). Креатинин - ангидрид креатина. Креатин содержится в мышцах (около 80%), особенно в сердечной, где из него при участии АТР образуется макроэргическое соединение креатинфосфат, при распаде которого образуется креатинин и фосфат. Креатин в моче взрослого здорового человека отсутствует, появление его в моче называют креатинурией. Однако у детей и подростков моча всегда содержит креатин.
Принцип метода. Креатинин при взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде образует окрашенные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации креатинина в моче и сыворотке крови.
Исследуемый материал: моча, сыворотка крови.
Реактивы: стандартный раствор креатинина (177 мкмоль/л), 2%-ный раствор пикриновой кислоты, 10%-ный раствор NaOH, 5%-ный раствор ТХУ, дистиллированная вода.
Оборудование: пробирки. пипетки, ФЭК, кюветы.
ХОД РАБОТЫ. В трех пробирках смешивают реактивы по схеме:
| Реактивы (мл) | Опытная проба | Стандарт | Контроль |
| Сыворотка | 0,5 | - | - |
| Дистиллированная вода | 1,5 | ||
| ТХУ | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Стандартный раствор | - | 0,5 | - |
Через 5 мин опытную пробу и стандартную пробы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. С надосадочной жидкостью готовят следующие пробы:
| Реактивы (мл) | Опытная проба | Стандарт | Контроль |
| Надосадочная жидкость | 1,0 | 1,0 | 1.0 |
| Пикриновая кислота | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| NaOH | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Перемешивают и через 20 мин колориметрируют опытную и стандартную пробы при зеленом светофильтре (540 нм) в кювете толщиной 0,5 см против контроля. Расчет проводят по формуле:
С (мкмоль/л) = 177 · Аоп /А ст.
Перед определением содержания крекатинина мочу разводят в 100 раз. Это разведение учитывают при расчетах. В опытной пробе смешивают о,5 мл мочи, 0,25 мл дистиллированной воды, 0,25 мл ТХУ, 0,5 мл пикриновой кислоты, 0,5 мл NaOH. Через 20 мин колориметрируют на зеленом светофильтре (длина волны 540 нм) в кювете толщиной 0,5 см против контроля, приготовленного в предыдущей работе. Расcчитывают концентрацию креатинина в моче по формуле с учетом ее разведения:
С (мкмоль/л) =50 ·177 · Аоп /А ст.
Содержание креатинина суточной моче рассчитываю по формуле
С · 1,5 / 1000 = ммоль/сут,
где С – концентрация креатинина в моче в мкмоль/л; 1,5 – суточный диурез в литрах, 1000 – коэффициент перевода мкмоль в ммоль.
Норма креатинина в сыворотке крови – 53-106 мкмоль/л, в суточной моче – 4,4-17,6 ммоль/сутки.
Клиренс креатинина (его очищение рассчитывают по формуле
1,07 С /С ,
где1,07 минурный диурез. В норме клиренс по креатинину составляет 80 – 120 мл/мин.
Клинико-диагностическое значение. Определение креатинина проводят для исследования функции почек. Содержание его в сыворотке крови увеличивается при значительном ухудшении функции почек. Креатинемия наблюдается также при закупорке мочевых путей, кишечной непроходимости, тяжелом диабете, механической желтухе, гипофункции надпочечников, голодании. Увеличение креатинина в моче наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии, выраженной недостаточной функции печени. Понижение креатинина в моче – при мышечной дистрофии, голодании, дегенерации почек, лейкемии. Расчет клиренса креатинина позволяет получить информацию об интенсивности основных функций фильтрации, реабсорбции, секреции и почечном кровообращении.