Работа 60. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче

С мочой у взрослого человека выделяется за сутки 20-35 г, или 333-583 ммоль мочевины. Мочевина – диамид угольной кислоты, образующийся в печени при обезвреживании аммиака. В норме в сыворотке крови содержится 3,33-8,32 ммоль/л мочевины.

 

Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенные соединения. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации мочевины в исследуемой моче и сыворотке крови и определяется фотометрически.

 

Исследуемый материал: сыворотка крови, моча.

Реактивы:стандартный раствор мочевины (16,7 ммоль/л). 5%-ный раствор хлорного железа (основной раствор: 5 г хлорного железа доводят до 100 мл водой, после чего подкисляют 1 мл концентрированной H₂SO₄; рабочий раствор готовят из основного: 1 мл основного раствора доводят до объема 100 мл дистиллированной водой, добавляют 8 мл концентрированной H₂SO₄ и 1 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты; раствор хранят в темной посуде). 2,5%-ный водный раствор диацетилмооксима, 0,25%-ный раствор тиосемикарбазида (хранят в темной посуде). Цветной реактив хлорида (готовят каждый раз перед употреблением): к 30 мл рабочего раствора хлорного железа добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5%-ного диацетилмооксима и 0,25 мл 0,25%-ного тиасемикарбазида).

Оборудование: пипетки, пробирки, ФЭК, кюветы с длиной оптического

пути 5 мм.

 

ХОД РАБОТЫ. Мочу перед определением развести в 10 раз. В одну пробирку вносят 0,1 мл мочи, в другую – 0,1 мл сыворотки крови, в третью – стандартный раствор мочевины. Затем во все 3 пробирки добавляют по 2 мл рабочего раствора для определения мочевины, перемешивают и ставят на кипящую водяную баню на 10 мин. Затем пробирки охлаждают в струе холодной воды и колориметрируют на зеленом светофильтре в кювете с длиной оптического пути 5 мм против воды.

 

Расчет производят по формуле:

 

167Е_оп/Е_ст (для мочи).

Клинико-диагностическое значение. Пониженное содержание мочевины в моче отмечается при нефрите, ацидозе, паренхиматозной желтухе, циррозе печени, уремии, повышенное – при недостатке белка в питании, злокачественной анемии, лихорадке, интенсивном распаде белков в организме, после приемов салицилатов, при отравлении фосфором.

Снижение содержания мочевины в сыворотке крови отмечается при паренхиматозном гепатите, циррозе (резкое снижение мочевинообразовательной функции печени), во время беременности, при эклампсии. Содержание мочевины в сыворотке может повышаться при нефритах, лихорадочных состояниях, сепсисе, туберкулезе почек.