Работа 41. Открытие действия фермента липазы

Работа 40. Открытие действия ферментов гидролаз

Работа 39. Открытие каталазы

Каталаза – фермент, широко распространенный в клетках как животных, так и растительных организмов. Каталаза ускоряет реакцию разложения перекиси водорода на воду и молекулярный кислород:

2Н₂О₂ ↔ 2Н₂0 + О_2.

 

Исследуемый материал: кровь, картофельный сок.

Реактивы: 3 %-ный раствор Н₂О₂.

Оборудование: пробирки, пипетки.

 

ХОД РАБОТЫ.К нескольким каплям крови прилить 1-2 мл 3%-ного раствора перекиси водорода. Происходит обильное выделение кислорода. Ту же реакцию проделать с картофельным соком.

 

Ферменты класса гидролаз катализируют реакции распада химических соединений. Причем эти реакции идут с присоединением элементов воды. Действие гидролитических ферментов обратимо. Все ферменты пищеварительного тракта, ускоряющие переваривание белков, жиров и углеводов, относятся к классу гидролаз.

Пепсин – протеолитический фермент, относящийся к классу гидролаз, подклассу пептидгидролаз. Особенностью действия пепсина является то, что оптимум действия фермента находится при рН 1,5-2,5 то есть он максимально активен в сильно кислой среде. Протеолитическую активность фермента можно пронаблюдать, добавив к подкисленному раствору небольшое количество белка фибрина. Фибрин, нерастворимый в воде, под действием пепсина растворяется – происходит ферментативный гидролиз фибрина до растворимых в воде пептидов.

 

Исследуемый материал: фибрин.

Реактивы: раствор пепсина.

Оборудование: пробирки, пипетки, термостат.

 

ХОД РАБОТЫ. В пробирку наливают 0,5 мл раствора пепсин и опускают небольшой комочек фибрина. Обе пробирки помещают в термостат (37˚С) на 1 час. Наблюдают растворение фибрина.

 

 

Липаза - один из ферментов подкласса 1 класса гидролаз. Ферменты, входящие в состав этого подкласса, действуют в присутствии воды на сложно-эфирные связи. Липаза катализирует гидролиз нейтрального жира.

Липазу можно открыть, добавив ее раствор к молоку, содержащему эмульгированный жир. Полученную смесь подщелачивают раствором карбоната натрия до бледно-розовой окраски на фенолфталеин. В присутствии липазы происходит гидролитическое расщепление жира на глицерин и жирные кислоты, реакция среды при этом сдвигается в кислую сторону, розовая окраска исчезает.

 

Исследуемый материал: молоко.

Реактивы: раствор панкреатина, дистиллированная вода, фенолфталеин, 1%-ный раствор карбоната натрия.

Оборудование: пробирки, пипетки, термостат.

 

ХОД РАБОТЫ. В 2 пробирки наливают по 10 капель молока. В первую пробирку добавляют 5 капель панкреатина, содержащего липазу. Во вторую пробирку добавляют такое же количество воды. В обе пробирки добавляют по капле 1%-го раствора фенолфталеина и по капле раствора карбоната натрия до появления бледно-розового окрашивания (нельзя добавлять избыток карбоната натрия). Пробирки помещают в термостат на 30 мин. Наблюдают изменение окраски.

 

Оформление работы. Описать химизм действия ферментов оксидоредуктаз и гидролаз. Сделать вывод.