Гидролиз белков

Контрольные вопросы

ХОД РАБОТЫ

1. Выделение казеина из молока. К 2 мл молока добавляют 2 мл дистиллированной воды и 2 капли 10%-ной уксусной кислоты. Образуется осадок казеина, который отфильтровывают. Фильтрат отбрасывают, а осадок казеина осторожно снимают с фильтра стеклянной палочкой и помещают в чистые пробирки.

2. Определение изоэлектрической точки казеина. Для определения изоэлектрической точки казеина в 7 сухих пробирок наливают нужные реактивы в количествах, указанных в таблице. При смешивании растворов в каждой пробирке устанавливается определенная концентрация ионов водорода. Содержимое пробирок хорошо перемешивают. Через 5-10 мин во всех пробирках появляется осадок (помутнение). Наибольшее количество осадка наблюдается в той пробирке, рН которой соответствует изоэлектрической точке данного белка.

Количество 0,2М CH₃COOH, мл	Количество H₂O, мл	Количество 0,4%-го раствора казеина в 0,2 М CH₃COONa, мл	рН смеси	Степень помутнения
1,6 0,8 0,4 0,2 0,1 0,06 0,3	0,4 1,2 1,6 1,8 1,9 1,94 1,97	0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2	3,8 4,1 4,4 4,7 5,0 5,3 5,6

Оформление. Результаты опытов представить в таблице. В графе «Степень помутнения» отсутствие осадка обозначить знаком минус (-), наличие его – знаком плюс (+), значительное помутнение – несколькими плюсами.

1. Как ведут себя аминокислоты и белки в водном растворе и в присутствии избытка кислоты и щелочи?

2. От чего зависит заряд белка в водном растворе?

3. От чего зависит растворимость белка? Какие факторы стабилизируют белок в растворе?

4. Каковы общие механизмы осаждения белка из раствора? Какими способами можно осадить белок, не вызывая его денатурацию?

5. Что такое изоэлектрическая точка и как ее определить?

6. Что такое высаливание белка?

7. Что такое денатурация белка? Какие агенты, денатурирующие белки, вам известны?

8. В чем заключается разница между осаждением и денатурацией?

9. Каким образом можно разделить альбумины и глобулины сыворотки крови?

10. Назовите мероприятия при отравлении человека солями тяжелых металлов, основанные на необратимых реакциях осаждения белка.

Гидролиз – распад сложного вещества на более простые составные части, связанный с присоединением воды по месту разрыва связей. В зависимости от применяющегося катализатора различают кислотный, щелочной и ферментативный гидролиз. При гидролизе простого белка конечными продуктами гидролиза является аминокислоты. В организме гидролиз белка постоянно протекает в процессе как пищеварения, так и жизнедеятельности клеток под действием протеолитических ферментов. При кислотном гидролизе белка разрушаются некоторые аминокислоты (триптофан подвергается полному разрушению, серин, треонин, цистин, тирозин, фенилаланин – частичному). При щелочномм гидролизе отмечается значительно более сильное разрушение аминокислот. При кислотном гидролизе белки распадаются сначала на высокомолекулярные пептиды, а затем - на низкомолекулярные пептиды, дипептиды и аминокислоты. Сложные белки состоят из аминокислот и небелкового компонента (простетической группы). К сложным белкам относятся нуклеопротеиды, хромопротеиды, фосфопротеиды, гликопротеиды, сложные белки-ферменты, металлопротеиды.

Работа 25. Кислотный гидролиз простого белка

Исследуемый материал: раствор яичного белка.

Реактивы: концентрированная НС1, 10%-ный раствор NaOH, 1%-ный раствор CuSO₄.

Оборудование: круглодонная колба с воздушным холодильником, пробирки, капельницы.