Работа 20. Осаждение белка органическими кислотами
Работа 19. Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами
Работа 18. Осаждение белка органическими растворителями.
Белки нерастворимы во многих органических растворителях. Однако их осаждение происходит только из нейтральных и слабокислых растворов и особенно полно в присутствии электролитов (ионные соли связываются коллоидными частицами и снимают заряд). Органические растворители дегидратируют частицы белка (разрушают водную оболочку) и этим понижают их устойчивость в растворе. Кратковременное воздействие органических растворителей сохраняет белок в естественном состоянии, продолжительное воздействие приводит к денатурации.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: спирт или ацетон, насыщенный раствор NaCl.
Оборудование:пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В пробирку наливают 5 капель раствора яичного белка и 20 капель спирта или ацетона, раствор мутнеет. При добавлении нескольких капель насыщенного раствора NaCl выпадает осадок белка.
Осаждение белка концентрированными кислотами происходит вследствие дегидратации белковых частиц и нейтрализацией их зарядов, а также рядом других причин (денатурация, образование солей и др.). В избытке серной и соляной кислот, а также при их длительном воздействии выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азотной кислоты растворения не происходит.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: концентрированные HCl, H2SO4, HNO3.
Оборудование: пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В 3 пробирки наливают по 15-20 капель концентрированной соляной, серной и азотной кислот. Затем осторожно, чтобы жидкости не смешивались, наслаивают равный объем белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкой пленки. Осторожно встряхивая пробирки, обнаруживают растворение осадка белка в случае осаждения соляной и серной кислотами, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется.
Белки из растворов могут осаждаться органическими кислотами, однако различные органические кислоты неодинаково действуют на белок. Механизм осаждения белков органическими кислотами объясняется дегидратацией белковой молекулы и снятием заряда.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: 10%-ный раствор СС13СООН, 20%-ный раствор С6Н3(ОН)(СООН)SО3Н.
Оборудование: пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В две пробирки наливают по 5 капель раствора белка, затем в одну пробирку добавляют 1-2 капли раствора ТХУ, в другую – столько же раствора сульфосалициловой кислоты. В пробирках образуется осадок.