Определение общих липидов по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом
Продукты распада ненасыщенных липидов, полученные в результате гидролиза липидов серной кислотой, образуют с реактивом, состоящим из фосфорной кислоты и ванилина, стабилизированный и окрашенный в красный цвет, комплекс. Интенсивность окраски комплекса пропорциональна содержанию общих липидов.
Техника определения. К 0,05 см3 опытного раствора (экстракт липидов) прибавляют 2,5 см3 концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и помешают на 10 минут в кипящую водяную баню. Контрольную колбу ставят как опытную, но вместо экстракта липидов берут 0,05 см3 воды. Пробирки вынимают и охлаждают водой до температуры 18-25 0С. Из каждой пробирки отбирают по 0,2 см3 смеси и переносят в пробирку с 3 см3 фосфорнованилиновой смеси. После перемешивания пробы оставляют на 45 минут в темноте. Измеряют поглощение на ФЭК при 500-560 нм (зеленый светофильтр). Для построения калибровочного графика из основного раствора (стандартного) готовят рабочие стандарты, как указано в таблице 2.
Таблица 2 – Данные к построению калибровочного графика
определения липидов
| № пробы | Основной стандартный раствор ванилина, см3 | Хлороформ, см3 | Концентрация липидов, мг/ см3 |
| 0,17 | 0,83 | ||
| 0,33 | 0,67 | ||
| 0,50 | 0,50 | ||
| 0,67 | 0,33 | ||
| 0,83 | 0,17 | ||
| 1,00 | - |
Из каждого разведения берут по 0,05 см3, обрабатывают как опытные пробы.
Концентрацию липидов определяют по формуле
,
где Соп – концентрация липидов в опытной пробе; Аоп – поглощение опытного образца раствора; Аст – поглощение стандартного раствора; Сст – концентрация основного раствора стандартного.
Материалы, реактивы и оборудование. Серная кислота (концентрированная), ортофосфорная кислота (концентрированная), 0,6 %-й: раствор ванилина; фосфорнованилиновая смесь – 4 части концентрированной ортофосфорной кислоты смешивают с 1 частью 0,6 %-го раствора ванилина; хлороформ; стандартный раствор триолеина (12 мг/см3) в хлороформе; пробирки, пипетки на 0,1 см3 и на 1 см3, бюретки на 50 см3, водяная баня, фотоэлектроколориметр (ФЭК).