Розв’язання.

Щоб побудувати рестрикційну карту, необхідно порівняти розміри фрагментів, одержаних при рестрикції кожним ферментом окремо та їх сумішшю. Покажемо дані гель-електрофорезу схематично:

 

EcoRI	BamHI	EcoRI + BamHI
	950 —
850 —
	600 —	600 —
500 —
		400 —
300 —		300 —
		250 —
	100 —	100 —

 

Якщо під дією рестриктази утворилися 3 фрагменти, це означає, що в ділянці ДНК було 2 сайти впізнавання для цієї рестриктази. Фрагмент розміром 300 п.о., який утворюється в результаті гідроліза EcoRI, не розщеплюється при гідролізі сумішшю EcoRI + BamHI, відповідно сайт рестрикції EcoRI знаходиться на відстані 300 п.н. і між ними немає сайта рестрикції BamHI , а в фрагментах розміром 850 п.н. і 600 п.н. є по одному сайту для BamHI. На карті це можна відобразити таким чином:

 

EcoRI EcoRI

500 300 850

 

При гідролізі сумішшю фрагмента розміром 950 п.н. (утворився при гідролізі BamHI ) утворилися різні фрагменти один з них обов’язково розміром 300 п.н. між EcoRI – сайтами. 950 – 300 = 650 п.н., а це означає, що утворилось три фрагмента (650 = 400 + 250) розмірами 300 п.н., 400 п.н.,

і 250 п.н. На карті це можна відобразити таким чином:

 

 

EcoRI EcoRI

BamHI 400 300 250 BamHI

 

BamHI розщеплює EcoRI – фрагмент розміром 850 п.н. на фрагменти довжиною 250 п.н. і 600 п.н., а один з сайтів EcoRI знаходиться на відстані 250 п.н. від сайта BamHI , відповідно фрагмент 600 п.н. повинен бути кінцевим фрагментом ділянки. Тепер ми бачимо, що BamHI розщеплює EcoRI – фрагмент довжиною 500 п.н. на два фрагмента розміром 100 п.н. і 400 п.н. і, що один з EcoRI – сайтів знаходиться від BamHI – сайта на відстані 400 п.н. Таким чином фрагмент розміром 100 п.н. є кінцевим.

 

EcoRI EcoRI

 

100 400 300 250 600

BamHI BamHI

 

Довжина цієї ділянки ДНК 1550 п.н.

 

7. При повному гідролізі плазміди pCEL1 різними рестриктазами та їх комбінаціями одержують такі фрагменти (розміри в т.п.н.):

EcoRI – 6,0; BamHI – 6,0; HindIII – 6,0; HaeII – 3,0; 2,0; 1,0; EcoRI і HaeII – 2,0; 1,0; EcoRI і BamHI – 4,5; 1,5; BamHI і HindIII – 5,0; 1,0; BamHI і HaeII – 3,0; 2,0 і 0,5; HaeII і HindIII – 3,0; 1,5; 1,0; 0,5. Побудуйте рестрикційну карту.