Розв’язання.

В присутності мічених нуклеотидів за допомогою зворотньої транскрипції синтезують мічену ДНК, яку гібридизують з великою кількістю м-РНК самки. Мічена ДНК звязується з м-РНК самки вся, крім ланцюга ДНК, що кодує α2u-глобулін. Його і можна використовувати в якості зонда.

Задачі для самостійного рішення

 

1. На ділянку ДНК миші подіяли рестриктазою MbaII та одержали фрагменти довжиною від 25 т.п.н. до 45 т.п.н. Запропонуйте вектор для створення клонотеки цієї ДНК в бактеріях E.coli.

2. Який із запропонованих олігонуклеотидів:

1) 5′ GAACCGGTTTAACGACCATGGAGAAAA 3′

2) 5′ CAACCGGAGCTTTAAGACCATCGGAAA 3′

3) 5′ GAACCGGAGCTTTAAGACCATTGAAAA 3′

можна використовувати в якості зонду для скринінга ДНК такого складу:

5′ AGCACTGGAATTTCCGATGGTCTTAAAGCTCCGGTTCGA 3′

3. При проведенні експериментів для одержання ділянки ДНК, що кодує білок інтерферон, була сконструйована бібліотека ДНК для лімфоцитів людини. Бібліотеку ДНК ділили на 8 груп, присутність інтерферону в кожній групі перевіряли гібридизацією з м-РНК. Після ідентифікації групи клонів її знов ділили на підгрупи та повторювали визначення. Знадобилось 4 таких цикли. Скільки всього клонів було перевірено?

4. Скільки векторів на основі фагу λ необхідно, щоб створити репрезентативну клонотеку генів еукаріотичної ДНК довжиною 15000 т. п. н.?

5. Для аналізу ділянки ДНК довжиною 160 т. п. н. методом „прогулянка по хромосомі” було обрано вектор на основі фага λ. Побудуйте схему дослідження .

6. Побудуйте схему дослідження методом „прогулянка по хромосомі” молекули ДНК довжиною 240 т. п. н. Покажіть положення унікальних ділянок.

7. Запропонуйте вектор для створення бібліотеки генів молекули ДНК довжиною 3 млн. п.н.

Відповіді

1. космідний.

2. 2)

3. 4096

4. 1000

5. ≈ 10 унікальних послідовностей

6. вектор на основі фага λ, або більшої ємності

7. дріжджова штучна хромосома, інші над’ємні вектори