Методи клонувания ДНК.

Клонування фрагментів ДНК по сайтам рестрикції, а також з використанням адаптерів, лінкерів та коннекторів.

Бібліотеки та клонотеки кДНК, генів та нуклеотидних послідовностей. Клонотеки генів. Способи їх одержання. Поняття про репрезентативність

клонотеки. Клонотеки геномної ДНК та кДНК.

Пошук послідовностей у клонотеках генів. Використання мічених зондів. Гібридизація із зондами.

Одержання бібліотек EST-послідовностей. Методи скринінга бібліотек та клонотек ДНК.

Зворотня трансляція. Використання антитіл для добору клонів в експресованих клонотеках. Клонування in silico.

Позиційне клонування.

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)

Будова сучасного ампліфікатора. Компоненти реакційної суміші, необхідні для проведення ПЛР.

Властивості Taq-ДНК-полімерази.

Фактори, що впливають на точність синтезу ДНК та можливості її підвищення.

Специфічність та ефективність ПЛР.

Різновиди ПЛР. Ампліфікація довгих фрагментів ДНК. Методи підвищення точності ампліфікації.

Одержання точкових мутацій, делецій і вставок за допомогою ПЛР.

Способи введення рекомбінантних ДНК у клітини

Біологічні, хімічні, фізичні та механічні методи.

Трансформація та трансфекція бактеріальних клітин. Електропорація. Способи введення ДНК у культивовані клітини тварин.

Перенесення генів за допомогою вірусів.

Перенесення генів з використанням клітинних рецепторів.

Створення мікроотворів у клітинних мембранах за допомогою лазера. Мікроін’єкції.

Бомбардування клітин мікрочастками.

Трансфекція клітин, опосередкована фосфатом кальцію.

Секвенування ДНК та експресія трансгенів

Виявлення диференційно експресованих генів.

Секвенування ДНК. Гібридизація як метод виявлення специфічних послідовностей нуклеотидів. Гібридизація за Саузерном.

Концепція STS-маркерів. Комп’ютерний аналіз нуклеотидних послідовностей. Електронна ПЛР.

Системи експрессії рекомбінантних генів

Грам-негативні бактерії як експресуючі системи.

Клітини дріжджів як експресуючі системи.

Системи експресії, основані на культурі клітин тварин.

Клітини із штучно порушеною проникністю зовнішніх мембран.

Неклітинні білоксинтезуючі системи.

Клонування багатоклітинних організмів

Етапи клонування.

Методи введення ядер соматичних клітин в яйцеклітини.

Причини низької ефективності клонування.

Стадії клонування ссавців. Неможливість створення ідентичних копій (клонів) багатоклітинних организмів