Ультрацентрифугування нуклеїнових кислот

Основні поняття теорії седиментації. Плавуча густина часток. Константи седиментації. Принцип дії та особливості роботи основних вузлів ультрацентрифуг. Ротори та центрифугові пробірки для ультрацентрифугування. Зонально-швидкісне центрифугування. Середовище для створення градієнтів густини при зонально-швидкісному центрифугуванні. Створення градієнтів, нанесення препаратів на градієнт, вибір режимів центрифугування. Приклади фракціонування РНК, ДНК і нуклеопротеїдів у градієнті густини сахарози. Рівноважне центрифугування. Вибір солей для створення градієнтів. Центрифугування ДНК у градієнтах хлориду цезію. Виділення препаратів тотальної та плаз мідної ДНК при центрифугуванні у градієнтах хлориду цезію з бромідом етидію.

Хроматографія нуклеїнових кислот

Класифікація хроматографічних методів. Елементи теорії хроматографії. Техніка колонкової хроматографії. Гель-фільтрація нуклеїнових кислот та білок-нуклеїнових комплексів. Фракціонування нуклеїнових кислот за допомогою розподільчої та іонообмінної хроматографії. Адсорбційна хроматографія нуклеїнових кислот. Афінна хроматографія нуклеїнових кислот.

Методи кількісного визначення ферментів

Методи виділення та визначення активності ферментів. Одиниці ферментативної активності. Молекулярна та питома активність ферментів. Перерахунок на загальну кількість білка в пробі (гомогенаті). Фактори, що впливають на ферментативну активність: концентрація субстрату, активатори, інгібітори, склад буферу, температура. Методи визначення ферментативної активності. Метод Луорі для визначення концентрації сумарного вмісту білка у пробі. Побудова калібрувальних кривих. Не спряжені (неперервні) та спряжені методи дослідження активності ферментів.

 

Ферменти, що використовуються в генній інженерії