Особливості використання біофізичних та біохімічних методів при проведенні генно-інженерних робіт

Особливості використання оптичних методів у генетичних та біотехнологічних дослідженнях

Оптичні методи, що використовуються для вимірювання концентрації нуклеїнових кислот, білків, антибіотиків, інших метаболітів. Спектроскопія. Характеристика спектрів поглинання та пропускання. Фотометрія. Спектрофлуориметрія – високочутливий метод для визначення низьких концентрацій речовин на основі аналізу інтенсивності флуоресценції. Принцип дії та особливості проведення досліджень за допомогою фотоелектроколориметрів, спектрофотометрів, спектрофлуориметрів.

Електрофорез нуклеїнових кислот

Принцип методу гель-електрофорезу нуклеїнових кислот. Характеристика поліакриламідного та агарозного гелів. Апарати для електрофорезу в вертикальних та горизонтальних пластинах гелю. Приготування препаратів нуклеїнових кислот для електрофорезу. Фактори, що визначають швидкість міграції нуклеїнових кислот при електрофорезі: розмір та конформація молекул, концентрація гелів, напруженість електричного поля. Вибір буфера для електрофорезу. Лідерні барвники. Візуалізація нуклеїнових кислот у гелі. Характеристика барвників для візуалізації нуклеїнових кислот у гелі. Фотографування гелів. Електрофорез нуклеїнових кислот у денатуруючих гелях. Двомірний електрофорез. Молекулярні маркери для електрофорезу ДНК та РНК. Особливості електрофоретичного фракціонування фрагментів сумарної ДНК, вірусної ДНК, різних типів РНК, білок-нуклеїнових комплексів.

Принцип методу імпульсного гель-електрофорезу ДНК. Характеристика модифікацій методу та апаратів для фракціонування ДНК. Особливості виготовлення препаратів ДНК для імпульсного гель-електрофорезу. Двомірний імпульсний гель-електрофорез. Фактори, що впливають на розділення макромолекул при імпульсному гель-електрофорезі. Особливості імпульс-електрофорезу цілих хромосом, їх макрофрагментів та гігантських плазмід. Виділення ДНК з гелів.