Вкажіть, які з наступних тверджень вірні, а які – ні. Якщо твердження невірне, вкажіть чому?

 А. При молекулярному клонуванні важливо, щоб розщеплення донорної і векторної ДНК відбувалося у суворо визначених ділянках з утворенням дискретного і відтвореного набору фрагментів.

 Б. Під дією рестриктаз І типу відбуваються розриви у ланцюгу ДНК, що розташовані навскіс один від іншого, внаслідок чого створюються одноланцюгові комплементарні кінці, які використовують для будування рекомбінантних молекул.

 В. Обробка зразка ДНК певної рестриктазою І типу завжди дає один і той самий набір фрагментів – за умовою, що розщеплення здійснюється по всіх сайтах розпізнавання.

 Г. ДНК-лігаза бактеріофага Т4 каталізує утворення фосфодіефірних зв’язків між кінцями полінуклеотидних ланцюгів, які вже утримуються разом завдяки з’єднанню липких кінців.

 Д. Чужорідний ген, що вбудовується у ДНК-власника, обов’язково повинен містити інформацію, необхідну для реплікації в клітині рекомбінантної ДНК.

 Е. При отриманні рекомбінантних ДНК, створених за рахунок введення у прокаріотичну клітину-реципієнт ділянки еукаріотичної ДНК, з фрагменту еукаріотичної молекули ДНК спочатку необхідно вилучити інтрони за допомогою рестриктаз.

 Є. Кон’югативна плазміда здатна проникати з донорної клітини у реципієнтну шляхом передачі дволанцюгової кільцевої молекули ДНК через спеціальну точку проникнення.

3. Додавання одного нуклеотиду і вилучення одного нуклеотиду в положенні 15 на ДНК викликає наступні зміни в білку, що кодується:

Було: -Lys-Ser-Pro-Ser-Leu -Asn-Ala- Ala-Lys-Стало: -Lys-Val-His-His-Leu-Met-Ala-Ala-Lys-Надайте відповідь на наступні питання:

1. Якою була нуклеотидна послідовність старої і нової мРНК?

2. Який нуклеотид був доданий і який відповідно видалений?

4. Ділянка гену транскрибується в мРНК наступного виду:

5' – UAA CAA AGA ACA AAA - 3'

Які відбудуться зміни у поліпептиді, що транслюються з цієї мРНК, якщо перед транскрипцією у кодуючому ланцюзі ДНК між 10 і 11 нуклеотидами включився цитозин, між 13 і 14 нуклеотидами гуанин, а в кінці додався тимін?

5. Ділянка гену, що кодує поліпептид, транскрибується в мРНК наступного виду:

5' –AAG CАA ССА UUА GUА АUG ААG CАА CСС - 3'

Які відбудуться зміни у поліпептиді, що транслюються з цієї мРНК, якщо перед транскрипцією у кодуючому ланцюзі ДНК між шостим і сьомим кодоном з’явилася вставка (Т)?

Контрольні запитання

1. Які молекули ДНК називають рекомбінантними?

2. Які ферменти використовують для створення рекомбінантних ДНК?

3. Які типи рестриктаз існують? Чим вони розрізняються?

4. Що таке сайт рестрикції?

5. В чому полягає перевага створення рекомбінантних ДНК за рахунок

липких кінців?

6. Яку роль в створенні рекомбінантних ДНК грають ДНК-лігази?

7. В якому випадку використовують ревертази?

8. Чим відрізняється клонована ДНК (кДНК) від звичайної ДНК

еукаріот?

9. З яких етапів складається процес створення рекомбінантних

молекул ДНК?

10. Які існують способи створення рекомбінантних ДНК?

11. Які існують методи визначення рекомбінантних ДНК?

12. Яким чином чужорідна ДНК може бути введена у клітину-реципієнт?

13. Що таке компетентність клітин і яким чином її можна збільшити?

 

Рекомендована література:

1. Анализ генома. Методы /Под ред. К. Дейвиса.-М.: Мир, 1990.- 248 с.

2. Биотехнология. /отв.редактор А.А.Баев, - М.:Наука, - 1984. – 318 с.

3. Біотехнологія: Курс лекцій./Под ред.О.І.Юлевич,-Миколаїв,-2007-156 с