Розщеплення гідроген пероксиду каталазою крові.
Визначення каталазного числа крові.
Завдання 1.Виявити дію каталази.
Хід роботи. У пробірку наливають 10–15 крапель 3% розчину Н2О2 і додають 1 краплю крові. Відбувається бурхливе виділення кисню: рідина піниться, піна заповнює всю пробірку.
Завдання 2.Визначити каталазне число крові.
Принцип. Метод базується на визначенні кількості гідроген пероксиду, розщепленого ферментом за певний проміжок часу. Про кількість розщепленого гідроген пероксиду судять за різницею кількості КМnО4, витраченої на титрування до і після дії каталази:
2КМnО4 + 5Н2О2 + 3Н2SO4 → 5О2 + 2МnSО4 + K2SО4 + 8H2O
Хід роботи. У дві колби для титрування наливають по 1 мл розведеної крові (1:1 000) і підливають по 7 мл Н2О (дист.). Потім у досліджувану пробу додають 2 мл 1% Н2О2, а в контрольну – 5 мл 10% розчину Н2SО4. Дія каталази в кислому середовищі (у контрольній пробі) припиняється, оскільки вона діє при рН=7,4. Обидві проби залишають при кімнатній температурі на 30 хв, потім наливають у досліджувану колбу 5 мл 10% Н2SO4, а в контрольну – 2 мл 1% розчину Н2О2. Вміст кожної колби титрують 0,1 н розчином КМnО4 до слабко рожевого забарвлення. Розраховують каталазне число (КЧ) за формулою:
КЧ (од) = (А – В)×1,7,
де А – кількість 0,1 н КМnО4, що пішла на титрування контрольної проби, мл; В – кількість 0,1 н КМnО4, що пішла на титрування досліджуваної проби, мл; 1,7 – кількість Н2О2, яка еквівалентна 1 мл 0,1 н КМnО4, мг (1 мл 0,1 н КМnО4 еквівалентний до 1 мл 0,1 н Н2О2).
Клініко-діагностичне значення.Каталаза (КФ 1.11.1.6) – геміновий фермент, який розкладає гідроген пероксид на молекулярний кисень і воду. Показником активності каталази є каталазне число – кількість мл гідроген пероксиду, що розкладається одним мікролітром (10-6 л) крові за певний проміжок часу. У нормі каталазне число становить від 10 до 15 одиниць, воно знижується при деяких захворюваннях, які супроводжуються кахексією (рак, анемія, туберкульоз).