Пропитывание ткани заливочной смесью.

От правильно проведенной заливки материала зависит получение высоко качественных срезов. Для лучшего пропитывания материала заливочной смесью используют предварительное пропитывание ткани в смесях следующей последовательности: ацетон/эпон=3:1→ ацетон/эпон=1:1 → ацетон/эпон=1:3. Далее материал пропитывают в чистом эпоне.

 

Заливка материала.

Оптимальными средами для заливки биологических материалов являются эпоксидные смолы, в частности, эпон. Применение эпоксидных смол позволило решить ряд проблем. В значительной степени уменьшилось сморщивание и повреждение ткани при полимеризации, перестало быть проблемой образование воздушных пузырьков внутри блока. Кроме того, скорость испарения эпоксидных смол под воздействием электронного луча незначительна. Срезы тканей, заключенных в эпоксидную смолу, достаточно прочны. Однако, в экспериментах на животных показано, что эпоксидные смолы обладают канцерогенными свойствами.

Пропитанный в чистом эпоне материал переносят в капсулы с заливочным эпоном. Далее для полимеризации эти капсулы сначала ставятся в термостат 37° С, а затем – в 60 ° С. таким образом, получаются кусочки ткани, залитые в эпон.

 

Работа на ультратоме.

Приготовление ультратонких срезов, т.е. срезов, пригодных для исследования в трансмиссионном электронном микроскопе, называют ультратомией. Ультратомия необходима по 2 причинам: 1) электронный пучок не проникает сквозь срезы, толщина которых значительно превышает 100 нм; 2) в толстом срезе компоненты перекрывают друг друга и видны менее четко. Этим объясняется понижение разрешающей способности с увеличением толщины среза.

Непременным условием получения качественных ультратонких срезов является хороший нож (стеклянный или алмазный). Для получения ультратонких срезов применяют специальные приборы, называемые ультратомами. Полученный ранее эпоновый блок закрепляют в специальном держателе и под бинакуляром из ткани, залитой в эпон, вырезают пирамидку. На ультратоме изготавливаются срезы. При оптимальных условиях заливки и выполнения ультратомии не удается получить срезы тоньше 30 нм. Обычная толщина ультратонких срезов 50-100 нм.

Если гистологические срезы располагают на предметных стеклах, то ультратонкие срезы «кладут» на специальные подложки – бленды или сетки. Как бленды, так и сетки имеют диаметр около 0,5 см.