Для вирусологических исследований.
Для вирусологического исследования в лабораторию направляют патологический материал, при взятии которого необходимо исходить из патогенеза заболевания (входные ворота, пути распространения вируса в организме, месте его размножения, пути выделения). Так, при вирусной диарее в лабораторию направляют от больных животных носовые истечения, кровь и фекалии, от трупа – слизистую носа, трахею, легкие, слизистую преджелудков, кишечника, печень, селезенку и мезентериальные лимфатические узлы. При инфекционном ринотрахеите от больных животных – истечения из носа и глаз, кровь, абортированные плоды с плодными оболочками и околоплодной жидкостью, а от трупа – слизистую носа, трахею, бронхи, легкие и в некоторых случаях головной мозг.
Патологический материал берут как можно быстрее после появления четких признаков болезни и не позднее 2-3 часов после смерти или убоя. Это связано с тем, что сразу после заболевания или в первые 1-2 дня значительно ослабевает барьерная роль кишечника, что способствует диссиминации кишечной микрофлоры. Пробы необходимо брать асептически, не допуская их загрязнения, в стерильный флакон. Каждую пробу необходимо брать в отдельный флакон. Масса каждой пробы должна быть не менее 5-10 мл (грамм). Все флаконы должны герметично закрываться пробками, обычно резиновыми, продезинфицированы снаружи, высушены и промаркированы
Кровь у крупного рогатого скота берут из яремной вены в верхней трети шеи в объеме не менее 5 мл в пробирки. Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, кожу обрабатывают спиртом или 3%-ным раствором карболовой кислоты. Для серологических исследований необходимо иметь парные сыворотки, взятые в начале и конце болезни. Первую пробу берут как можно раньше – в инкубационный период или в начале проявления клинических симптомов болезни, вторую – во время выздоровления ил через 2-3 недели после заболевания. Для приготовления сыворотки нельзя применять антикоагулянты или консерванты, так как они могут сделать сыворотку антикомплементарной, а в реакции нейтрализации оказать нейтрализирующее действие на вирус, оказаться токсическим для культур клеток или нестерильными. Кровь в объеме 10-15 мл берут в стерильные пробирки с резиновыми пробками, выдерживают при комнатной температуре до образования сгустков, обводят стеклянной палочкой и переносят в холодильник при 4 оС на 18-20 часов.
Смывы со слизистой оболочки носа, глаз берут стерильными ватными тампонами, погружают их в пенициллиновые флаконы или пробирки, содержащие 3-5 мл раствора Хенкса или питательной среды для культуры клеток с антибиотиками (пенициллин и стрептомицин по 500 ЕД) и белковым стабилизатором (0,5%-ный раствор желатина или 0.5-1%-ным раствором альбумина бычьей сыворотки). Присутствие стабилизаторов необходимо для предотвращения быстрой инактивации некоторых вирусов.
Фекалии берут из прямой кишки при помощи шпателя или палочки и помещают в стерильную пробирку или пенициллированный флакон.
Кусочки внутренних органов необходимо брать очень быстро, так как при многих вирусных инфекциях наблюдаются случаи посмертной аутостерилизации, в результате чего вирус не обнаруживается или его количество становится незначительным и обычными методами не выделяется. Размер кусочков органов должен быть несколько см3 и масса 10-20 грамм.
Транспортировка и хранение проб патологического материала. Необходимо создать для проб условия, обеспечивающие замедление процессов инактивации вирусов. Это достигается низкими температурами. Для этого пробирки с патологическим материалом, закрытые резиновыми пробками, надо поместить в термос со льдом, со смесью в равных частях сухого льда и этилового спирта (создается температура –70 оС, которая держится несколько дней). Можно использовать смесь льда и поваренной соли в соотношении 3:1 (температура –15...– 20 оС). Для консервации кусочков паренхиматозных органов и тканей используют химические консерванты – смесь в равных объемах стерильного глицерина и 0,85%-ного раствора поваренной соли, но употребление глицерина делает невозможным исследование патологического материала методом иммунофлюоресценции, поэтому необходимо отправлять мазки-отпечатки.
Патологический материал снабжают надежной и четкой этикеткой с указанием хозяйства, вида животного, вида материала и даты, надписи делают простым карандашом. Термос с патологическим материалом должен быть опечатан. Также патологический материал сопровождается письмом с подробной информацией о животном, от которого взяты пробы, об эпизоотологических данных хозяйства, о предположительном диагнозе и мерах, принятых для ликвидации болезни (лечение, вакцинация), также письмо должно содержать дату и фамилию врача. Патологический материал и сопроводительное письмо отправляют в лабораторию с нарочным.
Доставленный в лабораторию патологический материал сразу исследуют. Если нет возможности исследовать материал сразу, то его хранят при температуре –40...–70 оС. Если нет уверенности в том, что исследуемое инфекционное заболевание было вызвано только вирусом, то часть материала отдают для бактериологического и микологического исследования.
Ветеринарная лаборатория.
Вирусологический отдел Гагаринской ветеринарной лаборатории осуществляет диагностику вирусных инфекций, контролирует заболеваемость животных, вызываемую вирусами, учитывает состояние и напряженность специфического постинфекционного и поствакционального противовирусного иммунитета, участвует в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными заболеваниями животных в Гагаринском районе Смоленской области.
Лаборатория размещается в одноэтажом здании на окраине города Гагарин Смоленской области, вирусологический отдел занимает отдельное крыло. Комната, где работают с вирусным материалом хорошо освещена и состоит из 2х отсеков (предбоксник и бокс), разделенных стеклянной перегородкой с дверью. В боксе размещены столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрыта стеклом, над рабочим местом установлены бактерицидные лампы, у входа в бокс лежит резиновый губчатый дезковрик, пропитанный дезраствором. В предбокснике держат стерильные халаты, шапочки, косынки, маски, тапочки, которые надевают перед работой в боксе и размещают оборудование, соответствующее назначению бокса (термостат, холодильник, водяная баня, центрифуга). Поля в лаборатории сделаны из плотного влагонепроницаемого, устойчивого к дезинфицирующему средству материала (линолеум). Стены и потолки покрыты легкомоющимся материалом (масляная краска). На окнах – сетка, препятствующая проникновению насекомых.
Для регистрации поступившего патологического материала имеется приемная, в которой стоит 2 стола, обитых жестью, и емкости с дезинфицирующими растворами (3%-ный раствор хлорамина).
Существует специальная комната – вскрывочная, где происходит вскрытие трупа и отбор патологического материала для дальнейшего исследования. Вскрытие делают на столе, на котором размещен сосуд с дезинфицирующим раствором. Также во вскрывочной располагается стеклянный шкаф с необходимыми инструментами, стерильной посудой для сбора материала и шкаф для спецодежды.
В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, аппаратуру, приборы и обезвреживают инфекционный материал.
Моечная предназначена для мытья посуды, аппаратуры и приборов. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом моют только после обезвреживания.
Виварий имеет карантинное отделение, комнату для здоровых и экспериментальных животных, а также комнаты для мытья и дезинфекции клеток, для инвентаря и специальной одежды, для приготовления кормов и др. Помещения для здоровых и экспериментальных животных изолированы друг от друга и имеют самостоятельные входы и выходы. Лабораторные животные содержаться в клетках. На каждой клетке имеется отметка о дате поступления в виварий, массе. На клетках с подопытными животными дополнительно отмечают дату заражения и вид вируссодержащего материала, № экспертизы и количество зараженных животных.