ИХТИОТОКСИКОЛОГИЯ 2 страница
При возбуждении и обратимом повреждении клетки имеет место перераспределение минеральных веществ между клеткой и средой: ионы калия выходят из клетки, а ионы натрия и хлора поступают в клетку. После гибели клетки калий полностью выходит наружу. Так потеря клетками калия и поступление в них натрия описано при действии ядов, подавляющих дыхание и гликолиз.
Фосфорорганические соединения вызывают сокращение митохондрий, а ДДТ - их набухание за счет различий во влиянии на проницаемость мембран. Вещества, нарушающие проницаемость клеточных мембран и работы Na+-K+-насоса как правило, вызывают набухание и обводнение клеточных структур и тканей в целом. Структурные нарушения органелл, которые приводят к освобождению литических ферментов, завершаются лизисом клеток.
Некоторые металлы (Fe, Zn, Pb) обычно оседают в виде гранул в различных тканях гидробионтов, что также находит отражение в изменении структурных элементов клетки.
При действия некоторых ядов развивается анемия за счет подавления эритропоэза (ялан, севин, трихлорметафос) или усиления распада эритроцитов (диурон, пропанид, метилнитрофос, фенилгидразин, бертолетова соль, мышьяковистый водород), повышается число аномальных форменных элементов. Изменение количестве нейтрофилов и фагоцитов может служить специфической реакцией на токсическое воздействие.
Перспективно исследование эффектов токсикантов на ядерные структуры клеток гидробионтов является перспективной областью водной токсикологии. Установлена корреляция действующей концентрации токсиканта и количества хромосомных нарушений.
Изменения, обнаруживаемые на микроскопическом уровне, находят отражение в наглядных нарушениях. Продукты хлорирования сточных вод и другие агенты вызывают у рыб выделение слизи, особенно в жабрах, появление на жабрах признаков некроза, отслоение эпителия, что приводит к асфиксии и гибели. Детергенты, которые действуют преимущественно на жабры, вызывают ограничение газообмена. Нефть приводит к разрушению жабр, плавников, патологию печени. Медь в концентрации 0,5 мг/л вызывает обильное выделение слизи и гибели рыб в результате аноксии.
Фосфор вызывает вздутие тела и ерошение чешуи у рыб, пучеглазие, и является характерным признаком отравления рыб этим элементом.
Ртуть в малых концентрациях вызывает потемнение покровов рыб, у телялий губы и хвостовой плавник приобретали красный цвет.
У личинок хирономид при токсическом воздействии происходит деформация антенн. Характер изменений может зависеть от уровня воздействия.
У моллюсков при действии некоторых токсикантов отмечается деформация раковин.
В клетках водорослей при действии токсикантов различной природы отмечается прежде всего нарушение фотосинтетического аппарата. Обычно это сопровождается уменьшением содержания фотосинтетических пигментов и изменением структуры хлоропластов.
Процессы, находящие отражение в реакции целой ткани, уже оказываются интегральными, результатом взаимодействий многочисленных более частных нарушений. К другим интегральным ответам основных систем организма можно отнести изменения реакций поведения, роста, размножения и пр.
Влияние на поведение гидробионтов
В результате токсического воздействия изменяются реакции поведения водных животных. Изменения отражаются на общей двигательной активности, характере плавания, пищевых, оборонительных реакциях, нерестовом поведении, отношении к естественным факторам окружающей среды. Реакции, выявляющие нарушение поведения, могут быть сходными для гидробионтов из различных групп или носить элементы специфики.
Резко изменяется двигательная активность инфузорий при действии многих веществ. Изменение выражается в последовательных периодах возбуждения и угнетения движения, изменении формы тела. Олигохеты при действии фосфорорганических соединений прекращают волнообразные движения, хирономиды – прекращают строительство домиков и т.д. Разнообразны реакции на токсичность медицинской пиявки, которые выражаются в своеобразии принимаемых поз.
У рыб ртуть в летальных концентрациях вызывает гиперактивность, нарушение ориентации, потемнение покровов, перевертывание. При действии меди рыбы перемещаются к поверхности, отмечается гиперактивность с быстрыми движениями грудных и жаберных плавников, потеря равновесия.
Свинец вызывает потемнение, спорадические движения и потерю активности.
Раздражение эпителия жабр при действии токсикантов вызывает реакцию, называемую "кашлем" рыб.
Общее нарушение высшей нервной деятельности отражается в изменении условнорефлекторных реакций. Так у карасей металлы вызывают изменения условнорефлекторных реакций при концентрациях, в несколько раз ниже, полулетальных. Пестицыды фенитротион и севин в опытах на форели нарушали стайное поведение у рыб: стая рассредоточивалась, рыбы находились в угнетенном состоянии и держались на расстоянии друг от друга.
Известно, что в некоторых концентрациях загрязняющие вещества могут привлекать рыб, как это показано для низких концентраций щелочей, аммиака, солей меди. Растворенный хлор привлекал форелей при концентрации 0,1 мг/л, отпугивая при меньших и больших концентрациях.
Токсиканты изменяют способность гидробионтов реагировать на воздействие других факторов окружающей среды. В частности, показано изменение температурного преферендума рыб. Такая неадекватность реакций может иметь решающее значение в способности гидробионтов реагировать на изменение условий окружающей среды.
Токсичность и размножение
Влияние токсических агентов на размножение может развиваться разными путями. Повышение физиологической нагрузки токсикантом может уменьшать гаметогенез. Нарушение реакций поведения может подавлять нерест и заботу о потомстве. Присутствие токсиканта в среде можете снижать выживаемость спермы и яйца. В процессе развития эмбриона спектр повреждений может быть широким – от появления всякого рода морфологических аномалий (тератогенный эффект) до гибели эмбрионов и личинок.
При слабых токсических воздействиях наблюдается увеличение нерестового периода, как показано для моллюсков и морских ежей. Нарушение формирования половых клеток приводит к снижению их численности, задержке или преждевременному вымету. Влияние на процессы онтогенеза выражается в изменениях процессов дифференцировки и метаморфоза. Нарушаются формы и функции эмбриона. Наиболее чувствительны следующие периоды в развитии эмбриона: гаструляция, ранний органогенез, вылупление.
Высока чувствительность к токсическому воздействию на стадии клеточной пролиферации, когда формируется специализация клеток по будущим органам. В результате часто снижается выклев личинок. В отдельных случаях выклев может быть даже повышенным, но снижается выживаемость личинок.
Влияние на рост гидробионтов
Скорость роста определяется по изменениям размера, веса, интенсивности деления клеток. Скорость роста организма так же, как и рост культуры организмов, изменяется при токсических воздействиях.
Интенсивность деления клеток выражается через митотический индекс – долю делящихся клеток от общего их числа. В зависимости от концентрации и продолжительности действия токсиканта митотический индекс может временно возрастать или угнетаться. Устойчивое снижение индекса отражает торможение роста ткани.
Общее изменение массы и энергии организма находит выражение в понятии обмена. Обмен, связанный с ростом, называется пластическим обменом, который включает прирост, замену отмирающих клеток, отложение запасных веществ. Обмен, связанный с движением, называется энергетическим обменом.
При воздействии неблагоприятных факторов эти показатели могут изменяться и, прежде всего, нарушается пластический обмен, а энергетический обмен при этом может даже возрастать. Часть вещества и энергии расходуется на производство половых продуктов и это явление называется генеративным обменом. При подавлении пластического обмене усвоенное организмом вещество идет на покрытие жизненных трат организма. Половые клетки при этом могут вообще не образовываться, что выражается в снижении репродуктивности, измельчении популяции.
Подавление обмена приводит к снижению сопротивляемости организма к неблагоприятным факторам не только антропогенного, но и естественного характера. Периоды более интенсивного обмена вещества обычно соответствуют большей чувствительности организма к поврежденному агенту.
Отдаленные эффекты токсических веществ
К отдаленным последствиям относят такие эффекты токсических веществ, которые проявляются при длительном воздействии нелетальных концентраций токсикантов в водной среде. Такие последствия связывают, главным образом, с влиянием токсикантов или продуктов их превращения на наследственные структуры клеток. Последствия такого влияния могут выразиться в вида мутаций. Мутагенным действием обладают тяжелые металлы, нитриты, некоторые пестициды, промышленные растворители, полициклические компоненты нефти. Полициклические амины приобретают способность к взаимодействиям с ДНК, РНК и белкам после детоксикационного превращения в гидроксиламины и ортоаминофенолы, полициклические углеводороды – в виде эпоксидных метаболитов, алифатические диалкиднитрозамины за счет превращения в диазоалканы.
Мутации, возникающие при действии химических агентов, могут быть соматическими и гаметическими. Соматические мутации могут порождать новообразования в соматических клетках и, как итог, появление злокачественных и доброкачественных опухолей.
Гаметические мутации на протяжение поколений могут приводить к появлению морфологических и функциональных нарушений, снижающих выживаемость особей или их способность адаптироваться к условиям среды. Морфологические изменения могут принимать разнообразные формы: уменьшение размеров, снижение выживаемости потомства и т.д.
4. МЕТОДОЛОГИЯ ИХТИОТОКСИКОЛОГИИ
4.1. Биотестирование и биоиндикация
Основными методами водной токсикологии являются методы биотестирования и биоиндикации.
Биотестирование представляет собой методический прием, основанный на оценке действия фактора среды, в том числе и токсического на организм, его отдельную функцию или систему организмов.
При оценке биологического действия веществ, загрязняющих водную среду, интактные (in- отрицание) гидробионты или их сообщества специально вводятся в испытуемую среду. Таким образом, режим воздействия задается заранее.
Методы биотестирования могут быть применены для исследования общетоксикологических закономерностей, токсикологического нормирования, токсикологического контроля.
В зависимости от поставленной при проведении биотестирования задачи различными будут подходы к схеме постановки опыта и оценки результатов испытания.
Для исследования общетоксикологических закономерностей применяются разнообразные методы практически из любой сферы биологии и смежных научных областей. Обобщающей основой таких исследований оказывается воздействие химического агента на систему биологического происхождения. Это может быть биохимическая система, выделенный элемент клеточной структуры организма, различные показатели функции и структуры организма, интегральные характеристики организма, параметры, характеризующие состояние популяций, сообществ, организмов и экосистем. Активность переноса и трансформации токсического агента и последствия его действия определяются с применением химико-аналитических и биохимических методов, микроскопической, электрометрической техники, визуальными и вычислительными методами. Степень изменения каждого из параметров служит фактическим показателем токсического действия. Однако ценность каждого из показателей различна. Некоторые изменения со временем исчезают, значение параметра нормализуется. Изменение других хотя и сохраняется, для судьбы особи или популяции существенного значения может и не иметь.
Для целей токсикологического нормирования применяются системы организмов и их характеристик, отбираемых по строго обоснованным принципа. В схему должны быть включены представители таких групп гидробионтов, которые играют ведущую роль в общем круговороте вещества в водоеме. Сюда относятся организмы, ответственные за самоочищение, производящие первичную продукцию, осуществляющие трансформацию вещества и энергии в водных экосистемах – консументы и редуценты.
К группе организмов-редуцентов, ответственных за самоочищение, относятся микроорганизмы (бактерии, простейшие, грибы и пр.). Продуценты в водных экосистемах представлены водорослями и высшими водными растениями, организмы, поглощающие готовое органическое вещество, представлены консументами разного уровня (зоопланктон, зообентос, рыбы). Очень важным элементом с точки зрения токсикологического контроля среды являются организмы, имеющие стадийность в своем развитии, которые характеризуются различной чувствительностью стадий. В результате один вид как будто распадается на группу организмов, обладающих разной чувствительностью.
Помимо живых организмов составной частью водной экосистемы является совокупность параметров, характеризующих качество среды. Прежде всего сюда относятся гидрохимические параметры, в том числе и интенсивность убывания концентрации самого токсического вещества.
Для целей токсикологического нормирования необходимо выбрать наиболее важные функции и структурные элементы, нарушение которых влечет за собой изменения в популяциях и сообществах. Основными показателями токсического эффекта оказываются такие, которые помогают определить судьбу организма, популяции и экосистемы при данном химическом воздействии. Эта судьба прежде всего определяется выживаемостью гидробионтов и качеством их потомства. Исследования параметров должны дать ответ на вопрос о том, насколько токсично данное вещество для организма, какие нарушения происходят в организме и в биосообществах водоемов, при каких максимальных концентрациях вещество не оказывает изменений у гидробионтов.
Определение растворимости вещества, его устойчивости в водной среде и свойства его остатков. Определение проводится с применением химико-аналитических методов, наиболее удобных для данного исследования. Наблюдение за раствором продолжается не менее 30 суток. На основании получаемых данных рассчитывается срок разрушения 95% вещества.
Устойчивость вещества может быть определена по токсичности заданной концентрации (LC50 за 24 часа) для культуры гидробионтов, например, дафний. Это исследование позволяет оценить остаточную суммарную токсичность вещества и продуктов его превращения.
Опыты проводятся при стабильной температуре в стеклянных кристаллизаторах, заполненных профильтрованной водой из чистого 
водоема куда вносится пептон из расчета 3 мг/л. Вредным считается действие токсиканта, вызывающее отклонение от контроля значения рН более, чем на 1,5 единиц, уменьшение содержания кислорода до 2 мл О2/л, снижение численности сапрофитов, количества нитратов или нитритов, более, чей на 25%.
Исследования на водорослях проводятся главным образом с использованием видов зеленых водорослей, относящихся к родам хлорелла или сценедесмус и сине-зеленых водорослей рода микроцистис. Опыт, который продолжается до 35 суток, ставится с культурой на соответствующей питательной среде при стабильной температуре (19-20°), в колбах 0,5-0,8 мл при 12-часовом световом дне с интенсивностью освещения 3-5 тыс. люкс.
В процессе опыта проводится визуальное наблюдение за общим состоянием культуры, изменением окраски и прозрачности культуры, изменением численности клеток водорослей путем просчета в камере Горяева, изменением интенсивности фотосинтеза кислородным или радиоуглеродным методом, определение живых и мертвых клеток водорослей методом люминесцентной микроскопии, определение pH среды.
Допустимыми считаются отклонения биологических параметров от значений в контроле, не превышающие 25%.
В качестве представителей высшей растительности для токсикологических исследований обычно используется ряска и элодея. По ряду причин преимущество отдается элодее. Опыты на элодее проводятся также в течение 30 суток в кристаллизаторах емкостью 1 л при температуре 17-22° при естественном или искусственном освещении не менее 1500 лк. В процессе опыта учитываются общее состояние растений изменение окраски, повреждение точек роста, потеря тургора, прирост основного побега в длину, число и длина отростков и корней.
Простейшие являются важным компонентом водных экосистем, участвующим в процессах самоочищения водоемов и выступающим в роли кормового объекта. Чаще других в лабораторной практике используются инфузории (Paramecium caudatum). Парамеции могут быть собраны в водоеме и разведены в культуре на минеральной среде в колбах по 25-50 мл при стабильной температура. Кормом служат водоросли или бактерии из культуры. Продолжительность хронических наблюдений не превышает 15 суток. Учитываются выживаемость и размножение. Дополнительно могут быть учтены активность движения, скорость фагоцитоза по среднему числу пищеварительных вакуоле.
Допустимыми концентрациями считаются такие, в которых выживаемость и размножение не отличаются статистически достоверно от контроля.
Из организмов зоопланктона в токсикологической практике наиболее распространены дафнии. Рачки легко культивируются и исследуются. Кормом служат зеленые водоросли, пекарские или кормовые дрожжи, культуры бактерий. Опыты ставят в стаканах емкостью 200 мл, куда помещаются по 10 экземпляров дафний. Продолжительность опыта зависит от числа поколений, за которыми ведется наблюдение. Три поколения обычно занимают срок в 45 дней.
Основными тест-функциями в опыте служат выживаемость, общее состояние рачков, поведение, движение органов. Регулярно просчитывается партеногенетически народившаяся молодь и ее морфологические признаки. Подобные наблюдения проводятся, по крайней мере, за тремя поколениями дафний. Учитываются также скорость созревания, темп размножения, периодичность линек, отражающая скорость роста рачков. В качестве вспомогательных показателей токсичности учитываются скорость сердцебиения и пульсация ножек.
Личинки хирономид относятся к организмам бентоса и их исследование представляет интерес, так как многие токсические вещество в водной среде осаждается или адсорбируются донным грунтом, где создаются повышенные концентрации агента. В токсикологических опытах используются личинки размером 3–4 мм (мотыль), подкармливаемые дрожжами. Опыт ставится в чашках Петри. Учитываются основные показатели выживаемость, сроки окукливания, сроки выхода и процент выживших комаров, доля уродливых особей. Дополнительными показателями служат изменения внешнего вида и окраски личинок, иx поведения и веса, активности имаго. Подобные исследования занимают срок до 30 дней.
Другим представителем группы организмов бентоса служит прудовик Limnaсa stagnalis. При содержании и культивировании в лаборатории моллюсков кормят листьями одуванчика или капустой. Содержат в кристаллизаторах объемом 2–3 л по 3–5 экземпляров. Продолжительность хронических опытов до 60 суток. Показателями состояния организма служат реакция поведения, интенсивность потребления корма, выживаемость, появление первых кладок и их размер по числу яиц, количество вылупившейся молоди. Учитывается также чувствительность ноги при механическом воздействии, характеристики эмбриогенеза, размер раковины, вес тела и раковины.
Критерием токсического действия является снижение выживаемости моллюсков и эмбрионов на 15–25% по сравнению с контролем.
Рыбы являются основным промысловым объектом, лучше других пресноводных организмов изученным на разных стадиях развития.
Для токсикологических исследований используются холодноводные виды, собранные в природных водоемах и адаптированные к лабораторным условиям. Содержатся рыбы в большом объеме воды или в условиях аэрации при концентрации кислорода около 10мг/л. Кормление осуществляется живым или гранулированным кормом. В процессе опыта учитываются выживаемость, прирост, поведение и реакции на раздражители, характер дыхательных движений, внешний вид и состояние внутренних органов (при вскрытии). Из дополнительных показателей заслуживают внимания гематологические характеристики (содержание гемоглобина, количество эритроцитов, РОЭ, подсчет лейкоцитарной формулы, эритропоэз), гистологические и гистохимические показатели тканей органов. Дополнительный органолептический тест заключается в дегустационной оценке запаха и вкуса вареного мяса рыб, находившихся в разных концентрациях испытуемого вещества, и бульона. Изменение запаха и вкуса оценивается по 5-балльной системе. Продолжительность наблюдений - до 90 дней.
Особым вниманием токсикологов, пользуются эмбрионы рыб. Опыты с икрой ставятся в чашках Петри. При наблюдении учитываются темп развитая и дробления, количество оплодотворенных яиц, гибель эмбрионов, гибель предличинок, количество аномалий развития на разных стадиях. Продолжительность наблюдения зависит от специфики вида. В качество допустимой для эмбрионов рыб принимается такая концентрация, при которой развиваются личинки, не отличающиеся достоверно от контрольных по морфофункциональному состоянию.
Помимо указанных в схеме объектов могут дополнительно исследоваться токсикологические эффекты на другие виды, такие, как малощетинковые черви, коловратки, двухстворчатые моллюски, рачки циклопы.
В результате проведеннных по стандартной схеме исследований выявляются концентрации, признаваемые в качестве допустимых для каждого из параметров исследовавшихся гидробионтов. Все допустимые концентрации сводится в таблицу. Наименьшая из отмеченных концентраций рекомендуется в качестве предельно допустимой.
Для оценки токсичности сточных вод в загрязняемых водоемах в целях здравоохранения применяются методы токсикологического контроля. В этом случае водный организм или объект фактически является заменителем химического индикатора или аналитического датчика. В отличие от подходов токсикологического нормирования, где основной задачей является сохранение благополучия всех организмов, включенных в схему, в токсикологическом контроле наряду с чувствительностью tect-функции предъявляется требование быстроты ответа.
Для оценки токсичности растворов и сред используются инфузории, дафнии, кишечнополостные, микроорганизмы. Рекомендованы и другие объекты, например, пиявки, моллюски, рыбы. Применение этих организмов некоторых случаях позволяет проводить качественно-количественный анализ растворов.
В сточных водах предполагается относительно высокое содержание действующего вещества, поэтому действие может быть отнесено к острым.
Наиболее оперативными показателями токсического действия служат поведение и выживаемость. Например, дафнии в токсической среде изменяют характер передвижения, оседают на дно. Оседание предшествует параличу и гибели. Двустворчатые моллюски закрывают створки, стремясь изолироваться от загрязненной среды, а при острых отравлениях перестают реагировать на прикосновение. Рыбы при появлении токсичности также изменяют характер передвижения, локализуясь у поверхности, теряют равновесие. Характерной реакцией на раздражение жабр оказывается "рыбий кашель".
Одиночные виды или показатели могут быть использованы, в том случае, если соотношение химических компонентов в растворе известно и остается постоянным во времени, а для самого показателя известна активность ответных реакций от концентрации. Если же соотношение компонентов в стоке изменчиво или его состав неизвестен, то необходимо постоянное использование нескольких организмов и показателей, так как в растворе может появиться компонент более токсичный для одного или другого гидробионта.
Биоиндикация представляет собой выявление уже состоявшегося неуправляемого загрязнения водоема по функциональным показателям его обитателей или по экологическим характеристикам сообществ.
Биотестирование природных вод должно проводиться с применением достаточно чувствительных объектов из лабораторных культур или заведомо чистых водоемов. Так как при загрязнении природных вод высокий уровень токсичности должен быть исключен, то степень воздействия будет приближаться к тому, что имеет место в токсикологическом нормировании. В связи с этим и оценку токсичности следует проводить с применением тех же организмов и показателей, что используются в нормировании. Основные трудности, возникающие при подобных исследованиях, связаны с проявлением парадоксальных явлений. Зачастую низкие уровни токсикантов вызывают эффект стимуляции функций у гидробионтов, в частности у дафний. Очевидно, при биотестировании природных вод следует обращать внимание не только на угнетение, но и на стимуляцию жизненных функций гидробионтов.
Указанные формы биотестирования основаны на учете проявлений токсикодинамики. Однако в последнее время возрастает значение и показателей токсикокинетики, в частности, исследуются закономерности накопления и распределения веществ в тканях гидробионтов.
Определение содержания загрязняющих веществ и их остатков в тканях гидробионтов дает возможность выявить загрязнение экосистем, если концентрации веществ в воде лежат ниже порога чувствительности метода. Сохранение веществ в тканях позволяет определить уже происшедшее ранее загрязнение, а сопоставление его содержания в разных организмах оценить склонность к накоплению. Наиболее приемлемыми объектами для целей химико-аналитического мониторинга загрязнения служат оседлые организмы (водные растения, моллюски, усоногие раки) или организмы высшего трофического уровня (хищные рыбы, водоплавающие птицы).
Таким образом, методы биоиндикации в системе мониторинга нацелены на оценку тенденций в экологических последствиях загрязнения водоемов. Биоиндикация преимущественно производится по оценке видового состава сообществ для определения общеэкологической ситуации в водоеме, сложившейся в относительно отдаленное время после загрязнения. Применение же методов биотестирования для целей мониторинга может дать сведения только о загрязнении, происходящем в момент взятия пробы.
4.2. Методы диагностики отравления рыб
Отравления рыб диагностировать очень сложно, так как они часто возникают внезапно, протекают в быстро изменяющихся условиях среды, проявляются недостаточно специфичными признаками.
При подозрении на отравление необходимо решить ряд вопросов: произошла ли гибель рыб от токсикоза или от заразного заболевания, от действия неблагоприятных факторов среды, от недоброкачественного кормления и т. п.; от чего и когда наступила смерть животных; каким отравляющим веществом вызвана гибель рыб; каким путем оно попало в водоем и организм; какие факторы способствовали отравлению рыб; известны ли подобные случаи из практики или специальной литературы? Ввиду разнообразия обстоятельств отравления круг вопросов может быть расширен. Чтобы получить максимально полные сведения, диагностику отравлений осуществляют комплексно по следующей схеме:
· общее обследование водоема и выявление источника загрязнения;
· изучение и оценка клинической картины отравления;
· патологоанатомическое вскрытие рыб;
· биологические и органолептические исследования;
· лабораторные исследования;
· оценка результатов комплексных исследований и заключение.
Обследование водоема и выявление источника загрязнения. В случае массовой гибели рыб проводят комиссионное обследование водоема (рыбоводного хозяйства) с участием специалистов ветеринарной и ведомственной ихтиопатологической службы, органов рыбоохраны, водного хозяйства, санэпидемстанции и представителей местной власти. Его начинают с опроса очевидцев, осмотра акватории и берегов водоема, анализа имеющейся документации о масштабах материального ущерба, данных по гидрологии, гидробиологии водоемов и т. п. При этом определяют участки и места концентрации больных и погибших рыб, уточняют время появления болезни и характер ее течения, видовой и возрастной состав заболевших рыб и других гидробионтов. Визуально оценивают состояние водоема, его дна, береговой зоны, степень зарастания.
На месте определяют температуру, рН, прозрачность, запах, окраску воды, содержание в воде кислорода и двуокиси углерода, а также проводят клинические наблюдения и патологоанатомическое вскрытие больных и погибших рыб. Берут пробы воды, рыбы, грунта и других объектов для химико-токсикологических исследований. Уточняют наличие промышленных предприятий, коммунально-бытовых, сельскохозяйственных объектов, сбрасывающих сточные воды в водоем. Собирают сведения о масштабах, ассортименте и сроках применения пестицидов и удобрений в сельском и лесном хозяйствах.
При необходимости обследуют подозреваемые источники загрязнения. От технологов на промышленных предприятиях получают данные о количестве и химическом составе сточных вод, проверяют надежность работы очистных сооружений и чистоту сбросных вод, используя материалы ведомственных химических лабораторий и бассейновых инспекций. Для расчета степени разбавления и установления зоны распространения вредных веществ, возможности сноса и смыва ядохимикатов и удобрений пользуются сводками гидрометеослужбы об уровне, направлении и скорости течения воды, ветровых волнениях водоема, температуре воздуха и воды, осадках и т. д. Учитывают время и места кормовых и нерестовых миграций рыб. Эти сведения позволяют определить условия, способствовавшие отравлению, и объяснить причины массового поражения того или иного вида рыб, возрастной их группы.