ТУЛЯРЕМИЯ

Возбудитель - Fгаnсisеllа tularensis - мелкая полиморфная аэробная кокко­-бактерия; неподвижна, спор не образует; грамотрицательна.

Материал для исследования: паренхиматозные органы и увеличенные лимфо­узлы от трупов крупных животных; трупы грызунов целиком.

Исследование проводят микроскопически, бактериологически и биологически.

Посевыделают на желточные и кровяные среды с цистином и глюкозои, рН 6,6-7,0. Более эффективной является среда Кундина (см. Возбудитель ту­ляремии). Одновременно высевают на обычные среды для аэробов и анаэробов с целью выявления посторонней микрофлоры.

Техника посева. Асептически вырезают из глубины пораженного ор­гана небольшой кусочек ткани; раскаленным капилляром пастеровской пипетки касаются кусочка фиксируют его на конце капилляра, вводят в пробирку. С плотной средой и втирают материал в поверхность среды. Инкубация при 37⁰С 10-14 дней с ежедневным осмотром.

Микроскопия. Мазки из органов окрашивают по Романовскому в течение 1-1 ½ ч. Клетки возбудителя отличаются от посторонних мелкими размерами и нежной фиолетовой окраской.

Бактериологическое исследование. С появлением роста мазки из культуры окрашивают по Граму и по Романовскому, микроскопируют и делают отсевы для получения чистой культуры. Ее идентификацию проводят: высевами на вышеука­занные специальные и обычные среды (на последних туляремийный микроб не растет), серологически и биологически.

Постановк а пробирочной РА. Двухсуточную культуру снимают петлей, суспендируют в физиологическом растворе и доводят концентрацию до 10 единиц мутности по единому оптическому стандарту (антиген).

Готовят последовательно двукратные разведения диагностической сыворотки от 1 : 25 до 1 : 1600, что выполняют порядком, описанным в разделе Выделение и изучение чистых микробных культур, но объем разведенной сыворотки в каж­дой пробирке должен быть 0,5 мл. Затем в каждую пробирку, начиная с высшего разведения, вносят по 0,5 мл антигена, встряхивают штатив, выдерживают 2 ч при 37⁰С и еще 20-22 ч при комнатной температуре.

Биологическое исследование. Прямыми посевами из патологического мате­риала можно выделить возбудителя только от грызунов. Из организма крупных животных и пушных зверей культуру выделяют после 2-3 «слепых» обогащаю­щих пассажей через белых мышей или морских свиноы. Первый пассаж проводят лутем заражения животных взвесью исходного материала, второй - путем вве­дения суспензии из органов мышей (свинок), убитых через 5-6 суток после за­ражения. При обоих пассажах делают контрольные высевы из паренхиматозных органов. За животными третьего пассажа наблюдают до 15 дней.

Взвесь из кусочков органов и лимфоузлов вводят под кожу или внутрибрю­шинно белым мышам или мороким свинкам по 0,5 мл. Мыши погибают на 3-4 сутки, иногда через 8-12 дней, а свинки- на 4-6 сутки, а при меньшей обсемененности материала - через 8-20 дней.

При вскрытии у мышей обнаруживают плотный инфильтрат в месте инъек­ции взвеси, увеличение селезенки, печени и лимфоузлов. Аналогичные явления 'Отмечают у свинок и, кроме того, у них находят перерождение печени и некро­тические очаги (узелки) в селезенке и легких. Из органов делают посевы вышеописанным способом для получения чистой культуры.

При наличии туляремийной флуоресцирующей сыворотки (производства ИЭМ им. Гамалеи) из взвеси, пригтовленной для посевов, слепых пассажей и биопро­бы, а также из первичных культур и органов зараженных лабораторных живот­ных делают мазки, окрашивают названной сывороткой и проводят люминесцент­ную микроскопию.