Методы диагностики
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Материал для исследования: аборт.плод с оболочками, желудок плода, печень, почки плода, молоко, содержимое гигром. От убитых животных – лимфоузлы, матка, яичники, вымя, семенники и др.
Микроскопия: Методы окраски: по Граму(-), а мазки из патматериала - по Козловскому (красные на зелёном фоне) (Bruc. труднее окрашиваются и хуже отдают воспринятый ими цвет, чем сопутствующая м/ф.); бруцеллы - очень мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) располаг. одиночно, парами и небольшими группами);спор не образуют, имеется небольшая капсула (не имеет диагност.значения); неподвижны.
Культивирование:Бруцеллы плохо растут на простых средах; посев производят на специальные питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3% - ным глицерином, эритрит-агар. Также эффективен посев по 0,2 мл иссл. материала в желточный мешок свежих, неоплодотворённых куриных яиц. После инкубации 5 суток при 37оС яйца вскрывают, набирают пастеровскими пипетками желток и пересевают на плотные и жидкие питат. среды. оптимальная t 37oС; срок - от 15 до 30 дн.
Культуральные свойства:На жидких средах – равномерное помутнение, пристеноч. кольцо, незначит. осадок. На плотных средах – росинчатые. мелкие,выпуклые, прозрачные с ровным краем колонии с голубовато-серым или янтарным оттенком. S-форма, но может быть и R-ф.
Биохимические свойства: Сахаролитические свойства выражены слабо; молоко бруцеллы не свертывают, желатин не разжижают, образуют каталазу. Для дифференциации видов бруцелл по культуральным и биохим. свойствам используют тесты:
· бруцеллы Br.bovis, Br.ovis - микроаэрофилы; их выращивают в атмосфере 10-15% СО2; остальные виды бруцелл – аэробы;
· сероводород образуют Br. suis в меньшей степени Br. abortus.
· виды бруцелл различаются по способности проявлять оксидазную активность, расти в среде, содержащей тионин и основной фуксин
При получении культуры, адаптированной к среде, проводят ее типизацию сыворотками. Однако предварительно проверяют культуру на наличие диссоциации. Ставят РА на предметном стекле: трипафлавин + смыв с 48 часовой агаровой культуры. В норме агглютинации не должно быть.
Часто при бак. диагностике выделяют вакцинные штаммы, которые надо
дифференцировать от патогенных. Вакцинный штамм №19 чувствителен к ихтиолу и пенициллину. Поэтому к средам добавляют эти препараты.
Полевые штаммы растут на этих средах, а вакцинный – нет.