Исследование воздуха

Цель занятия.Ознакомить студентовс микрофлорой воздуха, источниками ее загрязнения патогенной микрофлорой. Студенты должны овладеть методами бактериологического исследования воздуха - методами Коха и Кротова.

Материальное оснащение.Для исследования воздуха: аппарат Кротова, чашки Петри с МПА и средой Чапека, спирт для обработки внутренней поверхности аппарата Кротова.

Воздух является неблагоприятной средой для размножения микроорганизмов. Отсутствие питательных веществ, солнечные лучи и высушивание обусловливают быструю гибель микроорганизмов в воздухе, поэтому микрофлора воздуха не так обильна, как микрофлора почвы и воды.

Состав микрофлоры воздуха очень разнообразен, там встречаются пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), споровые палочки, плесневые грибы и дрожжи. Доказано что в 1 м³ воздуха животноводческих помещений находится до 2 млн. микробов, в том числе и патогенных. Патогенные микроорганизмы попадают в воздух при кашле, отфыркивании и чихании. При этом капли аэрозоли, находящиеся в воздухе, служат источником аэрогенного заражения окружающих. Скорость оседания капель зависит от диаметра аэрозоля.

Бактериальные аэрозоли делят на три фазы. 1. Крупнокапельная фаза с диаметром частиц аэрозоля более 0,1 мм; длительность пребывания таких частиц в воздухе – несколько секунд, капли быстро оседают. 2. Капельно-ядерная фаза, имеющая диаметр частиц 0,1 мм и менее. Частицы длительно находятся в воздухе и рассеиваются на большие расстояния с потоками воздуха. С ней рассеиваются различные микроорганизмы, в том числе и патогенные. 3. Фаза бактериальной пыли имеет частицы разного диаметра от 1 мм до 0,001 мм. Эта фаза имеет наибольшее эпизоотологическое и эпидемиологическое значение, т.к. она длительно находится во взвешенном состоянии и глубоко проникает в дыхательные пути. Аэрогенным путем инфекционные заболевания передаются, главным образом, в закрытых помещениях.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводят для определения количества МАФАнМ (мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) в 1 м³ и качественного состава (наличие санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов). МАФАнМ в воздухе определяют посевом на поверхность МПА, а количество санитарно-показательных микробов (стафилококков и стрептококков) определяют посевом на кровяной и желточно-солевой агар. Для определения наличия плесневых грибов и дрожжей применяют среды Сабуро и Чапека.

Существует много методов бактериологического исследования воздуха. Самыми доступными и чаще применяемыми являются методы Коха и Кротова.

Седиментационный метод Коха.Сутьметода заключается в осаждении микробных частиц и капель аэрозоли на поверхность плотной питательной среды под действием силы тяжести.

Методика: чашки Петри с МПА и средой Сабуро оставляют открытыми на 5-20 мин в классе, в цехах молочного завода, мясокомбината (время экспозиции зависит от предполагаемой загрязненности). Чашки закрывают и помещают в термостат при 30⁰С, если это МПА или кровяной агар, их культивируют в течение 48 часов; если это среда Сабуро – культивирование проводят при 25⁰С в течение 4-7 суток. Затем проводят подсчет выросших колоний бактерий и плесневых грибов во всей чашке.

После подсчета выросших колоний в чашке Петри, определяют количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха по формуле Омелянского, согласно которой предполагается (т.е. это не точный метод), что в чашки с питательной средой площадью 100 см², в течение 5 мин оседает столько микробных клеток, сколько их содержится в 10 л воздуха. Для определения количества бактерий в 1м³ воздуха применяют формулу Омелянского:

 

А . 100 . 1000 . 5

Х = --------------------

в . 10 . Т

где Х – количество микробов в 1 м³ (1000 л) воздуха;

А – число колоний выросших на МПА в чашках;

в – площадь чашки (78 см²);

5 – время экспозиции по правилу Омелянского;

Т – время, в течение которого чашка была открыта;

10 –10 л воздуха по правилу Омелянского;

1000 – 1 м³ воздуха;

100 - 100 см² питательной среды.

Аспирационный метод микробиологического исследования воздуха с применением прибора Кротова основан на использовании ударного действия воздушной струи, протянутой через щель прибора, на поверхность МПА в чашках Петри. Этот метод является более точным, т.к. прибор снабжен микроманометром (или ротаметром), показывающим количество литров посеянного воздуха. Аппарат Кротова – это цилиндрический прибор, внутрикоторого имеется электромотор с центробежным вентилятором. При вращении вентилятора воздух засасывается из исследуемого помещения через узкую клиновидную щель в крышке прибора. Под крышкой прибора находится вращающаяся платформа с открытой чашкой Петри, струя воздуха ударяется о поверхность питательной среды, на которую оседают микроорганизмы из воздуха. Чашки с посевами помещают в термостат на 24-48 ч при 30⁰С, затем подсчитывают количество колоний в чашке и по формуле определяют число микробов в 1м³ воздуха исследуемого помещения:

а . 1000

Х = -----------

в

где Х – число микробов в 1 м³ (1000 л) воздуха;

а - число колоний, выросших на МПА в чашках;

1000 л = 1 м³ воздуха;

в - количество литров воздуха, пропущенного через щель прибора.

Таблица 1