Возбудитель ботулизма

Возбудитель ботулизма - Cl.botulinum вызывает остропротекающий кормовой токсикоз. Заболевание развивается вследствие воздействия ботулинического токсина на организм, характеризуется поражением центральной нервной системы и сопровождается парезами двигательных мышц.

Ботулизм описан в середине XVIII в., его название связано с первым наблюдением заболевания у людей, развившегося в результате употребления в пищу кровяной колбасы (лат. botulus- колбаса). Возбудитель же был открыт в 1896 г. Ван Эрменгемом, который выделил его из зараженной ветчины, а также селезенки человека, погибшего от ботулизма.

Дальнейшее изучение показало, что в природе существует семь сероваров Cl.botulinum (A, B, C, D, E, F, G), которые различаются по антигенной структуре экзотоксинов.

Морфология. Cl.botulinum в окрашенных препаратах имеет вид палочек с закругленными концами длиной 4-9 и шириной 0,6-0,8 мкм. Бактерии располагаются изолировано или парами, иногда в виде коротких цепочек. Микроб подвижен, большинство клеток из старых культур без жгутиков. Образует споры, располагающиеся субтерминально, редко центрально. Палочки со спорами имеют вид теннисных ракеток. Капсулы не образует.

Вегетативные клетки хорошо окрашиваются спиртоводными растворами анилиновых красок, грамположительные в молодых культурах и в препаратах из тканей, в старых культурах – грамотрицательные.

Культивирование. Возбудители ботулизма – строгие анаэробы. Для культивирования применяют специальные среды: глюкозо-кровяной агар Цейсслера, печеночный агар с глюкозой, агар столбиком с глюкозой, среду Китта-Тароцци, бульон Хоттингера под вазелиновым маслом с кусочками мяса или печени и добавлением непосредственно перед посевом 0,5% глюкозы.

На среде Китта-Тароцци образует помутнение, затем появляется осадок и жидкость светлеет, культура издает запах прогорклого масла.

На агаре Цейсслера вырастают прозрачные колонии–росинки величиной в несколько миллиметров с ровными или изрезанными краями и блестящей поверхностью, окруженные зоной гемолиза. Окрашены колонии в слегка коричневатый или серовато-мутный цвет, их середина вогнутая или выпуклая. Крупные колонии более плоские. В пределах одного штамма встречаются колонии нескольких типов. Одни штаммы дают полный гемолиз, другие только обесцвечивают агар. В агаре столбиком колонии имеют форму чечевиц или комочков ваты с уплотненным центром.

Биохимические свойства. Cl.botulinum при посевы на среды с сахарами ферментирует с образованием газа и кислоты: глюкозу, левулезу, мальтозу, глицерин, декстрин, салицин, адонит, инозит и не разлагает галактозу, сахарозу, дульцит, манит, арабинозу и рамнозу. Однако эти свойства непостоянны и не могут служить критерием идентификации микроба и дифференциации его серовариантов.

Бактерии сероваров А и В обладают высокой протеолитической активностью: они полностью переваривают кусочки печени и мышц в жидких средах; протеолитические свойства у серовара F выражены слабее и минимальные у сероваров C, D, E.

Токсинообразование. В анаэробных условиях в организме животных, субстратах растительного и животного происхождения, а также на специальных питательных средах Cl.botulinum синтезирует чрезвычайно активный экзотоксин, относящийся к группе нейротоксинов. Самый сильный токсин вырабатывает серовар А.

Устойчивость. Вегетативные клетки возбудителя малоустойчивы к воздействию различных факторов внешней среды.

Температура 80⁰С убивает их через 30 мин, кипячение – через 2-5 мин. Резистентность спор высока. В высушенном состоянии они могут сохранять жизнеспособность десятилетиями. К нагреванию споры более устойчивы в среде, содержащей значительное количество жира. Наличие в среде ионов железа, кальция, высокая концентрация сахарозы также повышают устойчивость к нагреванию.

Патогенность. Наиболее чувствительны к ботулиническому токсину лошади, у них болезнь чаще вызывается токсинами серовара В, реже – сероваров А и С. Крупный рогатый скот поражается токсинами сероваров С и D, овцы и козы также чувствительны к токсинам С и D; у коз ботулизм встречается чрезвычайно редко, но они очень чувствительны к токсину С. Свиньи в естественных условиях проявляют к ботулизму значительную устойчивость, однако экспериментально заболевание можно вызвать сероварами токсина, причем животные наиболее чувствительны к сероварам B и F, известны случаи заболевания свиней, обусловленные токсином А. Собаки, кошки, волки и другие хищники, серые крысы резистентны к заболеванию.

К ботулизму восприимчивы птицы, известно более 36 видов птиц, у которых зарегистрирована эта болезнь, и среди них куры, индейки, утки, гуси, чайки, голуби. Ботулизм у птиц вызывается преимущественно токсинами сероваров С, А и В. Рыбы, амфибии и рептилии к ботулизму практически невосприимчивы.

Восприимчив к ботулизму и человек, в качестве этиологических факторов заболевания, у человека обнаружены клостридии сероваров А, В и Е.

Лабораторная диагностика. Биологическое исследование осуществляют для обнаружения ботулинических токсинов. Материал растирают и разводят, как и в предыдущем случае, затем для экстрагирования выдерживают при комнатной температуре 1-2 ч, пропускают через ватно-марлевый фильтр, можно центрифугировать при 3000 об/мин 30 мин. Цитратную кровь и сыворотку не разводят, но исследуют сразу после взятия, т.к. токсин в них разрушается очень быстро.

Для обнаружения токсина берут четырех белых мышей, по 16-18 г весом каждая. Двум из них вводят исследуемый материал по 0,5 мл внутрибрюшинно или внутривенно (в хвостовую вену), две другие остаются контрольными, им вводят предварительно прогретый в течение 30 мин при температуре 100⁰С экстракт. При наличии ботулинического токсина две первые мыши гибнут через 1-2 дня, контрольные остаются живы.

Типизацию токсина проводят в реакции нейтрализации с гомологичными антитоксическими сыворотками согласно прилагаемому к ним наставлению.

Иммунитет и средства специфической профилактики. При ботулизме иммунитет антитоксический. У восприимчивых животных естественного иммунитета к ботулизму нет. Описаны случаи индивидуальной устойчивости к ботулиническому токсину людей и животных. Перенесенное заболевание также не оставляет иммунитета ни у человека, ни у животных.

Доказана возможность создания стойкого антитоксического иммунитета к ботулизму путем искусственной вакцинации специфическим анатоксином. Для специфической профилактики ботулизма используют анатоксины, преципитированные квасцами или сорбированные на гидрате окиси алюминия.

В США используют ассоциированную вакцину против вирусного энтерита и ботулизма норок.

Для медицинских целей выпускают антитоксическую сыворотку.

Обезвреживание условно годного мяса. Тушки и внутренние органы птицы больной ботулизмом нужно рассматривать как опасные для здоровья человека. Убой на мясо птиц больных или подозрительных по заболеванию ботулизмом, запрещается.