Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

В последние годы появилась такая модификация ПЦР, как ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Ей предшествовал вариант с флуоресцентной детекцией ПЦР-продукта в конечной точке: в реакционную смесь добавляли специфический флуоресцентный зонд и далее через 30-40 циклов определяли уровень флуоресценции.

В реакционную смесь при ПЦР-РВ также добавляется или специфический флуоресцентный зонд (TaqMan и др.), или интеркалирующий краситель (SYBR GreenI и др.), но в данном случае амплификатор позволяет детектировать флуоресценцию каждый цикл и наблюдать рост количества ПЦР-продукта в каждой пробирке, и далее по имеющейся калибровке определять точное исходное количество образца в пробе (рис. 6.7).

Прогресс в этой области позволяет использовать несколько независимых зондов в реакции, проводить одновременную детекцию нескольких ПЦР-продуктов и создавать ПЦР-системы мультиплексного формата.