Лабораторная работа

1. Определение витамина C в растительном материале.

 

Оборудование:	1.	Колбы на 50 или 100 мл.
	2.	Пипетки на 1 мл и 2 мл.
	3.	Ступка.
	4.	Воронка.
	5.	Марлевый фильтр.
Реактивы:	1.	1% раствор НСl.
	2.	1% раствор щавелевой кислоты.
	3.	0,001Н раствор дихлорфенолиндофенола.
	4.	Растительный материал.
	5.	Дистиллированная вода.
	6.	Стеклянный порошок.

 

Принцип метода. Метод основан на способности аскорбиновой кислоты восстанавливать краситель 2,6-дихлорфенолиндофенол. Окисленная форма красителя обладает окраской (в кислой среде – розовой), восстановленная форма – бесцветна. Количество витамина C определяют, титруя исследуемый подкисленный раствор дихлорфенолиндофенолом до появления розовой окраски. Пока в растворе есть аскорбиновая кислота, краситель обесцвечивается, когда вся аскорбиновая кислота будет окислена, титруемый раствор приобретает розовую окраску из-за появления окисленной формы красителя.

Ход работы. Навеску растительного материала измельчают и тщательно растирают в ступке с небольшим количеством толченого стекла и 5 мл 1% HCI. По мере растирания прибавляют еще 5 мл HCI и смесь переносят в колбу на 50 мл. Остаток в ступке смывают в ту же колбу 1% раствором щавелевой кислоты, доводя объем смеси до метки. Содержимое колбы перемешивают и фильтруют. Отбирают нужное количество мл фильтрата (см. таблицу) в чистую колбу и титруют 0,001H раствором дихлорфенолиндофенола до появления розовой окраски, не исчезающей 30 секунд.

 

Растительный материал	Навеска (г)	Фильтрат (мл)	Коэффициент пересчета
Картофель
Капуста
Шиповник

 

Расчет содержания аскорбиновой кислоты проводят по формуле:

A х 0,088 х K = мг витамина C в 100 г материала, где A – количество

мл раствора дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование исследуемого раствора, 0,088 – количество мг аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 H раствора дихлорфенолиндофенола, K – коэффициент пересчета на 100 г растительного материала, учитывающий навеску материала и количество мл фильтрата, взятого для титрования.

 

2. Определение витамина C в моче

Оборудование:	1.	Колба на 50 или 100 мл.
	2.	Пипетки на 1 мл и 5 мл.
Реактивы:	1.	3% раствор уксусной кислоты..
	2.	0,001Н раствор дихлорфенолиндофенола.
	3.	Моча.
	4.	Дистиллированная вода.

Ход работы. В колбу наливают 1 мл мочи, 7 мл дистиллированной воды, 3 мл 3% раствора уксусной кислоты и титруют смесь 0,001 H раствором дихлорфенолиндофенола до появления розовой окраски, устойчивой 30 сек.

Для расчета содержания витамина C в суточной моче используют формулу: A х 0,088 х 1500 = мг витамина C в сутки, где 1500 – суточный диурез в мл, A и 0,088 – то же, что в предыдущей работе.

В норме с мочой за сутки выделяется от 20 до 40 мг витамина C.

 

Диагностическое значение

Определение содержания витамина C в моче дает представление о запасах этого витамина в организме. У детей его уровень понижается при цинге, а также острых и хронических инфекционных заболеваниях.