Гибридизация нуклеиновых кислот in situ

1) Клетки колоный, выросшие после трансформации перепечатывают на нитроцеллюлозный фильтр и инкцубируют до появления на нем колоний клеток

2) Клетки на фильтре лизируют в условиях, вызывающих денатурацию ДНК

3) На обработанных фильтрах проводят гибридизацию адсорбировавшейся ДНК исследуемых клонов с радиоактивно высокомеченной целевой ДНК (или РНК)

4) Клоны, в которых произошла гибридизация нуклеиновых кислот, обнаруживаются автографически.

Радиоиммуноанализ белков in situ

В основу метода положена способность молекул иммуноглобулинов связываться с полистиролом или поливинилом. Кроме того, исследуемый белок (продукт экспрессии генов эукариот и вирусов в бактериальных клетках) должен иметь не менее двух антигенных детерминант и может связывать по крайней мере две разные молекулы иммуноглобулинов, присутствующих в перепарате поликлональных антител, полученных на целевой белок.

Бактериальные клетки лизируют и прижимают к поверхности среды поливиниловый диск с адсорбированными на нем специфическими антителами. При этом на диске происходит иммуносорбция антигена. После промывания диска на него наносят 125I-меченные антитела к белку искомого гена. Колонии, в которых образовался комплекс антиген-антитело, выявляют радиоавтографически.

Функциональная комплементация

В основе метода лежит достижение правильной экспрессии клонированной генетической информации.

Например, мутант E. coli hisB не способен синтезировать гистидин. После введения рекДНК (фаг λ с фрагментами хромосомной ДНК дрожжей сахаромицетов) образуется гибрид, способный расти на среде без гистидина.

Методы клонирования ДНК