ДИАГНОСТИКА КАЛИЦИВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Диагностика калицивирусной инфекции основывается на клинико-эпидемиологических данных. Для норовирусyого и саповирусного гастроэнтерита характерно острое начало, субфебрильная или нормальная температура, слабовыраженные симптомы общей интоксикации, в структуре поражения ЖКТ преобладают повтор­ные рвоты и в меньшей степени водянистая диарея. Важную роль играют и данные эпиданамнеза. В то же время постановка диагноза калицивирусной инфекции только по клинической симптоматике, особенно при спорадической заболеваемости, не представляется возможной. Для этиологического подтверждения диагноза необ­ходимы лабораторные исследования.

Лабораторная диагностика КВИ основывается на нескольких методических подходах, таких как электронная микроскопия, иммуноферментный анализ и молекулярные методы исследования, среди которых оптимальным является полимеразная цепная реакция (ГЩР). Калицивирусы сложно культивировать на культурах клеток, поэтому вирусологические методы для диагностики не используются. Материа­лом для исследования служат фекалии, рвотные массы. Исследования, направленные на обнаружение вируса или вирусных антигенов жела­тельно проводить в 1-4 сутки болезни.

В 1970-80-х гг. определение калицивирусов базировалось ис­ключительно на использовании возможностей метода электронной микроскопии (ЭМ). Просвечивающая электронная микроскопия является единственным диагностическим методом, позволяющим одновременно выявить весь спектр патогенных кишечных вирусов, в связи с чем продолжает интенсивно использоваться в крупных диагностических центрах. С помощью ЭМ калицивирусы могут быть идентифицированы по характерной морфологии. Для визуализации вируса этим способом требуется его концентрация в образце стула примерно 106-107/мл, и, таким образом, эта техника может быть полезна исключительно для анализа образцов, собранных во время ранней стадии заболевания, когда выделяется довольно большое количество вирусных частиц. Главным недостатком электронной микроскопии является недостаточная чувствительность исследования при низкой концентрации вирусов. Возможно применение иммунной электронной микроскопии с использованием специфических моноклональных антител, образующих иммунные комплексы с антигеном вируса, которые после негативного контрастирования легче обна­руживаются.

Самым оптимальным методом диагностики являются молекулярно-генетические методы исследования с помощью ПЦР- прямого метода молекулярной диагностики, позволяющего выявлять РНК норовирусов и саповирусов как в клиническом материале, так и в объектах окружающей среды, включая пищевые продукты. Основное отличие метода- высокая чувствительность и специфичность. Высокая чув­ствительность ПЦР (возможно определение 102-104 вирус! 1ых частиц / мл в образце стула) безусловно предъявляет столь же высокие требования к профессионализму и аккуратности при проведении анализов, по возможности избегая кросс-контаминации от образца к образцу в процессе пробоподготовки. На чувствительность и специфичность данного метода влияет широкий круг факторов, среди которых методика очистки вирусной РНК. праймеры, использующиеся для амплификации, а также метод, используемый для интерпретации результатов.

Иммуноферментные тест-системы для определения антигенов и антител не позволяют выявлять все разновидности калицивирусов, что связано с высокой вариабельностью поверхностных белков, ис­пользуемых для создания подобных диагностикумов. В настоящее время ведутся активные разработки иммуноферментных тест-систем для одновременной детекции антигенов норовирусов генотипов 1 и 2, а также саповирусов. Уже появились первые сообщения о коммерчески доступных иммуноферментных тестах.