Гельминтоовоскопия».

Продолжительность занятия – 90 мин.

Актуальность темы: Определяется широким распространением гельминтозов на Европейском Севере и других регионах России, и в связи с этим, необходимостью формирования у студентов и будущих врачей правильного подхода к выбору методов лабораторной диагностики и материала исследования, направляемого в лабораторию.

Мотивация занятия: Знания, полученные в ходе изучения данной темы, будут необходимы при изучении таких клинических дисциплин как терапия, педиатрия, инфекционные болезни, а также в практической деятельности врача.

Цель занятия:

В ходе изучения данной темы студенты должны знать:

- биологическое обоснование выбора материала исследования;

- классификацию методов лабораторных исследований в зависимости от особенностей жизненных циклов гельминтов (прямые и косвенные), от характера биологического материала и целей исследования,

- постановку основных рекомендованных в практику качественных и количественных методов копроовоскопии.

В ходе изучения данной темы студенты должны уметь:

- провести исследование одним из качественных методов: флотации или нативного мазка под целофаном по Като,

- дифференцировать яйца различных гельминтов, наиболее часто встречающихся у человека.

 

Задание на самоподготовку:

Используя базовые знания, учебную литературу для мед. ВУЗов, дополнительную научную литературу и лекции, к занятию необходимо знать следующие вопросы:

1. Методы лабораторной диагностики гельминтозов, их классификацию.

2. Биологическое обоснование выбора материала и метода его исследования.

3. Этапы проведения исследований по методам Калантарян, Като, Грехема и др.

4. Современные принципы профилактики гельминтозов.

 

Учитывая наличие сходных симптомов у различных заболеваний, невозможно поставить правильный окончательный диагноз без лабораторно-клинических исследований. Гельминтозы не являются исключением из этого общего правила.

Выбор материала для гельминтологического исследования и метода исследования зависит от:

1. Особенностей жизненного цикла предполагаемого паразита и стадии его развития в организме человека.

2. Локализации паразита в организме человека.

3. Характера биологического материала, в котором могут быть обнаружены расселительные стадии паразита или косвенные доказательства его присутствия.

Материалом для исследования могут служить выделения из организма – продукты жизнедеятельности человека, вместе с которыми выделяются расселительные стадии паразита (фекалии, моча, мокрота), а также ткани (кровь, мышцы, кожа) и секреты (желчь, поджелудочный сок).

Методы гельминтологического исследования делятся на прямые, основанные на обнаружении расселительных стадий в биологическом материале (материале исследования) и косвенные, основанные на обнаружении в сыворотке крови антител к паразиту, что является косвенным доказательством его присутствия у данного человека. Для обнаружения антител в сыворотке применяются различные иммунологические (чаще серологические) методы: РНГА, ИФР, РЛА и др.

Прямые методы гельминтологического исследования классифицируют:

- в зависимости от характера исследуемого материала (копроовоскопические, исследования выделений из органов – секретов, исследования тканей, специальные методы (исследования соскобов));

- в зависимости от способа исследования - на микроскопические и макроскопические (визуальное исследование материала);

- в зависимости от целевого назначения – на качественные, позволяющие определить наличие паразита, его видовую принадлежность, экстенсивность инвазии в очагах, и количественные, позволяющие определить интенсивность инвазии.

Арсенал тех и других методов достаточно широк.

 

Общие принципы борьбы с гельминтозами, основанные на сочетании терапии и профилактики, были заложены акад. К.И. Скрябиным еще в 1925 г. (дегельминтизация и девастация). В настоящее время борьба с этими инвазиями ведется в следующих направлениях:

1. Активное выявление и дегельминтизация инвазированных, т.е. мероприятия, направленные на источник инвазии.

Проводится: а) ежегодное обследование декретированных контингентов,

б) профессиональных групп повышенного риска,

в) массовое (выборочное) обследование в очагах инвазий.

2. Охрана внешней среды от загрязнения яйцами и личинками гельминтов, ее обеззараживание, т.е. мероприятия, направленные на факторы передачи.

а) благоустройство населенных мест в соответствии с санитарными требованиями;

б) правильное содержание и выгул (выпуск) животных;

в) охрана водоемов и источников водоснабжения от поступления инвазионного материала;

г) уничтожение синантропных грызунов;

д) обеззараживание сточных вод, нечистот, бытовых отходов.

3. Обеспечение ветеринарно-санитарного надзора является важным звеном в профилактике биогельминтозов.

а) ветеринарно-санитарный контроль на убойных пунктах;

б) дегельминтизация собак, борьба с бродяжничеством домашних (собак, кошек) животных.

4. Широкая пропаганда медицинских знаний среди населения.

Каждый врач должен помнить: «Высокая санитарная грамотность населения в отношении гельминтозов – залог высокой санитарной культуры в стране», т.е. борьба с инвазиями и инфекциями имеет не только медицинское, но и социальное значение.

 

 

Вопросы для самоконтроля и ситуационные задачи:

1. Для чего применяются лабораторные методы диагностики гельминтозов?

2. На чем основан выбор метода лабораторного исследования?

3. Для обнаружения каких гельминтов применяются методы копроовоскопии?

4. Какие методы применяются для лабораторной диагностики энтеробиоза, трихинеллеза, описторхоза, филяриатозов?

5. Для выявления каких гельминтов применяются методы иммунодиагностики? На чем они основаны?

6. Почему яйца остриц редко обнаруживаются в фекалиях?

7. При исследовании фекалий методом Като лаборант обнаружил яйца тениид. Как провести дифференциальную диагностику свиного и бычьего цепней?

8. При анализе у больного в моче обнаружены слизистые и кровянистые выделения. Здесь же найдены яйца с шипом на одном из полюсов. О наличии какого гельминта говорят эти данные?

 

Оснащение занятия: микроскопы, набор посуды, предметные и покровные стекла, материал для исследования, наборы препаратов яиц, рисунки, таблицы.

На занятии необходимо выполнить следующие работы:

КОПРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (МЕТОДЫ ФЛОТАЦИИ)

 

Качественные методы.

Работа № 1. Метод Фюллеборна.

Возможности метода: Метод позволяет выявить экстенсивность инвазии (% инвазированных в обследуемом контингенте) или подтвердить отсутствие (наличие) инвазии у обследуемого человека.

Постановка метода: фекалии суспензируют во флотационном растворе NaCl,

имеющим больший удельный вес (1,18), чем яйца гельминтов. Навеску фекалий помещают в раствор , растирают стеклянной палочкой . Крупные частицы убирают. Раствор доливают до образования выпуклого мениска и покрывают предметным стеклом. Оставляют на 45 минут , после чего стекло снимают и просматривают под микроскопом пленку и осадок.

 

Модификация метода Фюллеборна по Калантарян (МЕТОД КАЛАНТАРЯН)

Способ основан на замене раствора поваренной соли насыщенным раствором NaNO3, удельный вес которого 1,39. Способ Калантарян эффективнее и предпочтительнее по сравнению с методом Фюллеборна. Техника обработки фекалий, снятия и просмотра пленки та же, что при методе Фюллеборна, но пленку следует снимать через 20-30 минут после отстаивания взвеси фекалий. Исходя из более высокого удельного веса раствора селитры, осадок обычно не исследуют.

Работа № 2. Метод Като (метод толстого мазка под целлофаном).

Возможности метода: метод отличается значительной простотой постановки и высокой эффективностью выявления большинства инвазий.

Постановка метода: Навеску фекалий величиной с рисовое зерно помещают на предметное стекло и накрывают целлофаном, выдержанном в растворе Като (смесь глицерина, фенола и малахитовой зелени). Резиновой пробкой навеску растирают до получения толстого мазка. Выдерживают приготовленный препарат 20-25 минут (для просветления) и микроскопируют.

 

Количественные методы.

Работа № 3 Метод Столла.

Возможности метода: метод позволяет выявить интенсивность инвазии (количество паразитов у одного человека), что имеет значение при проведении дегельминтации или контроля за ее эффективностью.

Постановка метода: в колбу со стеклянными бусами и двумя нанесенными делениями – 56 и 60 мл. – наливают до первой отметки 0,1% NaOH раствор. Затем добавляют фекалий, пока уровень жидкости не достигает отметки 60. Взвесь взбалтывают и набирают пипеткой 0,075 мл ( в этом объеме содержится 0,005г фекалий). Пробу переносят на предметное стекло, накрывают покровным (лучше с нанесенной сеткой) стеклом и подсчитыают под микроскопом количество яиц. Умножив полученное число на 200, получают количество яиц, содержащихся в 1г фекалий. Интенсивность инвазии можно определить с помощью таблицы.

Степень инвазии Количество яиц в 1г Число гельминтов
  Слабая Умеренная Тяжелая Очень тяжелая   Аскарида 2-10000 10001-50000 50001-200000 свыше 200000   1-10 11-50 51-200 свыше 200
  Очень слабая Слабая Умеренная Тяжелая Очень тяжелая Власоглав 1-2000 2001-7500 7501-37500 37501-75000 свыше 75000   1-25 26-100 101-500 501-1000 свыше 1000  

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ.

Работа № 4 Методы исследования перианально-ректальных соскобов.

Методы перианально-ректальных соскобов применяются для лабораторной диагностики таких инвазий, как энтеробиоз и тениаринхоз, возбудители которых откладывают яйца на поверхности кожных покровов, в области перианальных складок.

а). Метод тампона: Спичкой со смоченным в 50% глицерине ватным тампоном соскабливают содержимое складок и помещают в пенициллиновый флакон. В лаборатории мазок переносят на предметное стекло и микроскопируют.

б). Метод липкой ленты по Грехему: Кусочек липкой ленты длиной 4 см приклеивают липкой поверхностью к перианальным складкам, после чего снимают и приклеивают к предметному стеклу. Препарат микроскопируют.

ИССЛЕДОВАНИЕ ТКАНЕЙ И ВЫДЕЛЕНИЙ ИЗ ОРГАНОВ.

Работа № 5. Метод исследования мышц на трихинеллез.

Материалом исследования на трихинеллез являются мышцы больного или остатки мяса, послужившие причиной заражения человека. Взятие материала на исследование (биопсия) производится хирургом. В лаборатории мышцу разделяют на очень мелкие кусочки и помещают между двумя стеклами в специальный компрессорий. Под микроскопом видны спирально свернутые личинки, находящиеся в лимонообразных или округлых капсулах между мышечными волокнами.

Работа № 6. Обнаружение яиц и личинок в дуоденальном содержимом,

мокроте, моче и крови.

В дуоденальном содержимом могут быть обнаружены яйца фасциолы, описторхиса, клонорхиса, анкилостомид и других гельминтов, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы, в двенадцатиперстной кишке и желчном пузыре.

Из доставленной порции дуоденального содержимого и желчи выбирают хлопья, которые просматривают под микроскопом. Оставшуюся жидкость смешивают с равным объемом серного эфира, тщательно взбалтывают и центрифугируют. Яйца гельминтов или личинки стронгилоидоса переходят в осадок, из которого готовят препараты на предметных стеклах.

В мокроте могут быть обнаружены яйца шистозом, парагонимуса, мигрирующие личинки аскарид и других нематод.

Всю порцию мокроты сначала просматривают с помощью лупы, выбирая инструментом подозрительные частицы, а затем готовят мазки на предметных стеклах и микроскопируют их.

В моче обнаруживают яйца и личинки паразитов мочеполовых органов, а также яйца гельминтов, попавшие сюда с промежности.

Мочу отстаивают в течении не менее 30 мин., затем сливают верхний слой, оставляя 10-15 мл осадка. Эту часть мочи переносят в пробирки, а осадок микроскопируют.

В крови больных гельминтозами могут быть обнаружены микрофилярии. Готовят обычные мазки или толстую каплю. Просмотр их делать лучше после окраски по Романовскому. При определении видовой принадлежности личинок учитывают их размеры, форму и строение оболочек.

 

ГЕЛЬМИНТООВОСКОПИЯ.

Работа № 7. Яйца паразитических червей (готовые препараты).

Просмотреть под микроскопом препараты яиц сосальщиков, ленточных и круглых червей (печеночного, ланцетовидного и кошачьего сосальщиков, широкого лентеца и тениид; аскариды, власоглава и острицы). Отметить их отличительные особенности (форма, окраска, размеры). Затем, пользуясь диагностикумом, произвести определение яиц в препаратах со смесью яиц различных гельминтов.

 

Вопросы к итоговому занятию по разделу:

«Биологические основы паразитизма и трансмиссивных заболеваний»:

 

1. Предмет паразитологии, определение и содержание. Роль отечественных ученых в развитии паразитологии (Е.Н. Павловский, К.И. Скрябин, В.А. Догель и др.). Основные разделы паразитологии.

2. Классификация и примеры биотических связей.

3. Паразитизм как экологический феномен. Понятие «среда обитания» для паразитов. Распространенность паразитизма в животном мире. Эволюция и классификация паразитизма (подтвердить примерами).

4. Понятие о жизненных циклах паразитов. Феномен смены хозяев: дефинитивные, промежуточные, дополнительные и резервуарные хозяева, их определения для паразитов с различным уровнем организации.

5. Морфофизиологические адаптации к паразитическому образу жизни (показать на примерах).

6. Взаимоотношения в системе «паразит – хозяин» на уровне особей. Патогенное действие паразитов на организм человека.

7. Понятие об инвазии. Способы инвазирования паразитами человека и животных. Понятие об инвазионных стадиях паразитов, источники инвазии и факторы передачи возбудителей алиментарных и контактных инвазий.

8. Эпидемиологическая классификация инвазий, предложенная ВОЗ. Классификация инвазий по Е.Н. Павловскому. Очаговый характер распространения инвазий. Типы очагов и факторы, обусловливающие их формирование.

9. Гельминтология как раздел паразитологии, ее цели и задачи. Распространение гельминтозов на Земном шаре, в России и на Европейском Севере.

10. Эпидемиологическая классификация гельминтозов по К.И. Скрябину, Р.С. Шульцу и Е.С. Шульману.

11. Гельминты южных широт и факторы, обусловливающие их распространение.

12. Гельминтозы детей. Способы заражения ими и факторы передачи этих инвазий. Диагностика и профилактика данных гельминтозов.

13. Методы лабораторной диагностики гельминтозов, их биологическое обоснование.

14. Современные принципы профилактики и борьбы с гельминтозами в России. Понятие о дегельминтизации и девастации (К.И. Скрябин).

 

Перечень контрольных микропрепаратов:

1. Печеночный сосальщик.

2. Кошачий сосальщик.

3. Ланцетовидный сосальщик.

4. Яйца печеночного, кошачьего и ланцетовидного сосальщиков.

5. Гермафродитные членики свиного и бычьего цепней.

6. Зрелые членики свиного и бычьего цепней.

7. Финны свиного и бычьего цепней.

8. Яйца тениид.

9. Карликовый цепень.

10. Членик широкого лентеца.

11. Поперечный срез головки широкого лентеца.

12. Яйца широкого лентеца.

13. Поперечный срез тела самки аскариды.

14. Власоглав: самец и самка.

15. Острица: самец и самка.

16. Яйца аскариды, острицы и власоглава.

17. Личинка трихинеллы.

 

Вопросы к микропрепаратам:

- определить препарат;

- основные диагностические признаки данного препарата;

- систематическое положение гельминта (тип, класс, представитель - на русском и латинском языках);

- локализация гельминта в организме человека;

- стадии жизненного цикла (последовательно);

- хозяева гельминта:

а) окончательные

б) промежуточные

в) дополнительные;

- вызываемое заболевание;

- способы заражения;

- факторы передачи;

- стадия, инвазионная для человека;

- лабораторная диагностика;

- принадлежность к эпидемиологической группе:

а) по классификации К.И. Скрябина и др.

б) по классификации ВОЗ;

- источники инвазии.

 

ТРАФАРЕТ ДЛЯ ОТВЕТА ПО ПРОГРАМИРОВАННОМУ КОНТРОЛЮ

ПО ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ.

 

  I II III IY Y YI YII YIII IX X XI XII XIII XIY