Методика одновременного определения группы крови с помощью стандартных сывороток и стандартных эритроцитов (перекрестный способ)

Результат реакции со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами групп Исследуемая кровь принадлежит к группе
0αβ(I) Aβ(II) Bα(III)
- - - - - - 0(I)
- + +  
+ - +  
+ - + A(II)
- - +  
+ + -  
+ + - B(III)
- + -  
+ + +  
+ + + AB(IV)
- - -  

Условия определения такие же, как и при определении группы крови с помощью стандартных сывороток, только одновременно на другой пла­стине в лунки размещают капли сыворотки больного (0,1 мл).

 

При перекрестном определении группы крови также возможны че­тыре различных комбинации положительных и отрицательных реакций:

1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, а в ка­плях со стандартными эритроцитами имеется агглютинация во второй и третьей группах, то исследуемая кровь принадлежит к первой груп­пе.

2. Если в каплях со стандартными сыворотками произошла агглютина­ция в первой и третьей группах, а в каплях со стандартными эритро­цитами только в третьей группе, то исследуемая кровь принадлежит ко второй группе.

3. Если в каплях со стандартными сыворотками агглютинация произош­ла в первой и второй группах, а в каплях со стандартными эритроци­тами только во второй, то исследуемая кровь принадлежит к третьей группе.

4. Если в каплях со стандартными сыворотками агглютинация произош­ла во всех каплях, а в каплях со стандартными эритроцитами ее нигде нет, то исследуемая кровь, возможно, принадлежит к четвертой груп­пе. Для этого подтверждения проводится контрольное исследование с сывороткой четвертой группы. Если и в этой капле отсутствует агг­лютинация, то исследуемая кровь утвердительно принадлежит к чет­вертой группе.

Для этого из вены больного берут 3-4 мл крови и центрифугируют. К каплям сывороток добавляют стандартные эритроциты 0(I), А(II), В(III) групп крови в виде маленьких капель (0,01 мл), получается соотношение сыворотки и эритроцитов 10:1. Капли сывороток и крови перемешивают. Через пять минут добавляют каплю изотонического раствора хлористого натрия в капли, где произошла агглютинация, и проводят оценку результа­тов исследования. Определение группы крови при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов одновременно (перекрестным спо­собом), повышает достоверность исследования группы крови. Результаты такого исследования представлены в таблице 4.


 

3.3.3. Причины ошибок при определении группы крови и меры их предупреждения

Ошибки при определении группы крови в основном связаны с тем или иным отступлением от изложенных правил:


• ошибочный порядок расположения сывороток или эритроцитов в шта­тивах;

• ошибочный порядок нанесения их на пластинку;

• неправильное соотношение количества сыворотки и крови в каплях;

• не использование в процессе работы изотонического раствора хлористо­го натрия;

• недостаточное время наблюдения за реакцией агглютинации (менее пяти минут);

• не проведение контрольного исследования с сывороткой четвертой группы;

• применение одних и тех же мокрых пипеток и палочек для смешивания капель;

• проведение исследования недоброкачественными сыворотками;

• несоблюдение температурного режима.

Допущенные ошибки могут привести к двум неправильным резуль­татам: либо агглютинация не происходит, а фактически она должна иметь место, либо агглютинацию находят там, где ее не должно быть.

Отсутствие агглютинации может быть:

1. При позднем проявлении реакции агглютинации или когда она слабо выражена. Это имеет место при малой активности стандартных сы­вороток или когда эритроциты исследуемого лица обладают слабой агглютиногенностью. При сочетании этих факторов агглютинация может вооб­ще не проявиться. В таких случаях необходимо заменить сыворотки на бо­лее активные (уже проверенные), и наблюдать за реакцией не менее пяти минут.

2. При избытке крови. Если взята слишком большая капля, то не все эритроциты агглютинируются. Капля остается интенсивно окрашенной кровью, тем самым агглютинация скрывается. Необходимо соблюдать строгое соотношение крови и сыворотки (1:10).

3. При высокой температуре (выше +25°С), когда определение груп­пы крови проводится в жаркое время. В таких ситуациях необходимо пла­стинку охладить.

Ложная агглютинация может произойти:

1. Когда эритроциты исследуемой крови складываются в "монетные столбики", которые невооруженным глазом можно принять за агглютина­цию. Во избежание этой ошибки необходимо добавление изотонического раствора хлористого натрия с последующим покачиванием пластинки - "монетные столбики" исчезают.

2. Когда исследуемые эритроциты дают феномен ауто- или пан­агглютинации. Во избежание этой ошибки не следует допускать определе­ния группы крови при температуре ниже +15°С, и обязательно проводить исследование с сывороткой четвертой группы крови.

3. Когда используют недоброкачественную сыворотку, которая вы­зывает неспецифическую агглютинацию. Во избежание этой ошибки необ­ходимо тщательно проводить макроскопическую оценку пригодности сы­вороток и не применять их, если они мутные, содержат хлопья, имеют при­знаки высыхания и инфицирования.

4. Когда пластинка со смесью сыворотки и крови неподвижна. В этом случае эритроциты оседают на дно, образуя отдельные скопления и симулируя агглютинацию. Во избежание этой ошибки необходимо в про­цессе исследования периодически покачивать пластинку, перемешивая эритроциты с сывороткой.

Во всех случаях нечеткого, сомнительного результата или при про­явлениях неспецифической агглютиногенности эритроцитов, что может иметь место при аутоиммунной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных, циррозе печени, септическом состоянии больных и других патологических состояниях, необходимо проводить повторные исследования с другими стандартными сыворотками, более высокой ак­тивности, определять группу крови перекрестным способом или проводить определение группы крови с помощью цоликлонов.