Окраска по методу Грама

Метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки.

Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.

По Граму бактерии окрашивают анилиновыми красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются и воспринимают дополнительную окраску – фуксина Пфейффера.

Фиксированный на огне мазок окрашивают генциан-, метил- или кристаллвиолетом 2 мин. (положив на мазок фильтровальную бумагу, пропитанную краской).
Наливают раствор Люголя на 2 мин. Мазок приобретает серо-бурую окраску.
Сливают раствор Люголя.
Для обесцвечивания вносят несколько капель 70° спирта на 2 мин.; следят, чтобы он равномерно распределился по поверхности всего мазка.
Препарат промывают водой.
Докрашивают фуксином Пфейффера 2 мин.
Бумажку снимают, препарат промывают водой.
Промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Результат окраски: грамположительные бактерии Грам (+), окрашиваются основной краской в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные бактерии Грам (−), воспринимая дополнительную окраску, приобретают ярко-малиновый цвет.

_________________________________________________________________________________

Раствор Люголя— раствор йода в водном растворе йодистого калия_

Окраска по Козловскому (бруцелл в патологическом материале).

Мазок фиксируют, красят 2-проц. водным раствором сафранина с подогреванием до появления первых пузырьков газа, промывают водой, дополнительно красят 1-проц. раствором малахитовой зелени 0,5—1 мин. Бруцеллы яркокрасные, фон зеленый.

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Бруцеллёз— зоонозная инфекция, передающаяся от больных животных человеку, характеризующаяся множественным поражением органов и систем организма человека. Возбудитель заболевания — группа микроорганизмов рода бруцелл. Патогенными для человека являются три: возбудитель бруцеллёза мелкого рогатого скота (Brucella melitensis), возбудитель бруцеллёза крупного рогатого скота (Brucella abortus), возбудитель бруцеллёза свиней (Brucella suis)